鄧麗娟

摘要：為比較研究選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑OBHS和雷洛昔芬（RAL）抗腫瘤作用效果。采用MTT法檢測(cè)了不同濃度的OBHS和RAL對(duì)非洲綠猴腎細(xì)胞系（VERO）、乳腺癌細(xì)胞系（MCF-7）、卵巢癌細(xì)胞系（SK-O-V3）以及前列腺癌細(xì)胞系（DU145）的細(xì)胞活性的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，OBHS和RAL均可以抑制MCF-7、SK-OV-3及DU145的活性，但是OBHS對(duì)正常細(xì)胞VERO基本無(wú)毒副作用。

關(guān)鍵詞：OBHS;雷洛昔芬;抗腫瘤

中圖分類號(hào)：Q291 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1674-9944（2019）22-0193-03

1 引言

雌激素受體a（ER（x）和雌激素受體β（ERβ）是參與調(diào)節(jié)人體多種輔助生理學(xué)反應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子[1]。有研究表明ERα與乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌以及子宮內(nèi)膜癌等密切相關(guān)[2～4]，因此ERα被認(rèn)為是癌癥治療中的主要治療靶標(biāo)。選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑（SERMs）是一類可以與雌激素受體（ER）高親和力結(jié)合的化合物，在不同組織中表現(xiàn)出類雌激素作用或抗雌激素的活性，其組織特異性使它在血管、子宮、乳腺和骨骼等組織中發(fā)揮著不同的作用[5～7]。

OBHS是人工合成的ERa選擇性的拮抗劑，與第二代SERMs雷洛昔芬（RAL）的拮抗作用機(jī)制相薣8]??？研究發(fā)現(xiàn)OBHS在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系HEC-1-A和子宮內(nèi)膜異位模型中均表現(xiàn)出拮抗雌激素轉(zhuǎn)錄激活作用[8，9]，但OBHS對(duì)其他類型的腫瘤細(xì)胞的作用則有待進(jìn)一步研究。

2 材料與方法

2.1 材料

細(xì)胞系VERO、MCF-7、SK-OV-3以及DU145均購(gòu)自武漢大學(xué)保藏中心。

2.2 方法

2.2.1 MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力

用含有10%活性炭處理的胎牛血清（CS-FBS）的無(wú)酚紅DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞3d，收集處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞制成細(xì)胞懸浮液，并以1⁴個(gè)細(xì)胞/mL左右的濃度接種到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，于二氧化碳培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)24h左右。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到50%時(shí)，加入不同濃度的藥物，繼續(xù)培養(yǎng)3d，然后分別加入MTT溶液（終濃度為1mg/mL），37℃培養(yǎng)4h。去除96孔板中的培養(yǎng)基后，每孔加入100μL的二甲亞砜，震蕩10min，用酶標(biāo)儀檢測(cè)待測(cè)樣品在570nm波長(zhǎng)處的吸光值，并計(jì)算藥物的半抑制率（IC50值）。

2.2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用平均值±SD表示（n=3）。其中，IC50采用公式Y(jié)=100%抑制+（0%抑制-100%抑制）/（1+10[（logIC50-X）×斜率]），Y為光吸收值，X為log[抑制劑濃度]，通過(guò)Origin 8.0統(tǒng)計(jì)軟件分析獲得。

3 結(jié)果

3.1 OBHS和RAL抑制人乳腺瘤細(xì)胞MCF-7的活性

取不同濃度的RAL和OBHS分別作用乳腺癌細(xì)胞MCF-7和非洲綠猴腎的正常細(xì)胞VERO，3d后檢測(cè)細(xì)胞活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)OBHS和RAL工作濃度上升至20μmol/ L時(shí)，MCF-7的細(xì)胞活性下降到50%以下（圖1a），RAL和OBHS對(duì)MCF-7的抑制作用均具有濃度依耐性，其IC50值分別為15.9±0.30和20.1±1.16。此外，RAL對(duì)VERO的細(xì)胞活性也具有一定的抑制作用（圖1b），其IC50為36.4±0.27;而OBHS對(duì)正常細(xì)胞的毒性較小，IC50值大于100（圖1b），這表明OBHS的體外治療指數(shù)要高于RAL。

3.2 OBHS和RAL抑制人卵巢癌細(xì)胞系SK-OV-3的活性

將不同工作濃度的OBHS和RAL分別作用SK-OV-3細(xì)胞系3d，檢測(cè)細(xì)胞活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)RAL工作濃度上升到20μmol/L時(shí)，SK-OV-3細(xì)胞活性可以降至50%以下;而同樣工作濃度的OBHS對(duì)細(xì)胞活性并無(wú)影響，只有當(dāng)OBHS工作濃度上升至80μmol/L時(shí)，才具有類似的抑制效果（圖2）。

3.3 OBHS和RAL抑制人前列腺癌細(xì)胞系DU145的活性

不同工作濃度的OBHS和RAL分別處理DU145細(xì)胞系3d，檢測(cè)細(xì)胞活性。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：RAL和OBHS對(duì)DU145細(xì)胞活性均有不同程度的抑制，其IC50值分別為：21.2±0.79和62.2±0.15。這表明OBHS只有在較高濃度時(shí)才對(duì)DU145細(xì)胞具有抑制細(xì)胞活性的作用（圖3）。

4 討論

選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑（SERMs）在不同的組織中通常表現(xiàn)出較為復(fù)雜的藥理學(xué)特效。RAL是第二代SERM，被美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準(zhǔn)用于預(yù)防和治療乳腺癌和男、女性的骨質(zhì)疏松癥[10]。OBHS是一種人工合成的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑，它對(duì)ERa的選擇性與雷洛昔芬（RAL）類似[8]，因此本研究比較了這兩種藥物對(duì)3種腫瘤細(xì)胞MCF-7、SK-OV-3和DU145的細(xì)胞活性的影響。

MCP-7、SK-OV-3以及DU145分別是人的乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌細(xì)胞系。在這3種細(xì)胞系中，它們的雌激素受體的表達(dá)情況并不相同。在MCF-7中ERα高表達(dá)，ERβ低表達(dá);而在SK-OV-3和DU145細(xì)胞中，ERβ表達(dá)相對(duì)較高，ERα低表達(dá)或者幾乎無(wú)表達(dá)。事實(shí)上，大量研究表明，ERα與腫瘤的惡性增殖、炎癥及腫瘤的發(fā)展有關(guān)[11，12];而ERβ對(duì)細(xì)胞增殖的影響與ERα相反，有促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用[13，14]。此外，有研究發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌和前列腺細(xì)胞，RAL也能選擇激活ERβ，從而發(fā)揮抑制細(xì)胞增殖的作用[15，16]。而在本研究中，RAL對(duì)SK-OV-3、DU145和MCF-7細(xì)胞活性均有較強(qiáng)的抑制作用。因此推測(cè)，RAL在ERp高表達(dá)的SK-OV-3和DU145細(xì)胞中也具有抑制活性，可能與其選擇性ERβ激活的特性有關(guān)。但有意思的是，在體外轉(zhuǎn)錄激活實(shí)驗(yàn)中，OBHS屬于ERβ的拮抗劑[8]。雖然低濃度的OBHS對(duì)DU145和SK-OV-3的細(xì)胞活性無(wú)明顯影響，但是當(dāng)OBHS濃度逐漸增大，OBHS也出現(xiàn)抑制腫瘤細(xì)胞活性的現(xiàn)象。由此可見，在前列腺癌和卵巢癌細(xì)胞中，OBHS的抗腫瘤細(xì)胞活性的作用機(jī)制可能與雷洛昔芬并不相同，具體的作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。