国产日韩欧美一区二区三区三州_亚洲少妇熟女av_久久久久亚洲av国产精品_波多野结衣网站一区二区_亚洲欧美色片在线91_国产亚洲精品精品国产优播av_日本一区二区三区波多野结衣 _久久国产av不卡

?

RP-HPLC法同時測定脈管復(fù)康膠囊中6種酚酸類成分

2020-01-16 07:08慧,喬正,姜瑋,李敏*
亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥 2019年12期
關(guān)鍵詞:兒茶素鈉脈管

葉 慧,喬 正,姜 瑋,李 敏*

(1.泰州市食品藥品檢驗所,江蘇 泰州 225300;2.泰州市醫(yī)藥高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)園區(qū)疫苗工程中心,江蘇 泰州 225300)

脈管復(fù)康膠囊屬于國家基本藥物品種,現(xiàn)行執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)收錄在《國家食品藥品監(jiān)督管理局國家藥品標(biāo)準(zhǔn)》2014年中藥(二)(標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行編號為YBZ25562005-2011Z)[1],主要由丹參、雞血藤兩味藥材經(jīng)過煎煮、濃縮,再加入郁金、乳香、沒藥粗粉混勻、干燥制成,具有活血化瘀、通經(jīng)活絡(luò)的功效,臨床上主要用于瘀血阻滯、脈管不通引起的脈管炎、硬皮病、動脈硬化性下肢血管閉塞癥,對冠心病、腦血栓后遺癥也有一定治療作用[2-5]。

脈管復(fù)康膠囊處方中丹參藥材為君藥,目前已報道的丹參的化學(xué)活性成分達(dá)100余種[6-10],以對丹參中水溶性成分和脂溶性成分進(jìn)行測定的方法來評價丹參及其制劑質(zhì)量多有報道[11-15]。藥品處方中丹參主要通過煎煮、濃縮入藥,保留水溶性成分,脂溶性成分流失;水溶性成分主要以酚酸類成分為主,如丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B等。脈管復(fù)康膠囊現(xiàn)行執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)中,采用不同的色譜條件,在280 nm波長測定丹參素鈉的含量、在278 nm波長測定丹酚酸B的含量,工作量大且繁雜,不能全面體現(xiàn)脈管復(fù)康膠囊的質(zhì)量。本研究目的在于建立HPLC法同時測定脈管復(fù)康膠囊中丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B和丹酚酸A的含量,既豐富了脈管復(fù)康膠囊的定量指標(biāo),又為更加全面地評價和控制其質(zhì)量提供實驗依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

Waters Acquity Arc高效液相色譜儀(包括Empower?3工作站,四元梯度泵,2998 PDA檢測器,自動進(jìn)樣器和柱溫箱,美國Waters公司);8200型超聲波清洗器(功率500 W,頻率53 kHz,上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司);LR16-A型高速離心機(jī)(北京雷勃爾離心機(jī)有限公司);XS105DU型電子天平(十萬分之一,瑞士Mettler公司);AL204型電子天平(萬分之一,瑞士Mettler公司);Milli-Q超純水處理系統(tǒng)(美國M ILLIPORE公司)。

1.2 試藥

丹參素鈉對照品(批號:110855-201614,純度:98.1%)、丹酚酸B對照品(批號:111562-201716,純度:94.1%)、原兒茶醛對照品(批號:110810-201608,純度:99.3%)、迷迭香酸對照品(批號:111871-201706,純度:90.5%)均購自中國食品藥品檢定研究院;丹酚酸A(批號:P12O8F45509,HPLC≥98%)、紫草酸(批號:Y04J10H75487,HPLC≥98%)均購于上海源葉生物科技有限公司;脈管復(fù)康膠囊(陜西東泰制藥有限公司,批號:8E07、8D01、8F14);色譜純乙腈(西班牙薩勞公司);甲醇為分析純(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司);水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Waters XBridge? C18(250 mm×4.6 mm,3.5 μm);流動相:0.05%三氟乙酸(A)-乙腈(B),梯度洗脫程序:0~30 min,2%B~33%(B);30~35 min,33%~2%(B);35~45 min,2%(B);流速:0.8 mL/min;柱溫:25 ℃;進(jìn)樣量:10 μL;檢測波長:280 nm,在上述色譜條件下,理論塔板數(shù)均不低于5 000,相鄰峰之間分離度均大于1.5。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對照品溶液的配制 精密稱取丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A對照品適量,精密稱定,加10%甲醇溶液制成濃度分別為78.09、3.94、5.27、8.13、87.32和16.27 μg/mL的混合對照品溶液,置于4 ℃冰箱避光保存。

2.2.2 供試品溶液的配制 取裝量差異項下的內(nèi)容物約0.5 g,精密稱定,置100 mL棕色容量瓶中,定容,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,12 000 r/min離心10 min,作為供試品溶液,置于4 ℃冰箱避光保存。

2.3 方法學(xué)驗證

2.3.1 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.2.1”項下的混合對照品溶液2、5、8、10、15、20、25 μL,按“2.1”項下的色譜條件進(jìn)樣分析。以色譜峰峰面積(Y)為縱坐標(biāo),以進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程,各化合物在相應(yīng)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。結(jié)果見表1。

表1 線性關(guān)系考察

2.3.2 精密度試驗 精密吸取“2.2.1”項下的混合對照品溶液10 μL,按“2.1”項下色譜條件,連續(xù)進(jìn)樣6次,記錄上述6種成分的峰面積,結(jié)果丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B和丹酚酸A的峰面積的RSD分別為0.80%、0.27%、0.40%、0.55%、0.38%和0.53%,表明儀器精密度良好。

