劉洪盛 皮鳳娟 張慶蓮

摘要：目的優(yōu)選紅麻凝膠膏提取工藝。方法以羥基紅花黃色素A，鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量以及干浸膏得率為考察指標(biāo)，考察加水量，提取時間和提取次數(shù)對提取工藝的影響。結(jié)果最佳提取工藝為加10倍量水，提取3次，每次提取1 h。結(jié)論該優(yōu)化的提取工藝條件穩(wěn)定可行，重復(fù)性好，適合于該制劑的大生產(chǎn)。

關(guān)鍵詞：紅麻凝膠膏;正交實驗;提取工藝

中圖分類號：R2842文獻標(biāo)志碼：A文章編號：1007-2349（2019）11-0077-03

消腫活血散為本院著名院內(nèi)制劑，它是本院一種外用散劑（俗稱糊藥）。其主要功效為活血化瘀，消腫止痛，廣泛應(yīng)用于本院骨傷科，外科等科室，其療效獨特，毒副作用小，在病員中有較高知名度[1]。但實際應(yīng)用中存在膏體粗糙不細膩，膏體不易清洗，微生物限度易檢查超標(biāo)，質(zhì)量難以控制等缺點[2]?，F(xiàn)準(zhǔn)備將消腫活血散改進成凝膠膏劑，應(yīng)用于閉合四肢軟組織損傷，凝膠膏的研制和臨床應(yīng)用，能克服原劑型缺點，使藥物有效成分透皮快速吸收，提高生物利用度，增強療效且攜帶方便，更容易被廣大患者接受。經(jīng)查閱文獻[3-4]，該散劑以紅花、麻黃為君藥，紅花中羥基紅花黃色素A，麻黃中的鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿具備鎮(zhèn)痛、消腫、化淤多種功效。故以羥基紅花黃色素A，鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿含量及干膏得率為指標(biāo)，運用正交實驗篩選最佳提取工藝。現(xiàn)報道如下。

1儀器與材料

FA2004型電子天平（上海安亭電子儀器廠）;ZDHW調(diào)溫電熱套（北京中興偉業(yè)儀器有限公司）;DZF-1B真空干燥箱（上海躍進醫(yī)療器械有限公司）;恒溫水浴鍋

鹽酸偽麻黃堿對照品（批號171237-201510），鹽酸麻黃堿對照品（批號171241-201809），羥基紅花黃色素A對照品（批號111637-201810）（中國食品藥品檢定研究院）;所用試劑均為分析純;水為純化水。

麻黃，紅花等藥材（購自康美藥業(yè)有限公司），由瀘州市中醫(yī)醫(yī)院主任中藥師張世波鑒定為正品。

2方法與結(jié)果

21鹽酸偽麻黃堿，鹽酸麻黃堿，羥基紅花黃色素A含量測定方法的建立

211色譜條件賽分色譜柱Sepax Bio-C18（250 mm×46 mm，5 μm）;流動相A：甲醇，流動相B：乙腈，流動相C：01%磷酸（含01%三乙胺），梯度洗脫（0～22 min，5%B，95%C;23～33 min，2%B，72%C）;流速為1 mL·min-1;檢測波長為210 nm和403 nm;進樣量為10 μL;柱溫30℃。

212溶液的制備麻黃混合對照品溶液：分別精密稱取鹽酸麻黃堿對照品，鹽酸偽麻黃堿對照品，加甲醇制成含鹽酸麻黃堿對照品00445 mg·mL-1，鹽酸偽麻黃堿對照品00430 mg·mL-1的混合對照品溶液。

羥基紅花黃色素A對照品溶液：精密稱取羥基紅花黃色素A對照品適量，加20%甲醇制成含羥基紅花黃色素A對照品01084 mg·mL-1的對照品溶液。

供試品溶液：按25倍日處方量稱取藥材，其中一部分藥材提取完揮發(fā)油后過濾，濾液備用;將藥渣與剩余藥材混合，加8倍量水提取3次，每次1 h，濾過，合并濾液，經(jīng)045μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

陰性對照品溶液：按供試品制備方法制備缺麻黃和紅花的陰性對照品溶液。

213方法學(xué)考察專屬性試驗：分別精密吸取麻黃混合對照品溶液，羥基紅花黃色素A對照品溶液，供試品溶液，陰性對照品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件檢測。結(jié)果對照品溶液和供試品溶液在相同的保留時間均有出峰，陰性對照無干擾，如圖1。說明該測定方法專屬性強，無干擾[5-6]。

