張潔，李建軍，張超，楊德剛，楊明亮，杜良杰，高峰，申敏鑫

1.首都醫(yī)科大學(xué)康復(fù)醫(yī)學(xué)院，北京市 100068；2.中國(guó)康復(fù)研究中心北京博愛醫(yī)院脊柱脊髓神經(jīng)功能重建科，北京市 100068；3.北京腦重大疾病研究院神經(jīng)損傷與修復(fù)研究所，北京市 100068；4.北京市神經(jīng)損傷與康復(fù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京市 100068

急性脊髓損傷(acute spinal cord injury,ASCI)是一種常見的嚴(yán)重的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，具有高發(fā)生率、高死亡率、高致殘率和高耗費(fèi)性的特點(diǎn)[1-3]。這些患者的早期存活率已經(jīng)顯著提高，但他們的生活質(zhì)量仍然不能令人滿意。在ASCI 患者面臨的問題中，神經(jīng)源性腸道功能障礙(neurogenic bowel dysfunction,NBD)是一個(gè)重大的生理和心理問題，會(huì)嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量[4-5]。

人類腸道由數(shù)以千計(jì)不同的細(xì)菌物種定居，它們的數(shù)量和遺傳含量分別是宿主的1倍和150倍[6]。細(xì)菌對(duì)于正常消化、營(yíng)養(yǎng)吸收以及細(xì)胞的發(fā)育、新陳代謝和功能都至關(guān)重要[7-8]。腸道菌群失調(diào)的常見原因包括抗生素使用、長(zhǎng)期應(yīng)激和胃腸功能障礙。大多數(shù)急性完全性脊髓損傷患者的腸道通過時(shí)間改變，腸黏膜功能減弱，導(dǎo)致腸道中的菌群移位。抗生素的使用也會(huì)影響腸道微生態(tài)系統(tǒng)[9-10]。因此，腸道菌群失調(diào)可能發(fā)生在脊髓損傷患者中。

本研究對(duì)急性創(chuàng)傷性完全性脊髓損傷患者和健康人的腸道微生物進(jìn)行比較，探討腸道微生物與血清生物標(biāo)志物之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017 年5 月至2018 年5 月在北京博愛醫(yī)院住院治療的創(chuàng)傷性完全性脊髓損傷患者，符合美國(guó)脊柱損傷協(xié)會(huì)(American Spinal Injury Association,ASIA)殘損分級(jí)的診斷標(biāo)準(zhǔn)[11]。

患者組納入標(biāo)準(zhǔn)：①完全性脊髓損傷(脊髓損傷ASIA 殘損分級(jí)A 級(jí))；②患者受傷時(shí)間為6 個(gè)月內(nèi)；③年齡18～60 歲；④創(chuàng)傷性胸段脊髓損傷?；颊呓M排除標(biāo)準(zhǔn)：①無法完成問卷調(diào)查；②入組前1 個(gè)月內(nèi)抗生素或益生菌使用史；③高血壓、糖尿病等慢性疾病病史；④肝炎、結(jié)核等傳染病和免疫代謝疾病病史；⑤酗酒史。

對(duì)照組納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡18～60歲；②醫(yī)院護(hù)工、陪護(hù)患者的家屬及醫(yī)院的醫(yī)生、護(hù)士。

共77 例受試者入組，其中對(duì)照組33 例，患者組44 例。對(duì)照組中男性17 例，女性16 例，平均(39.8±8.7)歲?；颊呓M男性36 例，女性8 例，平均(43.5±9.3)歲；T1～T4損傷21 例，T5～T12損傷23 例；受傷原因中車禍占40.9%，高處墜落占36.3%，重物砸傷占20.5%，擠壓受傷占2.3%；大部分患者(33 例)排便方式為利用甘油灌腸劑，其次為手指刺激肛門或擠壓、按摩腹部；20 例患者每天排便，其余每周2～6 次；34例患者排便時(shí)間0～30 min，10 例排便30～60 min；12例排便時(shí)會(huì)有伴隨癥狀，其中3例排便時(shí)會(huì)伴隨頭痛，9 例出汗，其余32 例沒有伴隨癥狀；NBD 評(píng)分為(8.23±4.4)分。

