白小青, 張鳳鳴, 陳 英, 涂 志

(1.重慶市畜牧科學(xué)院；2.農(nóng)業(yè)部養(yǎng)豬科學(xué)重點實驗室；3.重慶市養(yǎng)豬工程技術(shù)研究中心，重慶 402460)

分群分階段精細化管理是現(xiàn)代養(yǎng)豬的一大特點.規(guī)?；i場通常依據(jù)生理狀態(tài)將母豬分為空懷期、妊娠期和哺乳期3個時期，而妊娠期又可細分為妊娠初期、妊娠中期和妊娠后期3個階段.科學(xué)認識和了解不同時期不同階段母豬的生理特點和免疫特性是實現(xiàn)精細化管理的前提和基礎(chǔ).動物血液的生理生化及免疫指標能直觀地反映機體的生理狀態(tài)、健康狀況、代謝機能及免疫狀態(tài)，是獸醫(yī)臨床診斷的重要依據(jù).因此，研究不同生理狀態(tài)下母豬血液生理生化及免疫指標的變化情況及其差異，對于探究母豬的階段化生理生化及免疫特性，科學(xué)指導(dǎo)養(yǎng)豬生產(chǎn)有著重要的意義.以往圍繞豬血液生理生化特性的研究，盡管涉及的地方豬品種廣泛，但研究內(nèi)容多集中于性別間的差異方面，研究結(jié)果也各不相同.如血液生理指標中的紅細胞數(shù)方面，在榮昌豬中公豬高于母豬[1]，在滇南小耳豬中公豬低于母豬[2]，而在藏豬[3]和太湖豬[4]等豬品種中性別間無顯著差異；血液生化指標中的葡萄糖含量方面，在榮昌豬中公豬高于母豬[1]，在安慶六白豬中母豬高于公豬[5]，而在莆田黑豬[6]、五指山豬[7]、合作豬[8]和皖南花豬[9]中未表現(xiàn)顯著的性別差異.由此可見，同一血液生理生化指標性別間的比較具有明顯的品種特異性.豬的免疫特性研究結(jié)果表明， 7～11周時豬的免疫系統(tǒng)已發(fā)育完全[10]，不同豬種間部分免疫性狀存在明顯差異[11]，且部分免疫性狀與生產(chǎn)性狀呈弱的正相關(guān)或負相關(guān)[12].目前，針對母豬不同生理狀態(tài)下血液生理生化及免疫指標的差異化研究較少，僅限于磷、血清白蛋白等[13-14]少量指標.本試驗擬通過對不同生理狀態(tài)下榮昌豬母豬血液生理生化及免疫指標進行比較分析，從而獲得榮昌豬母豬的階段化生理生化及免疫特性基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，旨在為榮昌豬母豬的精細化管理提供參考.

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物 在重慶市畜牧科學(xué)院榮昌豬國家級資源保護場保種核心群中隨機選取56頭7月齡以上的成年榮昌豬種母豬為試驗動物.

1.1.2 儀器與設(shè)備 主要儀器與設(shè)備有Sysmex XT-2000i型全自動血液分析儀(日本東亞Sysmex公司)和Hitachi 7020型全自動生化儀(日本日立公司).

1.2 試驗設(shè)計

將56頭母豬按照生理狀態(tài)劃分為4組：哺乳期(產(chǎn)仔20 d至哺乳41 d)8頭、妊娠初期(配種5 d至妊娠27 d)12頭、妊娠中期(妊娠36～79 d)27頭、妊娠后期(妊娠80～103 d)9頭.妊娠期和哺乳期母豬分別飼養(yǎng)于妊娠舍和分娩舍.兩舍結(jié)構(gòu)類似，舍長均為46 m，舍寬均為11.2 m，頂棚均為保溫彩鋼，填充密度為18 kg·m-3，未吊頂.兩舍均為雙列式開放性豬舍，每舍有32個欄位，欄位寬4.5 m、長2.5 m.兩舍均裝有溫度和濕度采集系統(tǒng)，每隔半小時記錄一次溫濕度.妊娠期母豬按消化能為12.75 MJ·kg-1、粗蛋白含量為13.85%的營養(yǎng)水平配制玉米—豆粕型日糧，4～5頭為1欄小群飼養(yǎng).哺乳期母豬按消化能為12.99 MJ·kg-1、粗蛋白含量為15.92%的營養(yǎng)水平配制玉米—豆粕型日糧，單欄飼養(yǎng).試驗豬均自由采食，自由飲水.飼養(yǎng)管理及免疫程序按豬場統(tǒng)一規(guī)定執(zhí)行.

