代 蕾，王金秀，方 莉，章 瑤，李亞文，謝國信，周啟轉(zhuǎn)，李布勇

（海南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，海南?？?571100）

A 型塞尼卡病毒（Senecavirus，SVA）也稱塞尼卡谷病毒（Seneca Valley virus，SVV），屬于RNA 病毒科塞尼卡病毒屬[1]，于2002年在美國被首次分離到。2007年，美國從加拿大進(jìn)口的187頭豬出現(xiàn)水皰病癥狀，發(fā)病率高達(dá)80%，最終確診為SVA 感染[2]。2014年以來，全球多個(gè)國家確診發(fā)生豬SVA 感染。2015年9月以來，美國中西部多個(gè)地區(qū)的豬群發(fā)生水泡性疫情，新生仔豬病死率達(dá)30%～70%，最終確診為SVA 感染[3]?，F(xiàn)已證實(shí)，豬SVA 感染能夠引起原發(fā)性水泡病，導(dǎo)致豬鼻吻、蹄部冠狀帶的水泡病變，同時(shí)伴有跛行、厭食、嗜睡和發(fā)燒等臨床表現(xiàn)[4-5]。2015年，我國廣東省發(fā)現(xiàn)了由SVA 感染導(dǎo)致的豬水泡性疾病[6]。2017年我國福建省和河南省再次發(fā)生豬SVA 感染案列[5]。近兩年，豬SVA 感染在全球多地出現(xiàn)，并已傳入我國。為了解海南省豬群中的SVA 感染和分布情況，2018年采集海南省15個(gè)市（縣）的豬血清樣品，使用間接ELISA 方法進(jìn)行SVA 抗體檢測(cè)，以期為海南省的SVA 防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

2018年5—7月，從海南省15個(gè)市（縣）中，隨機(jī)選取112個(gè)規(guī)模場(chǎng)和散養(yǎng)戶作為采樣點(diǎn)，根據(jù)各場(chǎng)點(diǎn)實(shí)際存欄量，按照10%～50%的采樣率，共采集2 547份豬血清樣品，-20 ℃保存或4 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試劑

SVA 間接ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒，由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所提供。

1.3 主要儀器

離心機(jī)、微量加樣器，購自德國Eppendorf公司；iMARK 型酶標(biāo)儀、自動(dòng)洗板機(jī)，購自美國BIO-RAD 公司。

1.4 檢測(cè)方法

嚴(yán)格按照SVA 間接ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒說明書進(jìn)行操作：統(tǒng)計(jì)樣品數(shù)量，確定所需SVA 抗原包被ELISA 板（條）數(shù)量；陽性對(duì)照、陰性對(duì)照分別測(cè)量2孔，待測(cè)樣品測(cè)1孔；在抗原包被ELISA 板中，加入50 μL 30倍稀釋的待檢血清，以及未稀釋的陰、陽性對(duì)照血清各50 μL，充分振蕩混勻，在37 ℃恒溫箱孵育30 min；用PBST洗滌5次，加入50 μL 兔抗豬IgG-HRP 工作液，37 ℃恒溫箱孵育30 min；再用PBST 洗滌5次，拍干；每孔加入50 μL TMB 液，37 ℃恒溫箱孵育顯色（12±1）min；每孔快速加入50 μL 終止液，用酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm 波長的吸光值（OD450）。

1.5 判斷標(biāo)準(zhǔn)

OD450陰性對(duì)照平均值≤0.2，并且OD450陽性對(duì)照平均值-OD450陰性對(duì)照平均值≥0.9，則試驗(yàn)結(jié)果成立。根據(jù)公式S/P=（樣品OD450-陰性對(duì)照OD450平均值）/（陽性對(duì)照OD450平均值-陰性對(duì)照OD450平均值），計(jì)算S/P值。當(dāng)S/P＜0.4時(shí)，判定為陰性；S/P≥0.4時(shí)，判定為陽性。

2 結(jié)果與分析

2.1 總體情況

在15個(gè)市（縣）112個(gè)采樣場(chǎng)點(diǎn)中，檢出陽性場(chǎng)點(diǎn)56個(gè)，場(chǎng)點(diǎn)陽性率為50.0%；在采集的2 547份豬血清樣品中，檢出抗體陽性278頭份，樣品陽性率為10.9%（表1）?？傮w來看，海南省豬群中的SVA 流行面較廣。

2.2 區(qū)域分布

檢測(cè)結(jié)果（表1）顯示：海南省15個(gè)市（縣）的SVA 抗體場(chǎng)點(diǎn)陽性率在14.3%～100%之間，其中場(chǎng)點(diǎn)陽性率小于20%的有4個(gè)市（縣），超過50% 的有6個(gè)；SVA 抗體樣品陽性率在1.0%～31.7%之間，其中小于10%的有9個(gè)市（縣），而超過20%的有2個(gè)。從上述結(jié)果可以看出，海南省各市（縣）的SVA 感染情況并不均衡，存在一定的區(qū)域差異。

