黃學(xué)惠

（百色學(xué)院，廣西 百色 533000）

冬蟲(chóng)夏草（Ophiocordyceps sinensis）是我國(guó)的一種名貴中草藥材，已有1 200 多年的歷史，與人參、鹿茸并稱為我國(guó)氣血滋補(bǔ)最好的三大補(bǔ)品[1]。從生物學(xué)角度說(shuō)，我國(guó)古代中醫(yī)驗(yàn)明，冬蟲(chóng)夏草具有滋陰補(bǔ)腎，益氣養(yǎng)血、止血化瘀、化解疲憊勞咳的功效[2]。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，冬蟲(chóng)夏草對(duì)治療腫瘤生長(zhǎng)具有顯著抑制功效，同時(shí)還能延緩衰老，提高人體機(jī)能。特別是冬蟲(chóng)夏草的提取物蟲(chóng)草多糖，富含多類超氧化酶，是總酚和黃酮等活性成分俱佳的抗氧化劑，在增強(qiáng)人體免疫力方面具有明顯效果[3]。在2005 年，我國(guó)醫(yī)學(xué)專家已經(jīng)驗(yàn)證了當(dāng)前冬蟲(chóng)夏草多糖成分對(duì)人體免疫力提升、抗心律失常、抗輻射、提高身體機(jī)能方面具有極大功效，其多糖成分對(duì)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)保健具有良好的醫(yī)學(xué)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值[4]。目前由于人為因素的影響，冬蟲(chóng)夏草特殊的生產(chǎn)環(huán)境已經(jīng)被過(guò)度挖掘和破壞，野生的冬蟲(chóng)夏草更為稀有，已難以滿足當(dāng)前醫(yī)藥市場(chǎng)的需要。隨著現(xiàn)代生物提取技術(shù)的不斷發(fā)展，已經(jīng)可以大規(guī)模提取人工冬蟲(chóng)夏草的提取物多糖成分，在醫(yī)療保健上的應(yīng)用愈加廣泛，具有極大的開(kāi)發(fā)前景[5]。近幾年來(lái)，有關(guān)醫(yī)藥學(xué)專家發(fā)現(xiàn)，蟲(chóng)草多糖成分可以通過(guò)調(diào)節(jié)人體淋巴細(xì)胞，提高機(jī)體免疫功能，尤其對(duì)于緩解應(yīng)急性疲勞具有良好的效果。運(yùn)動(dòng)員、警察、消防員等高體能消耗和運(yùn)動(dòng)機(jī)能組織損傷的主要人群，在比賽或者工作中，往往存在短時(shí)間內(nèi)的爆發(fā)式能量消耗。根據(jù)其運(yùn)動(dòng)能量消耗曲線，利用冬蟲(chóng)夏草多糖成分，可以對(duì)其進(jìn)行能量補(bǔ)充，降低運(yùn)動(dòng)應(yīng)急性損傷等負(fù)面影響。試驗(yàn)以小鼠為試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)，重點(diǎn)研究冬蟲(chóng)夏草多糖提取物對(duì)緩解應(yīng)急性疲勞的影響，為當(dāng)前運(yùn)動(dòng)型營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑的制備提供一定參考[6]。

1 材料方法

1.1 研究材料

人工分離冬蟲(chóng)夏草真菌，由云南大學(xué)生物試驗(yàn)室進(jìn)行。首先在培養(yǎng)基上連續(xù)培養(yǎng)60 d，去除雜質(zhì)后收集子實(shí)體烘干，利用中草藥粉碎機(jī)粉碎成碎末，再用蒸餾水提取核心營(yíng)養(yǎng)成分。利用氯化鈣去除成分中的蛋白，再用酒精沉淀后烘干成淡黃色多糖分粉末，稱重后確定多糖含量為8%。利用苯酚硫酸法測(cè)定當(dāng)前冬蟲(chóng)夏草多糖提取物測(cè)定濃度為65%左右[7]。