1.3 血樣采集

試驗豬分兩批連續(xù)兩天于上午7：00—9：00空腹前采血.兩天采血期間分娩舍的平均溫度分別為23.18和23.26 ℃，平均相對濕度分別為94.40%和92.02%；妊娠舍的平均溫度分別為24.44和24.28 ℃，平均相對濕度分別為86.12%和84.44%.前腔靜脈采血4～5 mL，其中的2 mL以EDTA.K2為抗凝劑制備抗凝血用于血液生理指標測定，其余非抗凝血經(jīng)1 000×g離心20 min后分離獲得血清，用于生化和免疫指標的測定.

1.4 指標測定

抗凝血送至重慶市榮昌區(qū)人民醫(yī)院檢驗科測定白細胞數(shù)、紅細胞數(shù)、血紅蛋白含量、紅細胞壓積、紅細胞平均體積、紅細胞平均血紅蛋白含量、紅細胞平均血紅蛋白濃度、紅細胞分布寬度標準差、紅細胞分布寬度變異系數(shù)、血小板數(shù)、血小板平均體積、血小板壓積和血小板分布寬度共13項血液生理指標.

按照血清常規(guī)操作測定谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性、谷草轉(zhuǎn)氨酶活性、總蛋白含量、白蛋白含量、堿性磷酸酶活性、葡萄糖濃度、尿素濃度、總膽固醇濃度和甘油三酯濃度共9項生化指標及免疫球蛋白G含量和免疫球蛋白M含量2項免疫指標.

1.5 數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用SPSS 19.0軟件，以生理狀態(tài)為固定因子，在一般線性模型下進行單因素多因變量方差分析.數(shù)據(jù)以平均值±標準差表示，采用最小顯著差數(shù)法(LSD)進行組間多重比較.

2 結(jié)果與分析

2.1 不同生理狀態(tài)下榮昌豬母豬的血液生理指標

不同生理狀態(tài)下榮昌豬母豬血液生理指標的測定結(jié)果見表1.主體間效應(yīng)檢驗結(jié)果表明，13項生理指標中，白細胞數(shù)和紅細胞分布寬度變異系數(shù)分別達到極顯著水平(P<0.01)，紅細胞分布寬度標準差達到顯著水平(P<0.05)，其余指標均為不顯著(P>0.05).多重比較結(jié)果表明:白細胞數(shù)以妊娠初期為最多，妊娠后期為最少，且妊娠初期極顯著多于妊娠中期和妊娠后期(P<0.01)；紅細胞分布寬度變異系數(shù)以妊娠后期為最大，妊娠初期為最小，且妊娠后期和妊娠中期均顯著大于哺乳期(P<0.05)，極顯著大于妊娠初期(P<0.01)；紅細胞分布寬度標準差以妊娠后期為最大，妊娠初期為最小，且妊娠后期顯著大于哺乳期(P<0.05)，極顯著大于妊娠初期(P<0.01).

表1 不同生理狀態(tài)下榮昌豬母豬的血液生理指標1)Table 1 Blood physiological parameters of Rongchang sows under different physiological status

1)同列數(shù)據(jù)后附不同大寫字母者表示差異極顯著(P<0.01)，附不同小寫字母者表示差異顯著(P<0.05)，附相同小寫字母者表示差異不顯著(P>0.05).