兩組年齡無顯著性差異(P>0.05)。見表1。本研究經(jīng)中國(guó)康復(fù)研究中心倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(No.CRRCIEC-RP-SQ-006-01)。

表1 兩組一般資料比較

1.2 方法

收集受試者的臨床數(shù)據(jù)和新鮮糞便標(biāo)本。在提取糞便基因組DNA 后，擴(kuò)增16S rDNA 的V3-V4 區(qū)域，并使用Illumina MiSeq 平臺(tái)分析和比較兩組腸道微生物群。使用最新版本的國(guó)際脊髓損傷腸功能基礎(chǔ)數(shù)據(jù)集收集所有患者的腸功能核心數(shù)據(jù)[12-13]。

1.2.1 樣本收集

1.2.1.1 大便采樣

共收集77份新鮮大便標(biāo)本，將糞便封裝后置于液氮罐中，送至實(shí)驗(yàn)室。轉(zhuǎn)移并保持在-80 ℃的冷凍箱中進(jìn)行冷凍保存。

1.2.1.2 血液及尿液采樣

77 例受試者中有27 例患者和23 例對(duì)照者提供了血液標(biāo)本及尿液標(biāo)本。血液標(biāo)本分析丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase,AST)、尿素(UREA)、葡萄糖(glucose,GLU)、肌酐(creatinine,CR)、尿酸(uric acid,UA)、總膽固醇(total cholesterol,Tch)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein,HDL)和低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein,LDL)。尿液標(biāo)本分析尿液中白細(xì)胞(urinary infection,UI)。

1.2.2 DNA抽提和PCR擴(kuò)增

根據(jù)E.Z.N.A.?soil 試劑盒(美國(guó)OMEGA BIOTEK 公司)說明書進(jìn)行總DNA 抽提，DNA 濃度和純度利用NanoDrop2000 進(jìn)行檢測(cè)，利用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA 提取質(zhì)量；用338F(5'-ACT CCT ACG GGA GGC AGC AG-3')和806R(5'-GGA CTA CHV GGG TWT CTA AT-3')引物對(duì)V3～V4 可變區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

擴(kuò)增程序：95 ℃預(yù)變性2 min，25 個(gè)循環(huán)(95 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s)，最后72 ℃延 伸5 min(PCR 儀：ABI GeneAmp?9700 型)。擴(kuò)增體系20 μl，5×FastPfu 緩沖液4 μl，2.5 mmol/L dNTPs 2 μl，5 μmol/L 引物0.8 μl，F(xiàn)astPfu 聚合酶0.4 μl；DNA模板10 ng[14]。

1.2.3 Illumina Miseq測(cè)序

使用2%瓊脂糖凝膠回收PCR 產(chǎn)物，利用Axy-Prep DNA Gel Extraction Kit(美國(guó)AXYGEN BIOSCIENCES 公司)進(jìn)行純化，Tris-HCl 洗脫，2%瓊脂糖電泳檢測(cè)。

利用QuantiFluor?-ST(美國(guó)PROMEGA 公司)進(jìn)行檢測(cè)定量。根據(jù)Illumina MiSeq 平臺(tái)(美國(guó)ILLUMINA公司)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程將純化后的擴(kuò)增片段構(gòu)建PE 2×300 的文庫。利用Miseq PE300 平臺(tái)進(jìn)行測(cè)序(上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司)。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理

原始測(cè)序序列使用Trimmomatic 軟件質(zhì)控，使用FLASH 軟件進(jìn)行拼接：①設(shè)置50 bp 的窗口，如果窗口內(nèi)的平均質(zhì)量值低于20，從窗口開始截去后端堿基，去除質(zhì)控后長(zhǎng)度低于50 bp 的序列；②barcode 需精確匹配，引物允許2個(gè)堿基的錯(cuò)配，去除模糊堿基；③根據(jù)重疊堿基overlap將兩端序列進(jìn)行拼接，overlap需大于10 bp；去除無法拼接的序列。

