張立群

（遼寧省撫順市礦務(wù)局總醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧 撫順 113008）

細(xì)菌感染侵襲血液系統(tǒng)是臨床常見的一種重癥感染，患者病情重，常見高熱不退、休克、疼痛不適等體征，臨床病死率高達(dá)37%。因此，及早明確病原菌對用藥方案的選擇及改善患者的預(yù)后具有十分重要的意義。CLIS血培養(yǎng)程序指南認(rèn)為，標(biāo)本采集后應(yīng)盡量在2 h內(nèi)運(yùn)送、檢查，但仍有部分實(shí)驗(yàn)室無法滿足該要求，導(dǎo)致標(biāo)本采集到病原菌檢出的時間大大延長了。血培養(yǎng)陽性報警時間（Time-to-positivity，TTP）指的是從血液標(biāo)本開始培養(yǎng)至產(chǎn)生微生物生長報警信號所需的時間。有研究顯示，預(yù)培養(yǎng)可縮短TTP，對及早診斷菌血癥具有十分重要的意義。本研究旨在探討不同預(yù)培養(yǎng)條件對常見感染菌TTP值的影響，從而為菌血癥的及早診斷提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 試劑與儀器：杭州天和生物科技提供的腦心浸液培養(yǎng)基；菌株選擇銅綠假單胞菌ATCC27853，腸埃希菌ATCC 25922，金黃色葡萄球菌ATCC29213；血培養(yǎng)系統(tǒng)BacT/Alert 3D及其配套標(biāo)準(zhǔn)厭氧瓶和需氧瓶由法國生物梅里埃公司提供。

1.2 方法：分別用腦心浸液培養(yǎng)基將質(zhì)控菌銅綠假單胞菌ATCC27853，腸埃希菌ATCC 25922，金黃色葡萄球菌ATCC29213配成10C FU/mL、100C FU/mL菌液。銅綠假單胞菌僅接種于需氧瓶，大腸埃希菌菌液、金黃色葡萄球菌菌液同時接種于厭氧瓶和需氧瓶，并將其分別置于25 ℃、37 ℃環(huán)境預(yù)培養(yǎng)0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h。然后分別將10 CFU/mL、100 CFU/mL菌液置于不同血培養(yǎng)瓶類型、不同溫度環(huán)境中預(yù)培養(yǎng)不同的時間段，銅綠假單胞菌共接種24瓶需氧瓶，大腸埃希菌、金葡菌各需接種24瓶厭氧瓶和24瓶需氧瓶，共計120瓶，每瓶接種1 mL菌液，預(yù)培養(yǎng)結(jié)束后立即將其插入BacT/Alert 3D血培養(yǎng)系統(tǒng)，記錄TTP值，若7d后仍未報警，則判定結(jié)果假陰性。對比不同預(yù)培養(yǎng)溫度、不同血培養(yǎng)瓶類型、不同預(yù)培養(yǎng)時間、不同菌液濃度環(huán)境下TTP值間的差異。

2 結(jié)果

在相同培養(yǎng)瓶類型、相同濃度環(huán)境下，銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌在37 ℃預(yù)培養(yǎng)的TTP值比明顯短于25 ℃預(yù)培養(yǎng)的TTP值，P＜0.05。銅綠假單胞菌在25 ℃環(huán)境預(yù)培養(yǎng)12 h，在37 ℃環(huán)境預(yù)培養(yǎng)8 h TTP值顯著縮短，大腸桿菌、金黃色葡萄球菌在25 ℃環(huán)境預(yù)培養(yǎng)8 h，在37 ℃環(huán)境預(yù)培養(yǎng)4 h TTP值均顯著縮短，均有P＜0.05。

3 討 論

銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌是導(dǎo)致膿毒血癥的幾種常見致病菌。銅綠假單胞菌所致膿毒血癥者更易合并其他嚴(yán)重并發(fā)癥，大腸埃希菌是導(dǎo)致血流感染革蘭陰性桿菌中的最為常見的細(xì)菌，金黃色葡萄球菌所致膿毒血癥的癥狀十分嚴(yán)重[1]。一般情況下，菌血癥時機(jī)體血液中的細(xì)菌濃度約為1～10 CFU/mL，而本研究中，將細(xì)菌濃度分別設(shè)置為10 CFU/mL、100 CFU/mL，主要是考慮到若將模擬細(xì)菌的濃度設(shè)置得太低，容易造成假陰性的結(jié)果，因此將細(xì)菌濃度分別設(shè)置為10 CFU/mL、100 CFU/mL，這種細(xì)菌濃度可間接反映出在不同類型血培養(yǎng)瓶、不同預(yù)培養(yǎng)時間、不同溫度、不同濃度培養(yǎng)條件下細(xì)菌的生長動態(tài)[2]。

本研究結(jié)果顯示，25 ℃環(huán)境下預(yù)培養(yǎng)8h或37 ℃環(huán)境下預(yù)培養(yǎng)4 h，大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的生長速率顯著上升，TTP值明顯降低，結(jié)果表明，預(yù)培養(yǎng)法可有效縮短大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的TTP值。此外，本研究還顯示，與大腸桿菌、金黃色葡萄球菌相比，銅綠假單胞菌更易受延遲進(jìn)入監(jiān)測系統(tǒng)的影響。結(jié)果提示，在使用BacT/Alert 3D血培養(yǎng)儀對銅綠假單胞菌進(jìn)行監(jiān)測時，在標(biāo)本采集后應(yīng)在24 h內(nèi)完成轉(zhuǎn)運(yùn)，以降低假陰性率[3]。

綜上所述，銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌的陽性報警時間與預(yù)培養(yǎng)的時間和溫度密切相關(guān)，若采集的標(biāo)本無法及時放入血培養(yǎng)系統(tǒng)，需要將標(biāo)本放置到37 ℃的環(huán)境中進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)，培養(yǎng)時間限定在24 h內(nèi)。