任春梅 楊柳 繆倩 陸芳 顧雪 程兆榜

摘要：【目的】明確江蘇省玉米小斑病菌的致病力水平，為玉米抗病品種選育及其田間合理布局提供指導(dǎo)，也為玉米小斑病的綜合防治提供理論依據(jù)?！痉椒ā坎捎贸Ｒ?guī)組織分離法對(duì)采自江蘇省東臺(tái)、如東、豐縣和東海4個(gè)市（縣）的疑似小斑病玉米葉片進(jìn)行單孢分離，顯微鏡下觀察孢子形態(tài);基于rDNA-ITS對(duì)分離菌株進(jìn)行分子鑒定和系統(tǒng)進(jìn)化分析;選用8個(gè)自交系玉米品種（Mo17、B73、丹340、羅31、掖478、齊319、昌7-2和掖107），采用噴霧接種法對(duì)分離菌株進(jìn)行致病力測(cè)定?！窘Y(jié)果】分別從江蘇省東臺(tái)、如東、豐縣和東海4地各分離到1株菌株，依次標(biāo)記為DT、RD、FX和DH，形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)分離菌株存在類似于玉米小斑病菌的孢子;以分離菌株的DNA為模板，PCR擴(kuò)增得到550 bp左右的預(yù)期片段，測(cè)序分析發(fā)現(xiàn)其與玉米小斑病菌多個(gè)分離株序列的同源性達(dá)97%;結(jié)合分離菌株的形態(tài)學(xué)和分子鑒定，將分離菌株鑒定為玉米小斑病菌的江蘇分離株。系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化分析結(jié)果表明，東臺(tái)分離株（DT）獨(dú)立一枝，說(shuō)明其來(lái)源較特殊。致病力分析結(jié)果顯示，不同菌株間存在著明顯的致病力分化，其中來(lái)自東臺(tái)的菌株（DT）致病力最強(qiáng);不同玉米品種在同一菌株上的抗感性差異較大，對(duì)玉米小斑病表現(xiàn)為抗病的有齊319和Mo17。【結(jié)論】可選用東臺(tái)菌株（DT）作為江蘇省玉米種質(zhì)資源抗病性篩選的接種菌株，指導(dǎo)抗病品種的選育;可挖掘齊319和Mo17的抗病基因，為玉米小斑病抗病品種的選育提供材料。

關(guān)鍵詞： 玉米小斑病菌;單孢分離;分子鑒定;致病力;江蘇省

中圖分類號(hào)： S435.131.4? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：2095-1191（2020）10-2454-07

Isolation identification and pathogenicity analysis of

Bipolaris maydis in Jiangsu

REN Chun-mei1， YANG Liu1， MIAO Qian1， LU Fang1， GU Xue2， CHENG Zhao-bang1*

（1Institute of Plant Protection， Jiangsu Academy of Agricultural Sciences， Nanjing? 210014， China; 2College of Plant Protection， Henan Agricultural University， Zhengzhou? 450040， China）

Abstract：【Objective】The objective of this study was to clarify the pathogenicity of Bipolaris maydis in Jiangsu， provide theoretical basis forscreening disease resistant maize varieties and their layout in field， as well as for the comprehensive control of leaf spot of maize. 【Method】In this study， single spores were isolated from leaves of suspected leaf spot diseased maize in Dongtai， Rudong， Fengxian and Donghai of Jiangsu by convention tissue separation. The spore morphology was observed under microscope， and molecular identification and phylogenetic analysis were conducted based on rDNA-ITS. The pathogenicity of the isolates was determined by a spray inoculation method with eight inbred maize varie-ties（Mo17， B73， Dan340， Luo31， Ye478， Qi319， Chang7-2 and Ye107）. 【Result】Eachs train was isolated from Dongtai， Rudong， Fengxian and Donghai of Jiangsu， and marked as DT， RD， FX and DH. The results showed that the spores similar to B. maydis were observed in morphology， and the expected fragment of 550 bp was amplified by PCR with isolatesDNA as template. The sequence analysis showed that the sequence homology between the Jiangsu isolates and the others was 97%， so it was identified as the B. maydis isolated from Jiangsu combined with morphology and molecular identification. Phylogenetic analysis showed that the Dongtai isolate（DT） was an independent branch， indicating that it had a special origin. The pathogenicity analysis showed that there were obvious pathogenic differentiation among different strains， among which strains from Dongtai（DT） had the strongest pathogenicity; the resistance of different maize varieties on the same pathogenic strain was quite different， and Qi319 and Mo17 were resistant tomaize leaf blight. 【Conclusion】Therefore， Dongtai strain（DT） can be selected as the screening strain for disease resistance of maize varieties in Jiangsu， to guide the breeding of resistant varieties. Resistance genes of Qi319 and Mo17 can be mined， which can provide reliable materials for breeding resistant maize varieties ofmaize leaf blight.