使用的UPARSE軟件(Version 7.1)，根據(jù)97%相似度對(duì)序列進(jìn)行OTU(Operational Taxonomic Units,操作分類單位)聚類；使用UCHIME軟件剔除嵌合體。

利用RDP classifier 對(duì)每條序列進(jìn)行物種分類注釋，比對(duì)Silva 數(shù)據(jù)庫(SSU123)，設(shè)置比對(duì)閾值為70%[15]。

1.3 生物信息學(xué)

使用QIIME 1.9.0 處理測(cè)序讀數(shù)。使用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)來鑒定不同標(biāo)記，使用LDA 對(duì)LEfSe分析中的每個(gè)特征進(jìn)行評(píng)分?；?7%的序列相似性，用QIIME計(jì)算α多樣性指數(shù)。

通過unweighted-uniFrac 或binary-jaccard 方法測(cè)量β 多樣性。進(jìn)行分層聚類，并使用Spearman 等級(jí)相關(guān)系數(shù)作為距離度量和在R 統(tǒng)計(jì)包中開發(fā)的定制腳本生成熱圖。

使用Metagenomic Profiles 統(tǒng)計(jì)分析軟件包(版本2.1.3)進(jìn)一步分析輸出文件[16]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS 23.0 數(shù)據(jù)分析程序和Metagenomic Profiles 統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。對(duì)于連續(xù)變量，應(yīng)用獨(dú)立的t檢驗(yàn)、Welcht檢驗(yàn)、Mann-WhitneyU非參數(shù)檢驗(yàn)。顯著性水平α雙側(cè)=0.05。

2 結(jié)果

2.1 生化指標(biāo)

患者組GLU、UA、TG、Tch、LDL 和UI 均高于對(duì)照組(P<0.05)。見表2。

表2 兩組生化指標(biāo)對(duì)比

2.2 生物學(xué)信息

2.2.1 α多樣性

共得到3 904 587 個(gè)序列。經(jīng)過抽平后共識(shí)別了794個(gè)OTU。OTU 的Good覆蓋率為99.9%。與對(duì)照組比較，患者組菌群覆蓋率(coverage 指數(shù))在OTU 水平(P=0.041)(圖1A)和屬水平降低(P=0.019)(圖1D)，在屬水平，患者組代表群落豐富度的sob 指數(shù)(P=0.011)(圖1B)和ace指數(shù)(P=0.018)增高(圖1C)。

2.2.2 β多樣性

在OTU 水平的主坐標(biāo)分析(principal co-ordinates analysis,PCoA)(圖2A)和非度量多維尺度分析(nonmetric multidimensional scaling,NMDS)(圖2B)及在屬水平的NMDS分析(圖2C)顯示，兩組間細(xì)菌群落組成存在顯著差異。相似性分析結(jié)果顯示，兩組組間差異顯著大于組內(nèi)差異(adonis，R=0.40,P=0.001)(圖2D)。

圖1 兩組微生物α多樣性對(duì)比結(jié)果

圖2 兩組微生物β多樣性對(duì)比結(jié)果

2.2.3 兩組物種差異性

在門水平排名前10的物種中，在患者組和對(duì)照組中主要的物種是Firmicutes(厚壁菌門)和Bacteroidetes(擬桿菌門)。與對(duì)照組比較，患者組Bacteroidetes(擬桿菌門)減少(P<0.05)；Actinobacteria(放線菌門)、Proteobacteria(變形菌門)、Verrucomicrobia(疣微菌門)、Synergistetes(互養(yǎng)菌門)、Saccharibacteria(螺旋體菌門)和Cyanobacteria(藍(lán)藻菌門)明顯增多(P<0.05)。見圖3A。

