胡永倩 ，趙景利，崔基賢，程淑晶，王德強，趙怡雯，楊 卓，蒼真?zhèn)?，王承功，于漢勛

（1.大連市現代農業(yè)生產發(fā)展服務中心，遼寧大連 116037；2.長海縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所，遼寧長海 116500；3.遼寧省農業(yè)發(fā)展服務中心，遼寧省動物醫(yī)學研究院，遼寧沈陽 110164）

奶牛副結核病是由副結核分枝桿菌（M.aviumsubsp.paratuberculosis，MAP）引起的慢性消化道疾病，又稱副結核性腸炎[1]。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為須通報動物疫病[2]。本病以頑固性腹瀉、漸進性消瘦、腸黏膜增厚并形成皺褶和病牛出現“豌豆湯”樣稀便為特征，潛伏期可長達1～2年。由于本病潛伏期長，病程也長，并且在臨床上很容易被誤診為其他細菌類腹瀉性疾病，使得病牛得不到及時有效的醫(yī)治，并且一旦出現臨床癥狀很難醫(yī)治。由于病牛反復腹瀉，導致體重下降和產奶量降低，對奶牛場戶造成了嚴重的經濟損失。為掌握大連市奶牛場副結核病流行狀況，初步掌握該地區(qū)奶牛場從業(yè)人員對副結核病防控知識的了解情況和行為特點，對大連市11家奶牛場的奶牛副結核病血清流行率展開了調查。

1 方法

1.1 抽樣設計

1.1.1 目標群和研究群大連市現有10個涉農區(qū)、市、縣，共有奶牛規(guī)模養(yǎng)殖場11家，主要分布在瓦房店、普蘭店和金普新區(qū)。奶牛養(yǎng)殖模式全部為規(guī)模飼養(yǎng)，共存欄8 708頭。本次調查的目標群為大連市全部存欄奶牛，研究群為全市11個奶牛場的奶牛。

1.1.2 樣本量計算采用預估流行率的抽樣策略[4]，設定95%的置信水平、4%的可接受誤差、16%的預期流行率，應用Win Episcope 2.0軟件分別計算每個奶牛場的抽樣量。每場實際抽樣數量根據場主需求和現場實際進行調整。

1.1.3 抽樣方法群內按系統(tǒng)隨機抽樣。根據每場抽樣量，為每個奶牛場計算抽樣間隔，按牛舍編號順序，從1號舍進門處左側第1頭奶牛開始，嚴格按照抽樣間隔抽取樣本。

1.1.4 真實血清流行率計算將基于檢測結果計算的表觀流行率帶入公式（1），計算大連市每個奶牛場的個體真實血清流行率。

式中，TP 為真實流行率，AP 為表觀流行率，Se 為試驗敏感性，Sp 為試驗特異性。根據公式（2）計算95%CI，根據公式（3）計算群敏感性。

式中，HSe 為群敏感性，Hap 為表觀群流行率，n為樣本量。根據公式（4）計算群特異性群特異性。

式中，HSp 為群特異性，Sp 為試驗特異性，n為樣本量。根據公式（5）計算真實群流行率（THp）。

1.2 實驗室檢測

1.2.1 檢測方法將采集的全血分離血清，采用ELISA 方法進行抗體檢測。

1.2.2 試劑 副結核分枝桿菌抗體檢測試劑盒（Mycobacterium ParatuberculosisAntibody Test Kit）：IDEXX 公司產品，批號為6116，試驗敏感性（Se）為78%，特異性（Sp）為99%。

1.3 個體感染有關風險因素分析

設計“樣品信息采集表”，在采樣時填寫。采集表內容包括，樣品來源奶牛的年齡、胎次、臨床癥狀等。以檢測結果為依據，應用SPSS 20.0軟件，以單因素分析方法，計算患病風險比（relative risk，RR），識別潛在的奶牛副結核病感染風險因素。

1.4 從業(yè)人員“知、信、行”初探

設計“奶牛副結核病現場問卷調查表”。為了解大連市奶牛養(yǎng)殖場戶對奶牛副結核病相關知識的掌握情況和防控意愿，設計了6個問題，包括“是否聽說過奶牛副結核病，是否了解奶牛副結核病在生產中危害程度，是否了解奶牛副結核病的臨床癥狀，是否知道奶牛副結核病的唯一感染途徑是消化道，是否應該做奶牛副結核病的防控工作，是否有必要做奶牛副結核病的檢測工作”。采樣的同時開展問卷調查，用Microsoft Office 2010匯總分析數據。

2 結果

2.1 血清流行率

大連市各奶牛場的奶牛副結核病流行情況有所不同，平均場群表觀流行率為90.91%（10/11），對每個場戶分別計算群敏感性、群特異性后取平均值，計算出場群真實流行率為100%，其中N11場為陰性，N9場奶牛全部為陽性，剩余9個奶牛場的奶牛均有不同程度的感染，經Fisher 確切檢驗，發(fā)現差異不顯著（P＞0.05）。大連市奶牛副結核病個體血清陽性率為14.20%，考慮到每個場的存欄比例，對檢測陽性率進行間接標準化，計算得出標化后的大連市奶牛副結核病個體血清表觀流行率為14.27%（95%CI：13.31%～15.22%），根據公式（1）計算得出真實個體流行率為17.23%（95%CI：15.99%～18.74%）。每個場的真實個體流行率計算結果見表1。