Key words： Bipolaris maydis; single spore isolation; molecular identification; pathogenicity; Jiangsu

Foundation item： Agriculture Major Variety Creation Program of Jiangsu（PZCZ201710）

0 引言

【研究意義】玉米小斑病屬于世界性流行病害，在熱帶濕潤(rùn)和亞熱帶地區(qū)廣泛發(fā)生，目前該病在拉丁美洲、歐洲和亞洲部分地區(qū)均有發(fā)生（Zwonitzer et al.，2010）。我國(guó)早在20世紀(jì)20年代江蘇地區(qū)就發(fā)現(xiàn)有玉米小斑病發(fā)生，但危害程度極低，當(dāng)時(shí)未引起重視（陳利鋒和徐敬峰，2007）。20世紀(jì)60年代后，由于大量種植感病品種，玉米小斑病害日趨加重，湖北宜昌和河北石家莊都曾因此病大流行造成20%以上的產(chǎn)量損失（董金皋，2013）。20世紀(jì)70年代后，隨著抗病品種的推廣，玉米小斑病的發(fā)生和危害基本得到控制。但進(jìn)入21世紀(jì)后，由于抗病品種大面積單一化種植和全球氣候變暖，我國(guó)部分玉米產(chǎn)區(qū)小斑病仍時(shí)有嚴(yán)重發(fā)生，損失慘重。據(jù)王曉鳴（2010）報(bào)道，2003—2004年河北、河南、山東和安徽玉米主產(chǎn)區(qū)小斑病發(fā)生較嚴(yán)重，僅河南駐馬店夏玉米小斑病發(fā)病面積達(dá)2.13萬(wàn)ha，占玉米種植總面積的50%以上，造成經(jīng)濟(jì)損失3000萬(wàn)元左右。玉米作為江蘇省重要的糧食作物，其種植面積及范圍正逐年上升，其中鮮食玉米在江蘇已進(jìn)行大面積推廣（張世博等，2018），而江蘇玉米生長(zhǎng)期溫暖潮濕的環(huán)境很適合小斑病菌的繁殖和傳播，因而需重視對(duì)江蘇省玉米小斑病的防控。不同地區(qū)玉米小斑病菌的致病力存在明顯差異，對(duì)鮮食玉米的優(yōu)質(zhì)、安全生產(chǎn)造成了極大威脅（常佳迎等，2020）。因此，明確江蘇省玉米小斑病菌的致病力水平，不僅為本省玉米種質(zhì)資源的抗病性篩選提供最適菌株，還能為玉米品種在當(dāng)?shù)氐暮侠聿季痔峁﹨⒖??！厩叭搜芯窟M(jìn)展】玉米小斑病的病原菌為玉蜀黍平臍孺孢（Bipolaris maydis），病菌傳播依靠溫暖潮濕的環(huán)境，最適生長(zhǎng)溫度為26～29 ℃，可在玉米的全生育期進(jìn)行侵染，主要為害玉米的葉片、葉鞘、苞葉和果穗，發(fā)病嚴(yán)重時(shí)造成果穗腐爛，導(dǎo)致嚴(yán)重減產(chǎn)甚至絕收（廖蕾，2017）。玉米小斑病的主要初侵染源是田間病株殘?bào)w內(nèi)外越冬的病菌分生孢子（王曉梅等，2007），其分生孢子多細(xì)胞，長(zhǎng)橢圓形或近梭形，單生或束生，欖褐色至褐色，孢痕明顯（謝紅輝，2010），一般的形態(tài)學(xué)鑒定方法可對(duì)病原菌進(jìn)行初步判定。