4-二硝基氟苯（NDFB）該試劑由上海市試劑一廠提供，使用前需要用高密度天平稱取50 mg，將其溶解在5 mL 左右的丙酮麻油溶液中，溶液內(nèi)丙酮和麻油的配比為1∶1.25 左右。722 可見(jiàn)光光度計(jì)，由上海市優(yōu)科生產(chǎn)廠提供。

1.2 研究對(duì)象分組

利用單因子隨機(jī)法進(jìn)行試驗(yàn)，將60 只試驗(yàn)小鼠進(jìn)行原始培育，即僅喂食小鼠基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)飼料和飲用水，確保其身體機(jī)能發(fā)展大體相同[8]。基礎(chǔ)飼料營(yíng)養(yǎng)成分如表1 所示。

表1 小鼠培養(yǎng)基礎(chǔ)飼料營(yíng)養(yǎng)成分Tab.1 Nutrient composition of basal feed for mouse

1.3 研究方法

培育20 日后，對(duì)小鼠進(jìn)行體能檢測(cè)，剔除20只體能發(fā)育較差小鼠。將余下的40 只打亂劃分到試驗(yàn)組和對(duì)照組中。令試驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠在同樣的訓(xùn)練泳池中，每日進(jìn)行同樣時(shí)長(zhǎng)的游泳訓(xùn)練，體能訓(xùn)練的時(shí)間為7 d。其中試驗(yàn)組小鼠在每日訓(xùn)練完畢后，使用上述配備的10 mg·kg-1體重的冬蟲(chóng)夏草多糖成分，對(duì)照組小鼠則使用安慰劑，安慰劑的核心成分是葡萄糖，2 組小鼠需要在試驗(yàn)研究人員嚴(yán)格劑量控制下使用各自補(bǔ)充試劑[9]。

因?yàn)檠芯克玫南x(chóng)草多糖整體應(yīng)用了自然水提取方法獲取，可以有效減少因?yàn)闇囟日{(diào)節(jié)和熱效應(yīng)原因?qū)е碌南x(chóng)草內(nèi)多糖成分的結(jié)構(gòu)變化，防止其生物活性降低，以及提取過(guò)程中出現(xiàn)損耗等問(wèn)題，整體安全性更強(qiáng)。最重要的是，因?yàn)樘崛〉南x(chóng)草多糖成分經(jīng)過(guò)試驗(yàn)室質(zhì)檢部門(mén)的嚴(yán)格審查，多糖內(nèi)部不含有多巴胺等興奮成分。

此次研究共對(duì)當(dāng)前參與試驗(yàn)的40 只小鼠進(jìn)行2次抽血化驗(yàn)，第1 次為試驗(yàn)開(kāi)始前凌晨，第2 次為試驗(yàn)結(jié)束后次日凌晨， 2 次抽血均在小鼠空腹下進(jìn)行。測(cè)定當(dāng)前小鼠血液中免疫球蛋白相關(guān)性指標(biāo)，以及補(bǔ)體C3 和C4。檢測(cè)儀器均為國(guó)家級(jí)配比分析儀，具體檢測(cè)方法為免疫比濁，根據(jù)當(dāng)前血液的總補(bǔ)體活性機(jī)構(gòu)，根據(jù)756 型分光儀進(jìn)行溶血測(cè)定[10-11]。

最終的數(shù)據(jù)分析采用SPSS 22.5 對(duì)所有檢驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行樣本處理機(jī)分析，其中P＜0.05。

2 試驗(yàn)結(jié)果及分析

2.1 蟲(chóng)草多糖對(duì)小鼠血液免疫球蛋白影響

冬蟲(chóng)夏草多糖提取對(duì)小鼠血清免疫球蛋白影響測(cè)試結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 冬蟲(chóng)夏草多糖提取對(duì)小鼠血清免疫球蛋白影響測(cè)試結(jié)果Tab.2 Test results of the effects of Ophiocordyceps sinensis polysaccharides extraction on acute fatigue serum immunoglobulin

