★ 李琳慧 付勇 洪恩四 熊俊 章海鳳**

(1.江西中醫(yī)藥大學研究生院 南昌 330004；2.江西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院 南昌 330006)

慢性萎縮性胃炎(CAG)是以胃黏膜上皮和腺體萎縮、數目減少或消失，胃黏膜變薄，黏膜基層增厚為特征的慢性消化系統(tǒng)疾病。伴有幽門腺化生和腸腺化生，或不典型增生者被認為是胃癌前病變[1]。在我國，CAG在正常人群中的檢出率呈上升趨勢，2014年由中華醫(yī)學會消化內鏡學分會牽頭開展的一項橫斷面調查中顯示CAG患者比例占受檢人群的20%左右[2]。CAG是一種多致病因素性疾病及癌前病變。近年來,多項研究結果表明該病的發(fā)生發(fā)展與胃腸激素的失調密切相關[3-4]。胃腸激素是一組由胃腸黏膜的化學信使細胞分泌的，廣泛存在于胃腸道的多肽類物質，對胃腸功能、炎癥、腫瘤等具有調節(jié)作用[5]。CAG患者的胃腸激素水平明顯異于正常人[6]，檢測胃腸激素的水平對評估CAG的嚴重程度和治療效果具有重要的臨床意義。因此本研究觀察CAG大鼠胃泌素(GAS)、生長抑素(SS)、胃動素(MTL)以及炎癥因子IL-6的變化情況，探討熱敏灸治療CAG的可能效應機制，為臨床應用提供依據。

1 材料與方法

1.1 動物與分組 SPF級SD雄性大鼠66只，5周齡，體質量150～180g(湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，SCXK湘：2016-0002)。采用籠養(yǎng)，恒溫(25±2)℃，濕度60%～70%，保持實驗室環(huán)境安靜舒適，大鼠適應性喂養(yǎng)3d，按隨機數字表隨機分為空白組12只，造模組54只，第8周開始，造模組每2周抽取2只大鼠送檢觀察造模是否成功，12周后隨機取2只空白組大鼠對比觀察，并根據胃黏膜組織病理學檢查確立建模成功(造模期間觀察模型建立8只，造模組死亡4只，進入治療期大鼠共54只，空白組10只，造模組44只)。造模組隨機分為模型組11只，維酶素組11只，艾灸組22只。艾灸組根據每日艾灸過程中尾溫(尾根1/3)波動情況，在治療28d內大鼠尾溫波動>1℃為熱敏灸組，尾溫波動≤1℃為非熱敏灸組[7-8]，尾溫在1℃上下波動則不納入觀察對象。其中，治療28d內尾溫波動>1℃(熱敏灸組)大鼠11只，尾溫波動≤1℃(非熱敏灸組)大鼠8只，尾溫在1℃上下波動大鼠3只，每組各隨機抽取6只納入最終觀察對象。

1.2 主要試劑與儀器 艾條(江西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，二級精艾絨，規(guī)格：0.8×12cm)；1-甲基-3-硝基-1-亞硝基胍(1-Methyl-3-nitro-1-nitrosoguanidine，MNNG，東京化成工業(yè)株式會社，NJAII-NH)；維酶素片(樂普恒久遠藥業(yè)有限公司，20170210)；胃泌素(GAS)ELISA試劑盒(武漢伊萊瑞特生物科技有限公司，E2NZZCNI)；生長抑素(SS)ELISA試劑盒(武漢伊萊瑞特生物科技有限公司，CYM8RRGDYK)；胃動素(MTL)ELISA試劑盒(武漢伊萊瑞特生物科技有限公司，R2CGX7XD)；白介素6(IL-6)ELISA試劑盒(武漢伊萊瑞特生物科技有限公司，5T84VG82P9)。

電子秤(凱豐集團，ACS-30)；紅外電子體溫計(深圳華盛昌機械實業(yè)有限公司，DT-8806S)；數字式醫(yī)用紅外熱像儀(上海維恩偉業(yè)紅外醫(yī)療器械有限公司，WNⅢ0805)；Leica正置熒光顯微鏡(德國Leica儀器有限公司，DM2000)；石蠟包埋機(德國Leica儀器有限公司，EG1150H)；切片機(德國Leica儀器有限公司，RM2255)；微型高速離心機(美國Labnet公司，C2500-R-230V)；電熱恒溫培養(yǎng)箱(日本亞斯旺公司，ICV-450)；全自動酶標儀(賽默飛世爾科技有限公司，Multiskan MK3)。

