曹作增 張 蕾

宮頸癌是女性常見的婦科惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率僅次于乳腺癌。宮頸癌發(fā)病具有長(zhǎng)期的癌前病變階段，在此病變過程中宮頸人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)持續(xù)感染起決定性作用。研究[1-2]發(fā)現(xiàn)，大約80%的女性在50歲前曾感染過HPV，其中絕大部分會(huì)被機(jī)體的免疫系統(tǒng)自動(dòng)清除，只有少部分HPV持續(xù)感染的女性才可能發(fā)生癌前病變，甚至發(fā)展為宮頸癌，嚴(yán)重威脅女性的生命健康。目前，通過早期篩查HPV持續(xù)感染女性可有效預(yù)防宮頸癌前病變及宮頸癌的發(fā)生。因此，尋找能客觀反映HPV持續(xù)感染的相關(guān)因子至關(guān)重要，以利于早期癌前病變防治及宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展。相關(guān)研究[3-4]報(bào)道，微小RNA(microRNA，miRNA)參與多種疾病的發(fā)展進(jìn)程，其在腫瘤發(fā)生的各個(gè)環(huán)節(jié)均扮演著重要角色。微小RNA-148a-3p(microRNA-148a-3p，miR-148a-3p)是miRNA中重要一員，其水平異常表達(dá)與乳腺癌的相關(guān)關(guān)系研究較多[5]，而與宮頸HPV持續(xù)感染的關(guān)系研究較少。因此，本研究通過檢測(cè)宮頸HPV持續(xù)感染患者脫落細(xì)胞中miR-148a-3p的表達(dá)水平，旨在評(píng)估m(xù)iR-148a-3p與宮頸HPV持續(xù)感染的可能關(guān)系，并分析其對(duì)宮頸HPV持續(xù)感染的診斷價(jià)值?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年3月至2019年3月上海交通大學(xué)附屬新華醫(yī)院崇明分院婦科收治的宮頸HPV陽性患者170例作為研究對(duì)象，其中年齡27～60歲，平均(45.12±9.08)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)宮頸HPV分型檢測(cè)及液基細(xì)胞學(xué)檢查為陽性；②入院前未經(jīng)治療；③有正常性生活；④臨床資料齊全。排除標(biāo)準(zhǔn)：①既往無宮頸病變史者；②妊娠期患者；③合并免疫系統(tǒng)疾病者；④不具備隨訪條件者。170例患者隨訪期間未接受任何治療，根據(jù)隨訪6個(gè)月的結(jié)果將患者分為HPV非持續(xù)感染組(n=105，HPV轉(zhuǎn)陰)、HPV持續(xù)感染組(n=65，HPV仍呈陽性)。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)審批通過，且患者均自愿簽署《知情同意書》。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料收集 采用問卷調(diào)查表方式收集兩組患者年齡、吸煙史、受教育程度、初次性生活年齡、性伴侶數(shù)、人流次數(shù)及生殖道炎癥情況。

1.2.2 宮頸脫落細(xì)胞中miR-148a-3p表達(dá)水平檢測(cè) 兩組患者均在非月經(jīng)期采用一次性宮頸刷收集宮頸口處脫落細(xì)胞，取出后置于含細(xì)胞保存液的樣品管中，4℃冰箱保存?zhèn)溆?，?周內(nèi)集中檢測(cè)。

采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(real-time quantitative polymerase chain reaction，qRT-PCR)檢測(cè)宮頸脫落細(xì)胞中miR-148a-3p表達(dá)水平。采用Trizol法(試劑盒購(gòu)自江蘇恩莫阿賽生物技術(shù)有限公司)提取宮頸脫落細(xì)胞中總RNA，并按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(購(gòu)自南京諾唯贊生物科技有限公司)中方法將總RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。引物均由南京信帆生物技術(shù)有限公司合成，內(nèi)參為U6。miR-148a-3p正向引物為5’-GCTAGCCTCCGAAGCAAACAATGAAA-3’，反向引物為5’-AAGCTTCGTCTACAAGGACTAACCGAAA-3’；U6正向引物為5’-CTCGCTTCGGCAGCACA-3’，反向引物為5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3’。反應(yīng)條件為95℃、5 min，95℃、30 s，60℃、30 s，72℃、40 s，共35個(gè)循環(huán)。重復(fù)3次，并通過2-ΔΔCt法計(jì)算宮頸脫落細(xì)胞中miR-148a-3p相對(duì)表達(dá)量。