線性范圍考察 精密稱取鹽酸麻黃堿對照品，鹽酸偽麻黃堿對照品適量，用甲醇稀釋制成鹽酸麻黃堿對照品濃度為00223 mg/mL～02058 mg/mL，鹽酸偽麻黃堿對照品濃度為00215 mg/mL～01710 mg/mL的混合對照品溶液，另精密稱取羥基紅花黃色素A對照品適量，加20%甲醇制成含羥基紅花黃色素A對照品濃度為00215 mg/mL～02168mg/mL的對照品溶液。在上述色譜條件下，分別取上述對照品溶液10 μL注入液相色譜儀測定峰面積，以進樣量x為橫坐標(biāo)，峰面積y為縱坐標(biāo)，進行線性回歸，得回歸方程：y=14932x+42588（r=09999），y=17605x-20029（r=09999），y=16238x+38284（r=09999）。結(jié)果表明：鹽酸麻黃堿在02-21μg內(nèi)，鹽酸偽麻黃堿在02-17μg范圍內(nèi)，羥基紅花黃色素A在02-22μg范圍內(nèi)進樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度實驗 吸取212項下樣品溶液適量，重復(fù)測定6次，結(jié)果鹽酸麻黃堿，鹽酸偽麻黃堿，羥基紅花黃色素A峰面積的RSD值分別為075%，079%，081%，表明該方法精密度良好。

穩(wěn)定性實驗 精密量取212項下混合對照品溶液，在0，2，4，6和8h分別進樣10 μL，記錄3個成分的峰面積，計算RSD分別為041%，051%，046%，結(jié)果表明鹽酸麻黃堿，鹽酸偽麻黃堿，羥基紅花黃色素A均在8h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性實驗 取同一批樣品6份，照212項下方法制備供試品溶液，依照上述色譜條件平行操作測定，記錄峰面積，計算含量。結(jié)果3個成分的RSD值均小于30%，表明本方法的重復(fù)性良好。

耐用性實驗 取同一批樣品，照212項下方法制備供試品溶液，改變色譜柱溫度±5℃、流動相比例±5%，流速±2%，進行耐用性試驗。結(jié)果RSD<30%，說明本方法穩(wěn)定。

加樣回收率實驗 精密量取已知鹽酸麻黃堿，鹽酸偽麻黃堿，羥基紅花黃色素A含量的樣品5 mL，共9份，每3份為一組，分別精密加入含鹽酸麻黃堿對照品00445 mg·mL-1，鹽酸偽麻黃堿對照品00430 mg·mL-1，羥基紅花黃色素A對照品01084 mg·mL-1的混合對照品溶液25 mL，5 mL，75 mL，混勻，依法制備供試品溶液。依照上述色譜條件平行操作測定，記錄峰面積，最后計算鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、羥基紅花黃色素A的回收率和RSD。結(jié)果鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、羥基紅花黃色素A的平均回收率分別為：982%（RSD=12%）、995%（RSD=11%）、978%（RSD=14%）。由實驗結(jié)果可知，各成分的加樣回收率結(jié)果良好，適合用于紅麻凝膠膏中有效成分的含量測定[7-9]，見圖1。

22正交設(shè)計實驗優(yōu)化提取工藝根據(jù)單因素考察的結(jié)果，選定提取時間、提取次數(shù)、加水量為考察因素，以鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、羥基紅花黃色素A含量和干浸膏得率為指標(biāo)綜合評分，應(yīng)用L9（34）正交試驗表進行試驗。按處方量比例準(zhǔn)確稱取各味藥材，共9份，編為1-9號，提取液過濾，定容即得[10-12]。

221干浸膏得率的測定精密移取上述提取液液25 mL，置于已經(jīng)恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干后，置烘箱中干燥至恒重，減去皿重，計算干浸膏得率。

222測定方法精密吸取麻黃混合對照品溶液，羥基紅花黃色素A對照品溶液和上述樣品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測定峰面積，計算樣品中鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿、羥基紅花黃色素A的含量，方差分析采用spss100軟件，結(jié)果見表1-2。

223結(jié)果由表1可知，3個因素中對提取工藝的影響順序為B（提取次數(shù)）>C（加水量）>A（提取時間），由方差分析結(jié)果可知，因素B（提取次數(shù)）對綜合評分的影響有顯著性差異，因素A（提取時間）和因素C（加水量）的影響未達到顯著性差異，由正交試驗得出的最優(yōu)提取條件是A3B3C3，即加10倍量水、提取3次、每次90 min，但考慮到能源的節(jié)約，故將最優(yōu)條件調(diào)整為A2B3C3，即加10倍量水、提取3次、每次1 h，以此條件進一步進行驗證試驗。