表1 2018年海南省SVA 抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3 場(chǎng)群分布

2.3.1 不同養(yǎng)殖場(chǎng)點(diǎn)在檢出的56個(gè)陽性場(chǎng)點(diǎn)中，共有規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)41個(gè)，場(chǎng)點(diǎn)陽性率為61.2%（41/67）；散養(yǎng)戶15個(gè)，場(chǎng)點(diǎn)陽性率為33.3%（15/45）。在檢出的278份陽性樣品中，規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)陽性216份，樣品陽性率為10.4%（216/2 068）；散養(yǎng)戶陽性62份，樣品陽性率為12.9%（62/479）。具體結(jié)果見表2。從上述結(jié)果可以看出，SVA 在規(guī)模場(chǎng)的感染面高于散養(yǎng)戶。

2.3.2 不同養(yǎng)殖階段從不同階段豬群的SVA 抗體陽性率統(tǒng)計(jì)結(jié)果（表3）看，仔豬SVA 抗體陽性率最高（20.5%），其次是母豬（15.5%）、后備豬（13.5%）和公豬（10.7%），育肥豬最低（5.9%）。

表2 不同養(yǎng)殖場(chǎng)點(diǎn)SVA 血清學(xué)檢測(cè)檢測(cè)結(jié)果

表3 不同階段豬群SVA 抗體檢測(cè)結(jié)果

3 討論

SVA 傳播速度和范圍在不斷加大，2014年開始全球多個(gè)國家相繼發(fā)生SVA 感染疫情[3]，2016年后疫情又陸續(xù)擴(kuò)散至加拿大、美國、巴西、泰國和哥倫比亞等國家[7-8]。2015年我國廣東省報(bào)道了SVA 感染導(dǎo)致的豬水泡性疾病[3]，2016—2017年又有一些省份從患病豬群中分離到SVA[9-10]。SVA在我國傳播快速，現(xiàn)已確定傳播到海南省。

本研究對(duì)海南省15個(gè)市（縣）112個(gè)規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)和散養(yǎng)戶豬群采集血清進(jìn)行SVA 抗體檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)場(chǎng)點(diǎn)陽性率為50.0%，樣品陽性率為10.9%，說明SVA 不僅已擴(kuò)散至海南省，并且在快速擴(kuò)散流行，因此應(yīng)注意加強(qiáng)監(jiān)測(cè)和防控。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，海南省不同市（縣）的SVA 感染情況存在較大差異，兩個(gè)交通樞紐城市（L 市和K 市）及其周邊城市（F、G、N 市）陽性率較高，SVA 感染情況最為嚴(yán)重，說明人流、物流對(duì)SVA 的傳播存在影響，因此應(yīng)加強(qiáng)對(duì)豬群移動(dòng)的檢疫監(jiān)管。從不同養(yǎng)殖階段豬群的檢測(cè)結(jié)果來看，規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)的場(chǎng)點(diǎn)陽性率高于散養(yǎng)戶，但樣品陽性率低于散養(yǎng)戶。這其中可能與散養(yǎng)戶采樣數(shù)量偏少有關(guān)，因此應(yīng)該考慮到樣本偏倚造成的誤差，真實(shí)情況及其原因需要進(jìn)一步開展調(diào)查確認(rèn)。

SVA 是一種新發(fā)病，豬對(duì)其易感。SVA 感染引起的仔豬病死率和感染率均很高，成年豬通常帶毒而不表現(xiàn)臨床癥狀，而亞臨床感染的成年豬應(yīng)該是豬群中危險(xiǎn)的污染源。目前SVA 的傳播方式尚不清楚，為了防控SVA 的進(jìn)一步傳播，一定要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，提高生物安全水平，并且做好SVA的主動(dòng)監(jiān)測(cè)和追索研究工作。目前SVA 還未大范圍流行，因此在現(xiàn)有條件下如何有效控制SVA 進(jìn)一步傳播已經(jīng)成為一個(gè)緊迫任務(wù)。

4 結(jié)論

本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，SVA 已擴(kuò)散至整個(gè)海南省，防控形勢(shì)較為嚴(yán)峻；交通樞紐地區(qū)和規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)的SVA 流行面相對(duì)較廣，仔豬和種豬群中的SVA流行情況較嚴(yán)重。因此，海南省應(yīng)加強(qiáng)SVA 監(jiān)測(cè)和相關(guān)流行病學(xué)研究，制定相應(yīng)防控措施，控制SVA 流行和散播。