對(duì)自然界中真菌的分離鑒定，先對(duì)病組織表面進(jìn)行消毒，然后用常規(guī)培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)分離，為了得到純化的菌株，一般進(jìn)行單孢分離（張?zhí)煊睿?983）。但在自然界中真菌的種類繁多，形態(tài)學(xué)特征較復(fù)雜，有些真菌的孢子形態(tài)有相似之處，因此，單純的形態(tài)學(xué)鑒定方法已不能滿足需要，需輔以一定的分子生物學(xué)鑒定方法。真菌在內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔（rDNA-ITS）區(qū)具有高度保守性，因此rDNA-ITS序列鑒定已成為病原真菌鑒定和遺傳特征分析的主要手段（Cannon et al.，2012）。病原菌具有破壞寄主并誘發(fā)病害的特性，即致病性（許志剛，2001）。玉米小斑病菌是一種異宗配合真菌，在自然條件下存在2種交配型，有有性和無(wú)性兩種生殖方式（Turgeon et al.，1993）。病原物在復(fù)雜多變的環(huán)境中，經(jīng)過(guò)與寄主植物的相互選擇，其致病性會(huì)朝著克服寄主抗性的方向變化，進(jìn)而導(dǎo)致致病性分化。目前，國(guó)內(nèi)不同地區(qū)玉米小斑病菌的致病性已有一些研究。陸寧海等（2016）鑒定河南新鄉(xiāng)地區(qū)玉米小斑病菌的優(yōu)勢(shì)小種為O小種，其致病力存在明顯差異;代玉立等（2018）明確了福建省各地區(qū)玉米小斑病菌存在明顯的致病力分化現(xiàn)象;甘林等（2018）根據(jù)小斑病菌在玉米上產(chǎn)生的病斑類型將福建各地區(qū)的菌群劃分為15個(gè)致病型;常佳迎等（2020）測(cè)定了黃淮海地區(qū)和海南三亞玉米南繁基地玉米小斑病菌的致病性，發(fā)現(xiàn)強(qiáng)致病菌分布頻率上海南三亞優(yōu)于黃淮海地區(qū)?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】前人研究表明，玉米小斑病菌極易產(chǎn)生致病力分化現(xiàn)象，許多地區(qū)的小斑病菌存在多種致病類型。目前，有關(guān)江蘇省玉米小斑病菌致病力的研究尚未見(jiàn)報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】采用常規(guī)組織分離法對(duì)江蘇省玉米小斑病菌進(jìn)行單孢分離，基于rDNA-ITS對(duì)分離菌株進(jìn)行分子鑒定和系統(tǒng)進(jìn)化分析，再選用8個(gè)自交系玉米品種對(duì)分離菌株進(jìn)行致病力測(cè)定，以明確江蘇省玉米小斑病菌的致病力水平，為玉米抗病品種的選育及其田間合理布局提供指導(dǎo)，也為玉米小斑病的綜合防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