將上述試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行匯總，根據(jù)表2 數(shù)據(jù)可以看出，經(jīng)過(guò)7 d 的試驗(yàn)訓(xùn)練，試驗(yàn)組1 和試驗(yàn)組2 的小鼠其血項(xiàng)中的IgG、 IgM、 以及IgA 均發(fā)生了明顯的變化。以小鼠原始的血項(xiàng)數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比，可以看出試驗(yàn)組1 進(jìn)行體能訓(xùn)練后的小鼠，其血清指標(biāo)中，三者均出現(xiàn)明顯降低，（P＜0.05）。而試驗(yàn)組2 的小鼠IgG 和IgA 則出現(xiàn)明顯的升高趨向。從試驗(yàn)組2小鼠的血清指標(biāo)檢測(cè)數(shù)據(jù)可以看出，試驗(yàn)組2 小鼠服用冬蟲(chóng)夏草多糖提取物后，可以改變因?yàn)楦邚?qiáng)度運(yùn)動(dòng)和疲勞導(dǎo)致的IgG、IgM 下降。大量的試驗(yàn)也證明了蟲(chóng)草多糖成分對(duì)緩解機(jī)體疲勞有額外幫助[12]。

2.2 冬蟲(chóng)夏草多糖提取對(duì)小鼠補(bǔ)體系統(tǒng)影響試驗(yàn)檢測(cè)

將2 組試驗(yàn)用小鼠的數(shù)據(jù)與試驗(yàn)前小鼠數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比，可以獲取表3 數(shù)據(jù)。

表3 冬蟲(chóng)夏草多糖提取對(duì)應(yīng)急性疲勞影響下小鼠補(bǔ)體系統(tǒng)的影響Tab.3 Effects of Ophiocordyceps sinensis polysaccharide extraction on the complement system of mice under the influence of acute fatigue

由表3 可以看出經(jīng)過(guò)周期體能訓(xùn)練后，試驗(yàn)組1的小鼠內(nèi)血清C3 值和CH50 值明顯下降，而C4 值卻沒(méi)有出現(xiàn)明顯的降低。由此證明，應(yīng)急性疲勞會(huì)對(duì)血清中的C3 和CH50 指標(biāo)生物活性產(chǎn)生明顯的影響性，而對(duì)C4 則無(wú)明顯干擾。而試驗(yàn)組2 小鼠的血清中，C3 值和C4 值不僅沒(méi)有出現(xiàn)降低的情況，反而明顯提高，CH50 值也有顯著上升。由此可見(jiàn)蟲(chóng)草多糖提取物的確可以增強(qiáng)運(yùn)動(dòng)員血清補(bǔ)體系統(tǒng)的恢復(fù)程度。將試驗(yàn)組1 和試驗(yàn)組2 的血液檢測(cè)樣本進(jìn)行對(duì)比，試驗(yàn)組2 小鼠在經(jīng)過(guò)周期訓(xùn)練以后，與對(duì)照組比較，血清中的C3、C4、CH50 值均有明顯的提高，說(shuō)明機(jī)體出現(xiàn)應(yīng)急性疲勞以后，予以補(bǔ)充冬蟲(chóng)夏草多糖成分不僅可以對(duì)應(yīng)急性疲勞導(dǎo)致的C3、C4、CH50 活性降低現(xiàn)象產(chǎn)生抑制，還可以有效促進(jìn)小鼠補(bǔ)體系統(tǒng)功能進(jìn)行增強(qiáng)。從整體上來(lái)說(shuō)，冬蟲(chóng)夏草多糖提取物對(duì)應(yīng)急性運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練導(dǎo)致的機(jī)體自身補(bǔ)體系統(tǒng)活性指標(biāo)衰減的情況具有良好的抑制作用。