2.2 不同生理狀態(tài)下榮昌豬母豬的血清生化指標

不同生理狀態(tài)下榮昌豬母豬血清生化指標的測定結(jié)果見表2.主體間效應(yīng)檢驗結(jié)果表明，9項生化指標中，谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性、白蛋白含量和堿性磷酸酶活性分別達到顯著水平(P<0.05)，葡萄糖濃度和總膽固醇濃度分別達到極顯著水平(P<0.01)，其余指標均為不顯著(P>0.05).多重比較結(jié)果表明:谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性以妊娠后期為最高，妊娠初期為最低，且妊娠后期顯著高于妊娠中期和哺乳期(P<0.05)，極顯著高于妊娠初期(P<0.01)；白蛋白含量以妊娠后期為最大，妊娠中期為最小，且妊娠后期顯著大于哺乳期(P<0.05)，極顯著大于妊娠初期和妊娠中期(P<0.01)；堿性磷酸酶活性以妊娠后期為最大，妊娠初期為最小，且妊娠后期顯著大于妊娠中期和哺乳期(P<0.05)，極顯著大于妊娠初期(P<0.01)；葡萄糖濃度以哺乳期為最高，妊娠初期為最低，且哺乳期極顯著高于妊娠后期、妊娠中期和妊娠初期(P<0.01)；總膽固醇濃度以妊娠后期為最高，哺乳期為最低，且妊娠后期顯著高于妊娠中期和妊娠初期(P<0.05)，極顯著高于哺乳期(P<0.01)，同時，妊娠中期顯著高于哺乳期(P<0.05).

表2 不同生理狀態(tài)下榮昌豬母豬的血清生化指標1)Table 2 Blood serum biochemical parameters of Rongchang sows under different physiological status

1)同列數(shù)據(jù)后附不同大寫字母者表示差異極顯著(P<0.01)，附不同小寫字母者表示差異顯著(P<0.05)，附相同小寫字母者表示差異不顯著(P>0.05).

2.3 不同生理狀態(tài)下榮昌豬母豬的血清免疫指標

不同生理狀態(tài)下榮昌豬母豬血清免疫指標的測定結(jié)果見表3.主體間效應(yīng)檢驗結(jié)果表明，免疫球蛋白M含量達到極顯著水平(P<0.01)，而免疫球蛋白G含量為不顯著(P>0.05).多重比較結(jié)果表明，免疫球蛋白M含量以妊娠后期為最高，哺乳期為最低，且妊娠后期顯著高于妊娠初期(P<0.05)，極顯著高于哺乳期(P<0.01).同時，妊娠中期和妊娠初期均極顯著高于哺乳期(P<0.01).

表3 不同生理狀態(tài)下榮昌豬母豬的血清免疫指標1)Table 3 Blood serum immune parameters of Rongchang sows under different physiological status

1)同列數(shù)據(jù)后附不同大寫字母者表示差異極顯著(P<0.01)，附不同小寫字母者表示差異顯著(P<0.05)，附相同小寫字母者表示差異不顯著(P>0.05).

3 討論

本試驗測定的榮昌豬母豬13項血液生理指標中，生理狀態(tài)對白細胞數(shù)等3項指標有顯著影響，而對其他指標無顯著影響.白細胞是非均一的血細胞群，包括中性粒細胞、嗜堿粒細胞、嗜酸粒細胞、單核細胞和淋巴細胞共5類細胞，其主要功能是參與機體防御反應(yīng).相對于非孕期而言，孕期婦女血液白細胞數(shù)會出現(xiàn)生理性的升高，且不同孕期間呈現(xiàn)先下降再上升的周期性變化規(guī)律[15].本試驗結(jié)果表明，榮昌豬母豬的白細胞數(shù)在妊娠初期處于最高水平，至妊娠中期則顯著下降，而妊娠后期和哺乳期均穩(wěn)定在妊娠中期水平.這與妊娠30 d母豬白細胞數(shù)高于妊娠90 d母豬的獸醫(yī)臨床檢測結(jié)果[16]一致.另有研究表明，妊娠期和泌乳期榮昌豬母豬的白細胞數(shù)均大于空懷期[17].

作為表征紅細胞體積異質(zhì)性的參數(shù)，紅細胞體積分布寬度是紅細胞體積大小離散程度的客觀反映.紅細胞體積分布寬度通常以紅細胞體積分布寬度標準差和紅細胞體積分布寬度變異系數(shù)的方式來表示.本試驗結(jié)果表明，與妊娠初期比較，榮昌豬母豬紅細胞體積的異質(zhì)性在妊娠后期顯著增加，而在哺乳期又回歸到妊娠初期水平.臨床大數(shù)據(jù)分析表明，孕期婦女隨著孕期的增加，紅細胞體積分布寬度變異系數(shù)常呈漸進性增大，而紅細胞數(shù)和血紅蛋白含量等呈進行性降低，妊娠期貧血的比率顯著增高[18].隨著妊娠期增加，胎兒需鐵量增多及孕期血容量增加，儲存鐵逐漸耗盡，骨髓產(chǎn)生缺鐵紅細胞(低色素小紅細胞)進入外周血，進而導(dǎo)致紅細胞體積分布寬度上升，而紅細胞平均體積下降，孕婦最終呈現(xiàn)小細胞不均一性貧血[19].