1.3 模型建立與評價方法 采用文獻法[9-10]，用蒸餾水配置MNNG為100ug/mL飲用液，錫紙包裹飲水瓶，大鼠自由飲用，每日更換1次。每次按1mL/100g予30%乙醇和2%水楊酸鈉混合液灌胃，3次/周，灌胃前、后禁食水1h。同時輔以饑飽失常方法，即足量喂食1d，禁食1d。模型評價方法：參照《中藥新藥臨床研究指導原則》(2002)組織病理檢查示：①固有腺體萎縮；②黏膜肌層增厚；③可有腸上皮化生或假幽門腺上皮化生；④固有膜炎癥；⑤可有淋巴濾泡形成。

1.4 治療方法 造模結束后第1天起，艾灸組艾灸“中脘”穴區(qū)(取穴定位參照《實驗針灸學》[11])，去除毛發(fā)后將點燃艾條置于大鼠“中脘”穴約3cm處，每次灸40min，灸后按2mL/kg/d予0.9%NaCl灌胃；維酶素組束縛40min后灌服等量維酶素溶液；模型組束縛40min后灌服等量0.9%NaCl，各組均每日1次，共治療28d。治療期間空白組不予以任何刺激。

1.5 艾灸“中脘”穴敏化標準 參照相關研究建立熱敏灸模型方法制定敏化標準[7-8]：艾灸前后應用數字式醫(yī)用紅外熱像儀分別探測大鼠尾部的紅外線溫熱信息，用醫(yī)用紅外熱像系統(tǒng)V2.1記錄小于0.05℃的溫度變化。40min治療過程中，用紅外電子體溫計每5min精確測量大鼠尾溫(尾根1/3)，28天中每天尾溫均升高>1℃即可判為腧穴熱敏現象。

1.6 觀察指標與方法 (1)血清GAS、SS、MTL、1L-6檢測：治療結束后，10%水合氯醛(0.4mL/100g)腹腔麻醉大鼠，腹主動脈采血約5mL，靜置2h，離心15min(3000 r/min)取血清，按照ELISA試劑盒說明操作檢測GAS、SS、MTL、1L-6表達。

(2)胃黏膜組織病理學觀察：取胃后沿胃大彎剪開，冰0.9%NaCl沖洗，肉眼觀察胃黏膜并記錄，取胃黏膜組織大小約0.5cm×0.5cm，10%甲醛固定，HE染色，光鏡下觀察胃黏膜組織病理學變化。

2 結果

2.1 模型建立情況 造模12周后，光鏡下胃組織檢查示：空白組胃黏膜層和肌層厚度正常，黏膜無充血、水腫，腺體豐富且排列整齊；造模組胃黏膜層變薄、充血明顯，肌層增寬，固有層腺體萎縮甚至消失，且排列稀疏不規(guī)則，部分腺體囊性擴張，可見淋巴濾泡和炎癥細胞，可見異形增生，符合CAG病理診斷，提示造模成功(見圖1)。

注：黑色箭頭示異形增生；四角星號示淋巴濾泡浸潤；五角星號示胃腺囊性擴張。

圖1 光鏡下胃黏膜組織病理切片觀察(HE染色×100)

2.2 治療后各組血清GAS、SS、MTL、1L-6比較 由表1可見，與空白組相比，模型組、非熱敏灸組血清GAS表達降低(P<0.05，P<0.01)，但熱敏灸組及維酶素組差異無統(tǒng)計學意義；與模型組相比，熱敏灸組及維酶素組血清GAS表達均升高(P<0.05，P<0.01)，非熱敏灸組差異無統(tǒng)計學意義；與非熱敏灸組相比，熱敏灸組血清GAS表達升高(P<0.05)，但維酶素組差異無統(tǒng)計學意義；熱敏灸組血清GAS表達雖比維酶素組升高，但差異無統(tǒng)計學意義。

與空白組相比，模型組、非熱敏灸組、維酶素組血清SS表達均降低(P<0.05，P<0.01)，但熱敏灸組差異無統(tǒng)計學意義；與模型組相比，熱敏灸組血清SS表達升高(P<0.05)，非熱敏灸組、維酶素組差異無統(tǒng)計學意義；與非熱敏灸組相比，熱敏灸組血清SS表達升高(P<0.05)，但維酶素組差異無統(tǒng)計學意義；熱敏灸組血清SS表達雖比維酶素組升高，但差異無統(tǒng)計學意義。