2019年7月在江蘇省東臺(tái)（東經(jīng)120?18′36″，北緯32?50′24″）、如東（東經(jīng)121?10′48″，北緯32?19′48″）、豐縣（東經(jīng)116?34′12″，北緯34?47′24″）和東海（東經(jīng)118?45′，北緯34?32′24″）4個(gè)市（縣）的夏播玉米地采集疑似玉米小斑病葉片，分別干燥保存帶回實(shí)驗(yàn)室。供試的8個(gè)致病力測(cè)定玉米品種由江蘇省種子管理站提供，分別為Mo17、B73、丹340、羅31、掖478、齊319、昌7-2和掖107。

1. 2 病原菌分離培養(yǎng)

1. 2. 1 組織分離 將病葉用自來(lái)水沖洗干凈，取病健交接處剪成邊長(zhǎng)2～3 mm的正方形小塊。剪下的病葉用無(wú)菌水沖洗10 s，2%次氯酸鈉消毒2 min，75%酒精消毒30 s，再用無(wú)菌水沖洗3次，然后置于滅菌后潮濕的濾紙上，于27 ℃恒溫培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)2～3 d。

1. 2. 2 單孢分離 參考方中達(dá)（1998）的方法，在顯微鏡下檢查病組織分生孢子生長(zhǎng)情況。有孢子生長(zhǎng)的部位用無(wú)菌水洗下，靜置1～2 min，取試管上半部分的孢子懸浮液30～50 μL均勻涂布在WA培養(yǎng)基上，暗培養(yǎng)至孢子萌發(fā)。待出現(xiàn)單個(gè)孢子時(shí)，用自制的挑孢針挑取孢子，轉(zhuǎn)移到加入慶大霉素的PDA培養(yǎng)基上，于27 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1. 2. 3 菌株純化 用接種針挑取培養(yǎng)基上3個(gè)圓形菌塊，置于新的PDA培養(yǎng)基上，底部朝上放入培養(yǎng)箱中27 ℃暗培養(yǎng)5～7 d。

1. 3 病原菌鑒定

1. 3. 1 形態(tài)學(xué)鑒定 純化后的菌株置于培養(yǎng)箱內(nèi)27 ℃再培養(yǎng)7 d左右，觀察并描述菌落的形態(tài)。用乳酚油為浮載劑制作少量菌絲的載玻片，在普通光學(xué)顯微鏡下觀察孢子及分生孢子梗的形態(tài)，根據(jù)魏景超（1979）的《真菌鑒定手冊(cè)》和喬秉善（2012）的《中國(guó)氣傳真菌彩色圖譜》進(jìn)行分類鑒定。

1. 3. 2 rDNA-ITS分子鑒定

1. 3. 2. 1 DNA提取 純化后的菌落基本長(zhǎng)滿平板時(shí)，刮取菌絲體放入研缽中，加入液氮快速研磨，依照2×T5 Direct PCR Kit（Plant）試劑盒（南京擎科生物科技有限公司）操作步驟，采用加熱裂解法抽提DNA，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1. 3. 2. 2 PCR擴(kuò)增 擴(kuò)增真菌的18S通用引物ITS1和ITS4由南京擎科生物科技有限公司合成。PCR反應(yīng)體系25.0 μL：12.5 μL 2×T5 Direct PCR Mix（Plant），10 μmol /L上游、下游引物各1.0 μL，DNA模板2.0 μL，8.5 μL ddH2O。擴(kuò)增程序根據(jù)T5 Direct PCR Kit（Plant）試劑盒進(jìn)行操作。取4.0 μL PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后送至南京金斯瑞生物科技有限公司測(cè)序。

1. 3. 2. 3 序列比對(duì)及分析 使用NCBI的GenBank核酸數(shù)據(jù)庫(kù)中的BLAST，輸入測(cè)序序列，進(jìn)行同源性搜索，獲得同源性最高的真菌序列，鑒別病原菌屬于哪種真菌。再引用GenBank中同一真菌序列，用MEGA 6.0構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹。

1. 4 病原菌致病性測(cè)定

1. 4. 1 玉米苗準(zhǔn)備 將Mo17、B73、丹340、羅31、掖478、齊319、昌7-2和掖107玉米種子分別播于長(zhǎng)540～600 mm、寬280～300 mm的穴盤中。每菌株接種每種玉米品種3穴盆。玉米苗在28 ℃左右溫室中長(zhǎng)至12片左右葉時(shí)，每個(gè)穴盆按30株的苗量進(jìn)行接種。

1. 4. 2 孢子懸浮液制備 用挑菌針在長(zhǎng)勢(shì)良好的培養(yǎng)基上取4塊菌塊，分別放置在滅菌的高粱培養(yǎng)基中，標(biāo)注菌種名稱和接種時(shí)間。置于培養(yǎng)箱中27 ℃暗培養(yǎng)7 d，觀察若袋內(nèi)1/2的高粱粒表面長(zhǎng)有菌絲，即用無(wú)菌水淘洗高粱粒，平鋪于托盤中，蓋上濕紗布保濕培養(yǎng)7 d，期間每2 d噴水保濕1次。待高粱粒長(zhǎng)滿菌絲后再用無(wú)菌水沖洗，用2層紗布過(guò)濾，在顯微鏡下觀察濾液中孢子量，若每視野孢子量在20個(gè)以上，即可獲得所需濃度的孢子懸浮液。