3 討論

3.1 蟲(chóng)草多糖對(duì)小鼠血液免疫球蛋白的影響

應(yīng)急性疲勞一般出現(xiàn)在短時(shí)間內(nèi)劇烈的高強(qiáng)度應(yīng)變性運(yùn)動(dòng)，對(duì)機(jī)體自身的疲勞度和爆發(fā)程度有著較為嚴(yán)格的要求。IgG、IgM 以及IgA 代表小鼠機(jī)體內(nèi)血液中的3 種免疫球蛋白，即血液抗體，其與當(dāng)前機(jī)體恢復(fù)性能的好壞具有密切關(guān)系。大量試驗(yàn)證明了血清免疫球蛋白IgG、IgM 以及IgA 的變化可以直接主導(dǎo)機(jī)體的疲勞程度和恢復(fù)程度。冬蟲(chóng)夏草多糖成分中的蛋白質(zhì)維生素和核心微量元素可以有效補(bǔ)充血液氧原料，修復(fù)淋巴細(xì)胞，提高機(jī)體免疫力。

3.2 蟲(chóng)草多糖對(duì)小鼠補(bǔ)體系統(tǒng)的影響

通過(guò)上述試驗(yàn)分析可以看出，冬蟲(chóng)夏草活性糖分提取物對(duì)機(jī)體補(bǔ)體系統(tǒng)的活性力具有積極的促進(jìn)作用，對(duì)于出現(xiàn)應(yīng)急性疲勞的小鼠喂食冬蟲(chóng)夏草多糖成分，可以在一定程度上保持其身體機(jī)能，有效提高自身免疫力，降低小鼠運(yùn)動(dòng)應(yīng)急性疲勞產(chǎn)生的影響，從而縮減疲勞恢復(fù)時(shí)間。根據(jù)上述試驗(yàn)可以看出，對(duì)照組和試驗(yàn)組小鼠均經(jīng)過(guò)等質(zhì)量的高強(qiáng)度體能運(yùn)動(dòng)，對(duì)照組小鼠的血清檢測(cè)樣本顯示了除C4指標(biāo)沒(méi)有明顯減少外，其他活性指標(biāo)均出現(xiàn)明顯降低，證明了運(yùn)動(dòng)應(yīng)急性疲勞會(huì)直接抑制機(jī)體血清，以及C3 和CH50 的活性值，同時(shí)極有可能造成運(yùn)動(dòng)員機(jī)體修復(fù)損傷，減少機(jī)體細(xì)胞的修復(fù)力。試驗(yàn)組小鼠因?yàn)檠a(bǔ)充了冬蟲(chóng)夏草多糖成分，不僅有效避免了當(dāng)前機(jī)體產(chǎn)生的活性降低現(xiàn)象，而且增強(qiáng)了小鼠機(jī)體補(bǔ)體系統(tǒng)的恢復(fù)能力。機(jī)體血清C3 和C4 值沒(méi)有降低，反而有所提高，不僅避免了機(jī)體在應(yīng)急性疲勞是活性降低的情況，更可以增強(qiáng)運(yùn)動(dòng)員的補(bǔ)體系統(tǒng)，提高運(yùn)動(dòng)員訓(xùn)練效果。

4 結(jié)論

蟲(chóng)草多糖成分可以有效提高小鼠血液中C3、C4和CH50 的活性力，增強(qiáng)機(jī)體血清免疫球蛋白的影響性和機(jī)體免疫力，提高機(jī)體補(bǔ)體系統(tǒng)組成成分的含量，緩解小鼠運(yùn)動(dòng)應(yīng)急性疲勞，促進(jìn)機(jī)體水平能力的不斷提高。同時(shí)，蟲(chóng)草多糖成分對(duì)當(dāng)前機(jī)體的活性成分具有良好的補(bǔ)充作用，在實(shí)際應(yīng)用中，能夠補(bǔ)充高能耗人員出現(xiàn)應(yīng)急性疲勞現(xiàn)象時(shí)的體內(nèi)活性。此外蟲(chóng)草不含任何興奮劑成分，兼顧保肝功能，對(duì)人體具有諸多益處。