2.3.3 重復(fù)性試驗 取同一批號樣品6份(批號:8E07),按照“2.2.2”項下方法制備供試品溶液并按“2.1”項色譜條件測定,結(jié)果丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A的平均含量(n=6)分別為4.62 、0.206、0.430 、0.790、3.14和2.00 mg/粒,RSD分別為0.63%、0.92%、1.41%、2.20%、0.60%、1.00%,表明本方法重復(fù)性好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗 吸取同一份供試品溶液(批號:8E07),按“2.1”項色譜條件,分別在0、2、4、8、12、18、24 h進(jìn)樣分析,結(jié)果A峰面積的RSD(n=6)分別為0.17%、1.02%、1.18%、1.79%、0.19%和0.57%,表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.5 方法專屬性考察 取缺丹參藥材的陰性樣品,依法制備陰性樣品溶液;按“2.1”項色譜條件,分別對對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液進(jìn)樣分析,記錄色譜圖,對照品溶液出峰順序為:丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸 B、丹酚酸 A,結(jié)果供試品溶液與對照品溶液相應(yīng)峰保留時間一致,陰性樣品溶液無干擾,且各組相鄰成分之間分離度較好,R>1.5。詳見圖1。

A.混合對照品;B.樣品;C.陰性樣品;1.丹參素鈉;2.原兒茶醛;3.迷迭香酸;4.紫草酸;5.丹酚酸B;6.丹酚酸A

2.3.6 加樣回收率試驗 取已知含量的樣品(批號:8E07)6份,每份0.25 g,精密稱定于100 mL容量瓶中,每份精密加入丹參素鈉(135.77 μg/mL)、原兒茶醛(25.20 μg/mL)、迷迭香酸(121.67 μg/mL)、紫草酸(39.83 μg/mL)、丹酚酸B(107.93 μg/mL)、丹酚酸A(39.87 μg/mL)的混合對照品溶液10 mL,按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液,按“2.1”項色譜條件進(jìn)行分析測定,計算回收率。結(jié)果見表2。

表2 加樣回收率測定結(jié)果 (n=6)

2.4 樣品測定

取3個批次脈管復(fù)康膠囊(批號:8E07、8D01、8F14),每批取0.5 g,精密稱定,按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液,按“2.1”項色譜條件進(jìn)行分析測定,測定峰面積,用外標(biāo)法計算出丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸 B、丹酚酸 A的含量。測定結(jié)果見表3。

表3 樣品含量測定結(jié)果 (mg/粒,n=3)

3 討論

3.1 有效成分的選擇

丹參中水溶性的酚酸類成分遇熱易分解,脈管復(fù)康膠囊的制法中采用煎煮水提的方法提取有效成分,進(jìn)而導(dǎo)致一些遇熱易分解的成分損失,由于6個成分均是受熱易分解的成分,故在樣品溶液前處理過程中盡量避免加熱等,所以色譜柱溫選擇25 ℃,且進(jìn)樣時樣品溫度選擇10 ℃,樣品溶液在儲存過程中選擇4 ℃避光保存[18-21]。

3.2 前處理及流動相的考察

在選擇流動相組成及比例時,考察了甲醇-水體系與乙腈-水體系對基線、峰型以及分離度等的影響。通過比較研究,乙腈-水體系梯度洗脫時的峰型以及分離度均優(yōu)于甲醇-水體系,其能夠較好地分離丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B和丹酚酸A 6種成分,同時加入0.05%的三氟乙酸以獲得更優(yōu)的峰型。

本文所測得6個成分均為水溶性酚酸類成分,在溶劑選擇時分別選用水、10%甲醇、30%甲醇、40%甲醇、50%甲醇、80%甲醇、甲醇,結(jié)果10%甲醇為提取溶劑時,丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸、紫草酸提取效率最高,而甲醇作為提取溶劑時,丹酚酸B和丹酚酸A,提取效率最高,綜合考慮,最終選用10%甲醇作為提取溶劑;在物料比例選擇中,分別稱取0.3、0.5、1.0、1.5、2.0 g,經(jīng)相同的前處理過程,總體看來6個成分在稱樣量為0.5 g時,提取效率最佳;在提取方式的考察時,回流提取和超聲過程均會導(dǎo)致有效成分的分解變質(zhì),而且在成藥的制法中,水溶性有效成分已經(jīng)通過水提的方式提取出,故選用直接溶解的方式。

本文在原標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上,新增原兒茶醛、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸A 4個化學(xué)成分的含量測定,以丹參素鈉、原兒茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B和丹酚酸A作為考察指標(biāo),補充了原標(biāo)準(zhǔn)的不足之處,節(jié)約成本的同時又大大提高了工作效率。該方法快速、準(zhǔn)確,重復(fù)性高,可作為脈管復(fù)康膠囊的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

猜你喜歡
兒茶素鈉脈管
挨打的蜜峰
熒光分光光度法測定水中示蹤劑熒光素鈉示蹤劑
關(guān)于丹參素鈉-PLGA緩釋微球的制備及藥劑學(xué)性能評價
維生素C在兒茶水溶液中的穩(wěn)定性探究
兒茶治好了我的鼻炎
脈管復(fù)康片聯(lián)合復(fù)方甘草酸苷和米諾地爾外用治療斑禿療效觀察
復(fù)方兒茶酊的生藥學(xué)鑒定及質(zhì)量控制
高頻電凝與非手術(shù)治療血管瘤和脈管畸形的療效觀察
貝前列素鈉對全腦缺血/再灌注大鼠腦損傷的作用及機(jī)制
新魚腥草素鈉注射液制劑處方及工藝的研究