在排名前15 的屬種中，有10 個(gè)物種在組間存在顯著性差異(P<0.05)。在對(duì)照組中明顯增高的物種為Bacteroides(擬桿菌屬)、Faecalibacterium(糞桿菌屬)、[Eubacterium]_rectale_group(直腸真桿菌屬)、Megamonas(巨單胞菌屬)、Roseburia(羅氏菌屬)(P<0.05)。在患者組中明顯增高的菌群有Bifidobacterium(雙歧桿菌屬)、Escherichia-shigella(大腸桿菌志賀菌)、Blautia(布勞特氏菌屬)、[Eubacterium]-coprostanoligene 和Akkermansia(阿克曼菌屬)(P<0.05)。見圖3B。

圖3 兩組菌群物種差異性比較

2.2.4 腸道微生物和生化標(biāo)志物關(guān)聯(lián)性

典型關(guān)聯(lián)分析(canonical correlation analysis,CCA)顯示，GLU(P=0.013,r2=0.2318)，LDL(P=0.047,r2=0.1185)顯著影響門水平的群落組成。在屬水平，GLU(P=0.001,r2=0.8204)、TG(P=0.028,r2=0.3831)和Tch(P=0.001,r2=0.3375)、LDL(P=0.001,r2=0.5053)、UI(P=0.02,r2=0.2006)顯著影響群落的組成。血清生物標(biāo)志物GLU、LDL、TG 和Tch 與細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)有相關(guān)性(P<0.05)。

不同環(huán)境因素與兩組群落組成的相關(guān)熱圖分析表明，在前10 種門水平，F(xiàn)irmicutes 與年齡(AGE)呈負(fù)相關(guān)，與UA 呈正相關(guān)(P<0.05)；Bacteridetes 與UREA、LDL、TG、UI、GLU、AST、ALT 呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)；Proteobacteria與TG呈正相關(guān)(P<0.05)。見圖4A。

總豐度水平前15的屬中，ALT與Faecalibacterium和[Eubacterium]_rectale_group 呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與Subdoligranulum、Escherichia-Shigella、Blauti、[Eubacterium]_coprostanoligenes_group 和 norank_f__Ruminococcaceae呈正相關(guān)(P<0.05)；AST 與Lachnoclostridium 呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與Subdoligranulum、Blautia 和[Eubacterium]_coprostanoligenes_group呈正相關(guān)(P<0.05)；UREA 與Bacteroides、Faecalibacterium和Roseburia 呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與Prevotella_9 呈正相關(guān)(P<0.05)；GLU 與Bacteroides、Faecalibacterium 和[Eubacterium]_rectale_group呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與 Escherichia-Shigella、Blautia、[Eubacterium]_coprostanoligenes_group、Bifidobacterium 和norank_f__Ruminococcaceae呈正相關(guān)(P<0.05)；Cr與Dialister呈正相關(guān)(P<0.05)；TG與Faecalibacterium 和[Eubacterium]_rectale_group呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與Escherichia-Shigella、Blautia 和norank_f__Ruminococcaceae呈正相關(guān)(P<0.05)；Tch 與[Eubacterium]_rectale_group 和Dialister 呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與Escherichia-Shigella、Blautia 和norank_f__Ruminococcaceae呈正相 關(guān)(P<0.05)；HDL 與norank_f__Ruminococcaceae呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)；LDL 與[Eubacterium]_rectale_group 呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與Subdoligranulum、Escherichia-Shigella、Blautia 和norank_f__Ruminococcaceae 呈正相關(guān)(P<0.05)；UI 與Bacteroides 和Faecalibacterium 和[Eubacterium]_rectale_group呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，與 Escherichia-Shigella、Blautia和norank_f__Ruminococcaceae呈正相關(guān)(P<0.05)。如圖4B。

圖4 不同環(huán)境因子在門水平(A)和屬水平(B)對(duì)健康人和脊髓損傷群體群落組成的相關(guān)熱圖分析

3 討論

盡管有研究描述了腸道菌群與中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病之間的關(guān)聯(lián)，但脊髓損傷患者在6 個(gè)月內(nèi)的腸道微生物群特征尚未被描述過。本研究比較健康成人和受傷時(shí)間在6 個(gè)月內(nèi)的脊髓損傷患者腸道菌群的組成，并探討其和生化指標(biāo)的關(guān)聯(lián)。從CCA 結(jié)果來看，年齡對(duì)菌群分布沒有顯著影響。對(duì)照組的男女菌群多樣性沒有明顯的區(qū)別，結(jié)合相似性分析來判斷兩組之間的差異顯著大于組內(nèi)的差異，可以認(rèn)為年齡和性別對(duì)試驗(yàn)結(jié)果沒有明顯影響。