本試驗測定的血清生化指標中，谷草轉(zhuǎn)氨酶活性、總蛋白含量、尿素濃度和甘油三酯濃度在榮昌豬母豬不同妊娠階段及哺乳期均無顯著不同，谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性、血清白蛋白含量、堿性磷酸酶活性、葡萄糖濃度和總膽固醇濃度在不同生理狀態(tài)下均有顯著的差異.潘紅梅等[20]在二元雜種母豬不同妊娠日齡間(30、60、90、110 d)曾發(fā)現(xiàn)谷草轉(zhuǎn)氨酶活性和甘油三酯濃度無顯著差異，且谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性、血清白蛋白含量、堿性磷酸酶活性和葡萄糖濃度也無顯著差異.本試驗中，與妊娠初期和妊娠中期比較，榮昌豬母豬在妊娠后期的谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性處于最高水平，而哺乳期又回到妊娠初期水平.血清白蛋白含量、堿性磷酸酶活性、葡萄糖濃度和總膽固醇濃度也呈現(xiàn)相似的變化規(guī)律.王宗元等[14]曾測定不同生理狀態(tài)下太湖豬母豬的血清蛋白含量，發(fā)現(xiàn)相對于后備期后期母豬而言，妊娠初期的血清總蛋白含量和血清白蛋白含量顯著下降，而至妊娠中期顯著上升，妊娠后期和泌乳期均維持在較高水平.

堿性磷酸酶是一種含鋅的水解酶，能水解各種磷酸單酯，是骨代謝常用的生化標志物之一[21].血清中的堿性磷酸酶來源于骨骼和肝臟，分別由成骨細胞和肝膽小管細胞合成、分泌.相對于非孕期而言，正常妊娠孕早期婦女血清堿性磷酸酶活性顯著下降，孕中期又上升至非孕期水平，而孕后期又顯著上升，即正常妊娠婦女血清堿性磷酸酶活性隨著孕期的增加而顯著上升[22].本試驗結(jié)果表明，榮昌豬母豬血清堿性磷酸酶活性隨著妊娠期的增加有上升的趨勢，但僅在妊娠后期達到顯著水平.另有堿性磷酸酶熱保留率試驗證實，妊娠后期(產(chǎn)前30 d至分娩)至哺乳期(分娩至產(chǎn)后30 d)母豬血清堿性磷酸酶的主要來源存在一個往復(fù)的變化過程，即母豬產(chǎn)前堿性磷酸酶從主要來源于肝臟逐漸變?yōu)橹饕獊碓从诠趋?產(chǎn)后又逐漸從主要來源于骨骼變?yōu)閬碓从诟闻K[23].

本試驗中，血清免疫球蛋白G含量在榮昌豬母豬不同妊娠階段及哺乳期均無顯著不同，該結(jié)果與二元雜種母豬不同妊娠日齡間無顯著差異的結(jié)果[20]相一致.免疫球蛋白M是初次體液免疫反應(yīng)中最早出現(xiàn)的免疫球蛋白，在感染初期發(fā)揮著先鋒免疫作用[1].皖南花豬母豬各日齡階段的血清免疫球蛋白M含量均顯著大于同期的公豬[10]，此研究結(jié)果提示性別是影響免疫球蛋白M含量的一個重要因素.本試驗中，榮昌豬母豬妊娠期各階段的血清免疫球蛋白M含量均顯著大于哺乳期，而妊娠后期顯著大于妊娠初期，此結(jié)果提示生理狀態(tài)也是影響免疫球蛋白M含量的另一重要因素.

4 結(jié)論

系統(tǒng)研究榮昌豬母豬血液生理生化及免疫指標在不同生理狀態(tài)下的變化情況及其差異，證實生理狀態(tài)顯著影響榮昌豬母豬部分血液生理生化及免疫指標.