1. 4. 3 接種方法 參考Dai等（2016）的孢子懸浮液人工噴霧接種法，待玉米植株長(zhǎng)到11～13片葉時(shí)進(jìn)行接種。將產(chǎn)孢培養(yǎng)基用清水淘洗，2層紗布過(guò)濾，濾液中加入Tween-20，一般制備成1×105個(gè)孢子/mL濃度的孢子懸浮液。用噴壺將孢子懸浮液噴灑到玉米喇叭口，接種后7 d內(nèi)每日噴霧清水進(jìn)行保濕。

1. 4. 4 病情調(diào)查 接種10 d后，根據(jù)玉米小斑病病級(jí)劃分標(biāo)準(zhǔn)調(diào)查每株玉米穗部的上、下各3葉，記載每份材料的總體病情級(jí)別。病情級(jí)別劃分標(biāo)準(zhǔn)參考NY/T 1248.2—2006《玉米抗病蟲性鑒定技術(shù)規(guī)范第2部分：玉米抗小班病鑒定技術(shù)規(guī)范》。將參試分離物劃分為HV、SH、MV、SL和LV等5個(gè)致病類型，致病力強(qiáng)弱為HV>SH>MV>SL>LV。當(dāng)菌株病級(jí)≥7級(jí)為強(qiáng)致病力（HV），病級(jí)=5級(jí)為次強(qiáng)致病力（SH），病級(jí)=3級(jí)為中致病力（MV），病級(jí)=1級(jí)為次弱致病力（SL），病級(jí)<1級(jí)為弱致病力（LV）。

2 結(jié)果與分析

2. 1 病原菌形態(tài)觀察結(jié)果

分別從江蘇省東臺(tái)、如東、豐縣和東海4地各分離到1株菌株，依次標(biāo)記為DT、RD、FX和DH，對(duì)各菌株進(jìn)行再純化，培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)4株菌株的菌落形態(tài)一致，菌落生長(zhǎng)速度較慢，顏色呈灰黑色，質(zhì)地緊密，氣生菌絲不太發(fā)達(dá)（圖1）。菌株孢子梭形或長(zhǎng)橢圓形，伸直或多向一側(cè)彎曲，一般為多細(xì)胞，有6～8個(gè)隔膜;單個(gè)孢子大小為60.0～100.0 ?m×7.5～10.0 ?m，顏色多為褐色;分生孢子梗也為褐色，直或呈膝狀曲折（圖2）。綜合分離菌株的形態(tài)特征初步鑒定為玉米小斑病菌。

2. 2 病原菌的分子鑒定結(jié)果

2. 2. 1 PCR擴(kuò)增 以分離得到的4株菌株DNA為模板，基于通用引物IST1和IST4進(jìn)行PCR擴(kuò)增，產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，4株菌株均擴(kuò)增得到長(zhǎng)度約550 bp的預(yù)期擴(kuò)增片段，陰性對(duì)照樣品未擴(kuò)增到條帶（圖3）。

2. 2. 2 序列比對(duì)及分析 回收電泳片段進(jìn)行序列測(cè)定，結(jié)果表明，4株菌株的目的基因片段均含550個(gè)核苷酸，其序列全長(zhǎng)為540 bp，將4株菌株的擴(kuò)增產(chǎn)物序列提交至NCBI的GenBank核酸數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行BLAST比對(duì)，搜索同源性序列，發(fā)現(xiàn)其與玉米小斑病菌多個(gè)分離株rDNA-ITS核糖核酸序列的同源性達(dá)97%，說(shuō)明4株菌株為玉米小斑病菌。

運(yùn)用MEGA 6.0對(duì)江蘇4株菌株與已發(fā)表的13株玉米小斑病菌分離株構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹（圖4）。從系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹可看出，17株分離株可分為兩大組，其中江蘇東臺(tái)分離株（DT）獨(dú)立聚為一支，說(shuō)明其來(lái)源較特殊;江蘇的其他3株分離株（RD、FX和DH）與已發(fā)表的我國(guó)四川3株分離株同為一組，說(shuō)明其具有更高的親緣關(guān)系，均來(lái)自于我國(guó);其他來(lái)自于泰國(guó)、荷蘭和印度的分離物聚在一組，說(shuō)明與本地分離株在進(jìn)化上存在一定的地理隔離。