表1 大連市奶牛副結核病檢測情況統(tǒng)計

2.2 風險因素分析

2.2.1 年齡 各年齡段均有陽性牛，其中0～2歲奶牛群體中的副結核病陽性數最高，超過2歲奶牛群體中的副結核病陽性數出現下降（表2），患病風險比RR=1.58（95%CI：1.31～1.91），表明0～2歲奶牛感染副結核病的風險是2歲以上奶牛的1.58倍，因此年齡是奶牛感染副結核病的風險因素之一。

表2 不同年齡奶牛副結核病檢測結果 單位：份

2.2.2 胎次 大連市奶牛產仔數在1～8個之間，各胎次均檢測到副結核病陽性牛，其中0～3胎次的陽性數較多，超過4胎次的陽性數逐漸下降，RR=1.76（95%CI：1.42～2.19），表明0～3胎次奶?；几苯Y核病的風險是4胎及以上奶牛的1.76倍，因而胎次也是奶?；几苯Y核病的風險因素之一。

表3 奶牛副結核病檢測結果 單位：份

2.2.3 臨床特征對奶牛結核病與腹瀉癥狀的關聯進行了初步研究，結果發(fā)現有腹瀉癥狀奶牛的副結核病陽性數明顯高于無癥狀奶牛（表4），RR=78.96（95%CI：53.49～116.57），表明發(fā)生腹瀉癥狀奶?；几苯Y核病的風險是未發(fā)生腹瀉奶牛的78.96倍，因此奶牛腹瀉是奶牛發(fā)生副結核病的重要風險因素，這也說明奶牛副結核病是引發(fā)大連市奶牛腹瀉的主要原因之一。

表4 有無腹瀉癥狀奶牛的副結核病檢測結果 單位：份

2.3 奶牛養(yǎng)殖場戶相關知識掌握情況

與大連市奶牛養(yǎng)殖場工作人員訪談結果顯示：40%的工作人員沒有聽說過奶牛副結核病，但90%的人員認為應該做好奶牛副結核病防控工作；80%的人員認為有必要開展檢測，40%的工作人員了解奶牛副結核病對生產的危害；70%的工作人員對該病的感染途徑不了解，在聽說過該病的工作人員中，有70%了解該病的臨床癥狀。

3 討論

目前，副結核病在全球分布較為廣泛。英國、冰島、澳大利亞、美國和加拿大等奶業(yè)發(fā)達國家，均將此病列為奶牛重大疫病，但該病在國內尚未引起普遍關注。近年來，隨著養(yǎng)牛規(guī)模的擴大，奶牛副結核病的傳播開始加速，對大連市畜牧業(yè)的健康發(fā)展構成一定的威脅。本研究顯示，大連市11個奶牛場中有10個奶牛場存在抗體陽性牛，全市個體流行率為17.23%（95%CI：15.99%～18.74%），高于研究報道的內蒙古、黑龍江、湖北、四川、安徽、江蘇6個省份1.22%～8.00%的陽性率[5]，證明該病在大連市的防控形勢較為嚴峻，呈現地方性流行趨勢。隨著養(yǎng)牛業(yè)的快速發(fā)展和牛只的頻繁交易，該病可能會繼續(xù)傳播蔓延，因此需高度重視。

本研究也表明，年齡、胎次都是奶牛副結核病感染的重要風險因素。犢牛及青年奶牛多發(fā)，提示各牛場應嚴格做好生物安全工作，在引進奶牛時嚴格檢疫，防止引進陽性牛、隱性感染牛。另外，牛場應定期進行副結核病監(jiān)測，及時隔離或淘汰陽性牛。本研究還發(fā)現，奶牛副結核病也是引發(fā)大連市奶牛腹瀉癥狀的主要原因之一。

從養(yǎng)牛場戶對奶牛副結核病相關防控知識掌握情況看，有的牛場雖然對此病有認識，但采取的防治措施有限，隔離措施不到位。因沒有特效藥物，缺少有效疫苗，所以對奶牛的結核病防治有一定困難。調查結果說明，大連市奶牛場對副結核病的認知程度不高，且大部分規(guī)模場對奶牛副結核病的危害不甚了解，因此獸醫(yī)部門應該加大宣傳和干預力度，增強奶牛場工作人員對副結核病的判斷力，從而提高養(yǎng)殖場防控副結核病的能力。

從調查結果可以看出，大連市發(fā)生奶牛副結核病的養(yǎng)殖場比例很高，若不采取進一步防控措施，則感染的奶牛將繼續(xù)在群內傳播奶牛副結核病，繼而造成更大經濟損失。

4 結論

本次調查發(fā)現：大連市奶牛副結核病流行率較高，流行較為嚴重；年齡、胎次是奶牛副結核病感染的重要風險因素，奶牛腹瀉與奶牛副結核病相關聯；奶牛場戶對奶牛副結核病認知程度不高，對該病的危害了解不多。因此，大連市需重視對奶牛副結核病的防控，采取綜合防控措施，阻止本病的繼續(xù)蔓延，并在有條件的場戶開展凈化；各奶牛場應嚴格做好生物安全工作，在引進奶牛時嚴格檢疫，防止引進陽性牛、隱性感染牛；獸醫(yī)部門應該加強科普宣傳，增強奶牛場工作人員對副結核病的判斷力，提高其防范能力。