急性期脊髓損傷受傷原因中，40.9%為車禍，36.3%為高處墜落，這與國(guó)內(nèi)外其他的關(guān)于脊髓損傷的病因調(diào)查結(jié)果相符[1-3]?；颊吣挲g段大部分分布在39～55 歲，81.8%為男性，這些患者大部分處于勞動(dòng)的黃金期，更容易遭受諸如創(chuàng)傷等意外傷害。大部分脊髓損傷患者存在NBD，脊髓損傷患者主要排便方式為利用甘油灌腸劑，其次為手指刺激肛門或擠壓、按摩腹部。腸道菌群可能是幫助改善這一問題的潛在目標(biāo)。

16S rRNA 測(cè)序觀察到的OTU 覆蓋率為99.9%，測(cè)序數(shù)據(jù)達(dá)到飽和，能夠覆蓋人類腸道菌群組群落的絕大部分物種?；颊呓M和對(duì)照組比較，coverage 指數(shù)降低，ace 指數(shù)、sob 指數(shù)增高，表明急性脊髓損傷后，患者腸道菌群的豐度增加，但覆蓋的菌群種類減少，可能與急性脊髓損傷后，機(jī)體的應(yīng)激機(jī)制和代償機(jī)制有關(guān)。β 多樣性分析顯示，兩組間細(xì)菌群落組成存在顯著性差異。說明急性期脊髓損傷患者存在腸道菌群紊亂。

本研究中，健康成人糞便微生物群的主要成分Bacteroides(擬桿菌屬，即Bacteroidetes 的核心屬)在脊髓損傷患者中減少。一項(xiàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明[17]，創(chuàng)傷性脊髓損傷可導(dǎo)致腸道菌群失調(diào)，可影響脊髓損傷患者的功能恢復(fù)，加重脊髓炎癥和損傷。在該研究中，對(duì)胸椎損傷的雌性小鼠的糞便進(jìn)行16S rRNA 測(cè)序分析，結(jié)果表明脊髓損傷后Bacteroidales(擬桿菌目)的豐度降低，與本研究的結(jié)果相似。本研究?jī)蓚€(gè)優(yōu)勢(shì)種是Firmicutes 和Bacteroidetes，也與此前研究相同[18-19]。與正常人相比，脊髓損傷患者Bacteroidetes菌群減少，Actinobacteria、Proteobacteria、Synergistetes、Saccharibacteria 和Cyanobacteria 增加，使得脊髓損傷患者的腸道菌群失調(diào)。我們推測(cè)Bacteroides 是對(duì)人體有益的菌種。Gungor等[10]的臨床研究發(fā)現(xiàn)，脊髓損傷患者產(chǎn)生丁酸鹽的菌落顯著少于正常人群。本研究中具有短鏈脂肪酸產(chǎn)生功能的[Eubacterium]-rectale-group、Faecalibacterium、Bacteroide 和Roseburia 菌群也減少。Bacteroides 限制腸道鼠傷寒沙門氏菌擴(kuò)張和糞便脫落[20]。這種效應(yīng)是由微生物通過代謝產(chǎn)物直接產(chǎn)生的。推測(cè)短鏈脂肪酸的共生細(xì)菌改變腸道環(huán)境并幫助腸道抵抗感染。分析患者的UI 發(fā)現(xiàn)，大部分患者UI都高于正常參考值。由于胸段完全性脊髓損傷患者膀胱感覺異常，尿中有感染時(shí)不會(huì)出現(xiàn)尿頻、尿急、尿痛等典型膀胱刺激癥狀，所以很多患者的下尿路感染無法被及時(shí)發(fā)現(xiàn)。因此在臨床工作中要定期查尿常規(guī)，檢測(cè)尿路感染情況。其次UI 含量與Bacteroides、Faecalibacterium、[Eubacterium]_rectale_group 這幾種在健康人中明顯富集的菌呈負(fù)相關(guān)，而與Escherichia-Shigella、Blautia、norank_f__Ruminococcaceae、Akkermansia這些在患者組中富集的菌呈正相關(guān)，說明腸道菌群的紊亂容易導(dǎo)致尿路感染。