2. 3 致病性測(cè)定結(jié)果

2. 3. 1 自交系玉米發(fā)病時(shí)間的觀察 8個(gè)自交系玉米品種在接種4株分離株后的顯癥時(shí)間如表1所示，接種后最快顯癥的是東臺(tái)分離株（DT），最快顯癥時(shí)間為10 d;最慢顯癥時(shí)間為28 d，是來(lái)自于東海的分離株（DH）;其余菌株的顯癥時(shí)間在10～28 d。不同菌株在同一自交系品種上的顯癥時(shí)間也不同，說(shuō)明不同分離株存在著發(fā)病時(shí)間的快慢，證明其致病力存在差異。

2. 3. 2 菌株的致病力分化 4株菌株在8個(gè)自交系玉米品種上表現(xiàn)出不同的致病類型（表2），不同菌株間的致病力差異明顯。其中，DT菌株和RD菌株的致病力較強(qiáng)，在羅31上表現(xiàn)為強(qiáng)致病型;而FX和DH 2株菌株在羅31上表現(xiàn)為次強(qiáng)致病型，綜合比較4株菌株在8個(gè)鑒別品種上的致病類型，以DT菌株的致病力最強(qiáng)。同一菌株在不同品種上表現(xiàn)出不同的致病型，如DT菌株對(duì)B73、掖478和昌7-2均表現(xiàn)為次強(qiáng)致病型，對(duì)丹340和Mo17表現(xiàn)為中致病型，對(duì)掖107表現(xiàn)為次弱致病型，而對(duì)齊319表現(xiàn)為弱致病型。表明同一菌株在不同品種上的致病型呈多樣性，各品種的抗體也表現(xiàn)出明顯差異，對(duì)玉米小斑病抗性較好的品種有齊319和Mo17。

3 討論

玉米小斑病嚴(yán)重影響玉米的產(chǎn)量和品質(zhì)，其病菌分生孢子極易隨氣流和雨水傳播，危害玉米的葉片、葉鞘、苞葉和果穗，甚者病斑遍布整個(gè)玉米植株引起枯死，輕者減產(chǎn)10%～20%，重者減產(chǎn)30%～80%，甚至絕收。近年來(lái)，江蘇省玉米種植面積呈逐年上升趨勢(shì)，隨著種植面積的擴(kuò)大、種植結(jié)構(gòu)調(diào)整、玉米品種更替及頻繁的引種交流，使得玉米小斑病菌的致病力發(fā)生了新變化，目前玉米小斑病仍是江蘇省玉米生產(chǎn)上的重要葉部病害。因此，本研究通過(guò)調(diào)查和采集江蘇省玉米主產(chǎn)區(qū)疑似小斑病病葉，分離鑒定出江蘇玉米小斑病菌分離株，測(cè)定并分析其致病力，研究結(jié)果既豐富了江蘇省玉米小斑病菌的菌源，為玉米抗病性鑒定提供本地菌株，又可監(jiān)測(cè)江蘇省玉米小斑病菌致病力分化，為江蘇省玉米品種選育推廣及玉米小斑病的綜合防控提供理論依據(jù)。