與空白組相比，模型組、非熱敏灸組血清MTL、1L-6表達均升高(P<0.05，P<0.01)，熱敏灸組MTL、1L-6兩者差異均無統(tǒng)計學意義，維酶素組MTL升高(P<0.05)，1L-6差異無統(tǒng)計學意義；與模型組相比，非熱敏灸、熱敏灸組、維酶素組血清MTL、1L-6表達降低(P<0.05，P<0.01)；與非熱敏灸組相比，熱敏灸組血清MTL、1L-6表達降低(P<0.05)，維酶素組差異無統(tǒng)計學意義；與維酶素組相比，熱敏灸組血清MTL、1L-6表達差異無統(tǒng)計學意義。

3 討論

CAG為胃黏膜發(fā)生淋巴細胞和漿細胞浸潤的慢性萎縮性炎癥性的病變，相當于中醫(yī)學中的“胃脘痛”“嘈雜”“痞滿”“納呆”等病。西醫(yī)認為胃黏膜血流量降低、黏膜營養(yǎng)因子缺乏及血管活性因子改變等是其發(fā)病發(fā)病主要機制，因此治療上多給予改善胃黏膜及胃腸動力等藥物，然而難以從根本上逆轉其病理進程。而針灸的多途徑、多環(huán)節(jié)、多靶點的整體調控不但可以控制病情發(fā)生發(fā)展，甚至可以逆轉萎縮、腸上皮化生及異型增生[12-13]。因此杜元灝等在效能等級針灸病譜中，將CAG界定為針灸Ⅱ級病譜[14](即以針灸治療為主,可獲得整體好轉)。

表1 各組治療后血清GAS、SS、MTL、1L-6比較 pg/mL

注：與空白組比較，1)P<0.05，2)P<0.01；與模型組比較，3)P<0.05，4)P<0.01；與非熱敏灸組比較，5)P<0.05。

胃腸激素是一組廣泛存在于胃腸道的多肽類物質，對維持胃腸道黏膜的完整性和調節(jié)胃酸分泌及胃腸運動等有著重要作用[3-4]。其分泌失調或受體結構及功能的異常均可導致胃腸道疾病的發(fā)生發(fā)展。胃腸激素種類繁多，其中與CAG關系密切的有胃泌素(GAS)，生長抑素(SS),胃動素(MTL)等。

GAS、SS主要由胃竇部G、D細胞分泌，GAS能促進胃酸分泌，增加胃泌酸區(qū)黏膜血流量，對胃黏膜有營養(yǎng)和保護作用[15]。SS則可通過保護谷胱甘肽還原酶活性以維持胃黏膜內非蛋白結合巰基水平，從而防止脂質過氧化，保護胃黏膜[16]，SS還可抑制胃酸分泌及GAS釋放,二者可組成GAS-SS-胃酸分泌軸，在功能上相互協(xié)調,共同維持胃腸道生理功能[17]。有研究表明CAG大鼠因胃竇部黏膜腺體發(fā)生萎縮，數量減少從而導致GAS、SS的含量下降[18-19]。本實驗的研究結果表明模型組的GAS、SS含量均下降，說明CAG大鼠存在血清GAS、SS低表達，與文獻報道結果一致。MTL是一種能夠刺激胃體運動的物質，對胃腸動力和胃腸電活動有顯著影響。MTL增高時，一方面胃運動增強，胃壁平滑肌持續(xù)強烈收縮，阻斷了通過胃壁的小血管，使胃黏膜血流量減少，黏膜缺血，從而造成胃黏膜損傷。另一方面MTL增高可使胃幽門口緊閉，造成胃竇、幽門及十二指腸不協(xié)調運動，從而延緩了胃排空，導致胃內容物停留時間過長，加重了胃黏膜炎性反應[20]。應用熱敏灸治療后,MTL水平明顯降低，且療效優(yōu)于非熱敏灸組，說明降低MTL可能是熱敏灸有效作用的環(huán)節(jié)之一。此外，有研究表明CAG是胃黏膜慢性炎癥的過程，促炎細胞因子(IL-1β和IL-6)的分泌在CAG的發(fā)展中起重要作用[21]。本研究分析了CAG大鼠血清中IL-6的表達，發(fā)現艾灸(熱敏灸、非熱敏灸)和維酶素治療均可降低CAG大鼠血清IL-6水平，減輕炎癥程度，其中熱敏灸組又優(yōu)于非熱敏灸組，與維酶素組療效相當。

綜上所述，熱敏灸可上調CAG大鼠GAS及SS的水平，下調MTL及炎癥因子IL-6的水平，且療效明顯優(yōu)于非熱敏灸組，其作用可能是通過調節(jié)胃腸激素的分泌，改善胃黏膜血流量，抑制炎癥因子產生，減輕胃黏膜損傷來實現的。