綜上，脊髓損傷后腸道菌群的紊亂會(huì)增加感染的發(fā)生傾向，干預(yù)患者的菌群組成可能降低感染的發(fā)生率。有待進(jìn)一步研究。

脊髓損傷患者的血生化指標(biāo)和健康人之間存在差異。患者組血糖水平較正常人高[21-24]。有研究表明[25]，胰島素耐受糖尿病患者Bifidobacterium、Subdoligranulum 降低，Prevotella 升高。本研究中患者組較對(duì)照組Bifidobacterium、Subdoligranulum 增多，Prevotella-9 減少，環(huán)境因子對(duì)群落組成的相關(guān)熱圖分析表明，血糖水平與Bifidobacterium、Subdoligranulum 呈正相關(guān)，與Prevotella-9 呈負(fù)相關(guān)，不過只與Bifidobacterium 具有顯著相關(guān)性。這提示在受傷時(shí)間較短的情況下(6個(gè)月內(nèi))，血糖水平的升高可能與胰島素耐受關(guān)系不大，更有可能是應(yīng)激的結(jié)果。6 個(gè)月內(nèi)脊髓損傷患者腸道內(nèi)Bifidobacterium 豐度的增加是機(jī)體為適應(yīng)疾病所做的調(diào)整[26]。有研究證實(shí)[27]，運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練如跑步機(jī)訓(xùn)練、主動(dòng)或機(jī)器人輔助訓(xùn)練、有或無功能性電刺激輔助的地面訓(xùn)練可以改善脊髓損傷患者的高血糖。這些訓(xùn)練可以增加葡萄糖儲(chǔ)存的能力，使參與葡萄糖磷酸化(己糖激酶)和氧化(檸檬酸合成酶)的酶以及葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白增加。

脊髓損傷患者的血脂包括Tch、TG和LDL水平明顯高于對(duì)照組。脊髓損傷后脂代謝紊亂，容易出現(xiàn)高脂血癥，這與以往的研究結(jié)果相符[28]。本研究發(fā)現(xiàn)，Escherichia-Shigella、Blautia、norank_f__Ruminococcaceae、[Ruminococcus]_torques_group、[Ruminococcus]_gnavus_group 這些屬水平的物種與TG、Tch 和LDL 呈正相關(guān)，[Eubacterium]_rectale_group、Faecalibacterium 與TG、Tch 和LDL 呈負(fù)相關(guān)。脊髓損傷后血脂變化的機(jī)制不明，有可能與運(yùn)動(dòng)減少及情緒和飲食改變等有關(guān)。有研究表明[29-30]，腸道菌群可以通過影響脂肪細(xì)胞因子基因的表達(dá)，影響宿主的免疫系統(tǒng)、內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)等而導(dǎo)致脂質(zhì)代謝異常。

本研究結(jié)果表明，脊髓損傷后腸道菌群的紊亂，與血脂變化存在相關(guān)性，腸道菌群可能參與血脂的變化。這為干預(yù)脊髓損傷后代謝紊亂提供了新思路。

本研究還存在一定局限性。由于樣本量有限，沒有根據(jù)患者受傷時(shí)間進(jìn)行分組比較，未能進(jìn)一步分析脊髓損傷患者腸道菌群多樣性隨時(shí)間的變化規(guī)律。下一步計(jì)劃進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和縱向人體研究，以確定腸道微生物和脊髓損傷NBD 之間的因果關(guān)系，明確腸道微生物在脊髓損傷發(fā)生發(fā)展中起的作用，有助于產(chǎn)生新的干預(yù)方法。