孔令曉等（2005）研究認(rèn)為，植物病原菌種內(nèi)群體分化主要是病原菌與其賴以生存的寄主在一定環(huán)境條件下相互作用的結(jié)果，兩者相互制約。我國(guó)地域遼闊，物產(chǎn)豐富，一般在同一地域會(huì)種植多個(gè)玉米品種，不同地域又會(huì)連續(xù)多年種植一個(gè)或多個(gè)相同的玉米品種，很容易在這一片地區(qū)長(zhǎng)期使用同一細(xì)胞質(zhì)類型的玉米種質(zhì)，導(dǎo)致病原菌也出現(xiàn)與細(xì)胞質(zhì)相對(duì)應(yīng)的致病類型。早在1991年，劉克明等就發(fā)現(xiàn)玉米C群細(xì)胞質(zhì)CⅠ亞群對(duì)玉米小斑病菌C小種嚴(yán)重感病，因此建議育種時(shí)要多細(xì)胞質(zhì)雜交育種。李玥仁等（1993）也報(bào)道陜西省玉米小斑病O小種在不同細(xì)胞質(zhì)的玉米種質(zhì)上會(huì)表現(xiàn)出不同的致病類型，表現(xiàn)為強(qiáng)致病力的病斑長(zhǎng)度在8 mm以上，而表現(xiàn)為弱致病力的病斑長(zhǎng)度僅在3 mm以下。常佳迎等（2020）研究表明，海南三亞地區(qū)玉米小斑病菌的強(qiáng)致病力菌株頻率高于黃淮海地區(qū)，推測(cè)其與黃淮海地區(qū)推廣種植抗病品種有關(guān)。本研究選用Mo17、B73、丹340、羅31、掖478、齊319、昌7-2和掖107等8個(gè)自交系玉米品種作為鑒別寄主，這些品種均是與我國(guó)玉米主栽品種具有親密血緣關(guān)系的自交系材料，不僅可分析玉米小斑病菌的致病性分化，還有助于評(píng)價(jià)生產(chǎn)上栽培品種的抗病性，從而有力地指導(dǎo)田間病害防治，以便更加合理地布局田間品種。本研究結(jié)果顯示采自江蘇省的4株分離菌株出現(xiàn)明顯的致病力分化，其中來(lái)自江蘇東臺(tái)（DT）和如東（RD）的菌株致病力較強(qiáng)，而江蘇豐縣（FX）和東海（DH）的菌株致病力相對(duì)較弱，地理位置上東臺(tái)和如東靠得較近，說(shuō)明其致病類型與地區(qū)來(lái)源有一定關(guān)系。研究結(jié)果還顯示，同一菌株或不同菌株對(duì)不同玉米品種的致病力均表現(xiàn)出豐富的多樣性，表明玉米小斑病菌致病力分化具有普遍性和多樣性。

不同玉米品種對(duì)同一菌株的表現(xiàn)差異也明顯，表明玉米品種對(duì)小斑病的抗性不同。玉米對(duì)小斑病的抗性一般有2種：病斑數(shù)，數(shù)量遺傳，可能由多基因顯性控制;病斑型，質(zhì)量遺傳，由1個(gè)或2個(gè)隱性基因控制。雖然目前尚未發(fā)現(xiàn)對(duì)玉米小斑病絕對(duì)免疫的品種，但已在一些抗病材料中鑒定出與抗性相關(guān)的數(shù)量性狀位點(diǎn)（QTL）（Zwonitzer et al.，2009;Belcher et al.，2012;施艷等，2019）。本研究中的8個(gè)玉米品種對(duì)玉米小斑病的抗性應(yīng)屬多基因控制的數(shù)量遺傳，其中齊319和Mo17的抗性較強(qiáng)，可挖掘這些品種的抗性基因，為抗病品種的選育提供材料;同時(shí)，對(duì)于抗性較差的品種，應(yīng)在安全生產(chǎn)上做好病害預(yù)防工作。江蘇省在6—7月的早夏雨水較多，氣溫一般在25～30 ℃，特別適宜玉米小斑病的發(fā)生，因此要特別注意夏播玉米小斑病的防控。另外，鮮食玉米等感病品種大面積種植極有利于小斑病菌的生長(zhǎng)與侵染，極可能加速田間菌源積累，引發(fā)小斑病流行。因此，監(jiān)測(cè)江蘇省玉米小斑病菌群體間致病力的變化動(dòng)態(tài)，開展病害預(yù)測(cè)預(yù)報(bào)和玉米品種抗病性研究，針對(duì)病菌的變化合理布局玉米品種，探索抑制病菌快速流行的有效措施，對(duì)減輕病害的發(fā)生和發(fā)展仍具有重要意義。

4 結(jié)論

江蘇省不同地區(qū)的玉米小斑病菌分離株具有不同強(qiáng)度的致病力，其中來(lái)自江蘇東臺(tái)的分離株（DT）致病力最強(qiáng)，可作為江蘇省玉米種質(zhì)資源抗病性篩選的接種菌株，指導(dǎo)抗病品種的選育。不同玉米品種在同一菌株上的抗感性差異明顯，對(duì)玉米小斑病表現(xiàn)為抗病的有齊319和Mo17，可挖掘這2個(gè)品種的抗性基因，為抗病品種的選育和研究提供材料。

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（責(zé)任編輯 麻小燕）