224驗證實驗按處方量比例稱取紅花，麻黃等藥材，按最佳提取工藝進行3批驗證試驗，結(jié)果綜合評分分別為100，9688，9851，RSD為158%，表明該工藝穩(wěn)定可靠[13-14]。

3討論

由于本制劑為復(fù)方，藥效成分復(fù)雜，使用單一成分作為考察指標(biāo)可能會影響制劑質(zhì)量，故選擇方中兩味君藥的有效成分及干浸膏量作為考察指標(biāo)[15-16]。

在混合對照品的制備過程中，首先將鹽酸麻黃堿，鹽酸偽麻黃堿和羥基紅花黃色素A三個對照品精密稱定后混合溶解在甲醇中，用選定的色譜條件進行檢測時發(fā)現(xiàn)，鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿峰對稱因子和分離度均能達到要求，但羥基紅花黃色素A峰出現(xiàn)分裂，考慮可能是對照品的原因，后按照212方法重新配制對照品后再按照選定色譜條件進行檢測后發(fā)現(xiàn)，鹽酸麻黃堿，鹽酸偽麻黃堿和羥基紅花黃色素A峰對稱因子和分離度均能達到要求，說明按照文中選定色譜條件進行對照品檢測時，鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿與羥基紅花黃色素A應(yīng)分別配制。

在進行驗證實驗時，考慮到提取時間和加水量對綜合評分的影響未達到顯著性差異，在節(jié)約能源的基礎(chǔ)上，在選定最佳工藝時同時進行了加8倍水，加6倍水和提取05小時的工藝考察，最終比較發(fā)現(xiàn)當(dāng)加水量為10倍，提取3次，每次1小時時綜合評分最佳。[KH*1D]

參考文獻：

[1]李孟澤，汪永泉，趙國偉，等杉樹皮夾板配合中藥外敷治療兒童肱骨髁上骨折療效研究[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2018，16：2455-2459

[2]周欣欣，羅賢強，張俊清，等中藥散劑研究的現(xiàn)狀[J].海南醫(yī)學(xué)，2019，30（3）：392-394

[3]何蕾紅花提取物生物活性成分的研究[D].蘭州理工大學(xué)，2016

[4]黃玲，王艷寧，吳曙粵中藥麻黃藥理作用研究進展[J].中外醫(yī)療，2018（7）：195-198

[5]徐山新疆不同產(chǎn)地紅花中羥基紅花黃色素A的含量測定[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2019，1：99-128

[6]呂劍豪，張海平，高小川，等HPLC法測定麻杏止咳片中鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的含量[J].中藥材，2015，12：2626-2627

[7]孫琳梔味安神濃縮丸制劑工藝與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[D].鄭州大學(xué)，2018

[8]李敏，焦敏，王長虹，等HPLC法同時測定復(fù)方駱駝蓬子凝膠劑中6種成分的含量[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2018，8：1010-1015

[9]姜暉多指標(biāo)分析方法在精制冠心顆粒等8種中藥復(fù)方制劑質(zhì)量控制方面的應(yīng)用研究[D].河北醫(yī)科大學(xué)，2015

[10]楊偉興，劉菊容，肖國輝，等痛風(fēng)消顆粒知母水提取工藝優(yōu)化[J].海峽藥學(xué)，2019，2：44-46

[11]佘守軍，鄭如程，羅琴，等正交試驗優(yōu)化鳳丹皮中單萜苷的煎煮工藝[J].湖北醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報，2019，2：140-142+147

[12]叢日琳，岳媛媛，王旭超黃芩苷工業(yè)化生產(chǎn)的實驗研究[J].中央民族大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2019，1：5-11

[13]鄭路靜，劉慶煥，陶遵威復(fù)方紅景天滴丸的制備工藝研究[J].天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2019，1：84-87

[14]謝冰，馬幸福，李瑞清，等正交實驗法優(yōu)選唐古特大黃莖的提取工藝[J].國際藥學(xué)研究雜志，2018，10：789-794

[15]蘇松柏，張建玲，張麗麗，等梔龍凝膠膏貼的水提工藝研究[J].中國民族民間醫(yī)藥，2018，1：37-40

[16]石征蓉，谷江華，楊秀青，等基于多指標(biāo)權(quán)重分析和正交設(shè)計法優(yōu)選糖腎清毒顆粒的提取工藝[J].遼寧中醫(yī)雜志，2018，3：577-582

（收稿日期：2019-07-16）