1.2.3 HPV分型檢測(cè) 采用廣東凱普生物科技股份有限公司生產(chǎn)的HPV核酸擴(kuò)增分型檢測(cè)試劑盒，對(duì)21種常見的HPV基因型進(jìn)行分型檢測(cè)，其中6種低危型為6、11、42、43、44、81，作為低危型組(n=26)；15種高危型為16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68，作為高危型組(n=39)。

1.3 觀察指標(biāo) 記錄并比較兩組患者及高危、低危組HPV持續(xù)感染患者的miR-148a-3p表達(dá)水平，并分析影響宮頸HPV持續(xù)感染的危險(xiǎn)因素。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者臨床資料比較 兩組患者吸煙、受教育程度及性伴侶數(shù)情況相比，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；HPV持續(xù)感染組年齡≥45歲、初次性生活年齡<20歲、人流次數(shù)≥1次及有生殖道炎癥比例均高于HPV持續(xù)感染組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組患者臨床資料比較 [例(%)]

2.2 兩組患者脫落細(xì)胞中miR-148a-3p表達(dá)水平比較 HPV持續(xù)感染組患者脫落細(xì)胞中miR-148a-3p表達(dá)水平為(0.59±0.15),低于HPV非持續(xù)感染組患者(1.01±0.26)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=11.852，P<0.001)。

2.3 低危型和高危型宮頸HPV持續(xù)感染患者脫落細(xì)胞中miR-148a-3p表達(dá)水平比較 高危型宮頸HPV持續(xù)感染患者脫落細(xì)胞中miR-148a-3p表達(dá)水平為(0.42±0.11),低于低危型宮頸HPV持續(xù)感染患者(0.67±0.18)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=6.955，P<0.001)。

2.4 影響宮頸HPV持續(xù)感染的危險(xiǎn)因素分析 以宮頸HPV感染是否持續(xù)發(fā)生(是=0，否=1)為因變量，以上述兩組臨床資料比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素納為自變量(年齡、初次性生活年齡、人流次數(shù)、生殖道炎癥及脫落細(xì)胞中miR-148a-3p表達(dá)水平)進(jìn)行多因素logistic回歸分析，具體賦值見表2。結(jié)果顯示年齡、人流次數(shù)及脫落細(xì)胞中miR-148a-3p表達(dá)水平均是影響宮頸HPV持續(xù)感染的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)，而初次性生活年齡、生殖道炎癥與宮頸HPV持續(xù)感染無獨(dú)立相關(guān)性(P>0.05)。見表3。

表2 自變量賦值情況表

表3 影響宮頸HPV持續(xù)感染的危險(xiǎn)因素分析

2.5 脫落細(xì)胞中miR-148a-3p表達(dá)水平對(duì)宮頸HPV持續(xù)感染的診斷價(jià)值 脫落細(xì)胞中miR-148a-3p表達(dá)水平診斷宮頸HPV持續(xù)感染的曲線下面積為0.923(95%CI為：0.878～0.968)，最佳截?cái)嘀禐?.75，其診斷敏感度為81.30%，特異度高達(dá)96.30%。見圖1。

圖1 脫落細(xì)胞中miR-148a-3p表達(dá)水平

3 討論

目前研究[6]發(fā)現(xiàn)，HPV持續(xù)感染是宮頸癌前病變及宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的重要因素，90%以上的宮頸癌患者伴有高危型HPV持續(xù)感染，與年齡、生活習(xí)慣等多種因素有關(guān)，隨病情進(jìn)展可能導(dǎo)致宮頸病變[7]。miRNA是一類廣泛存在于真核細(xì)胞中的小片段非編碼RNA，在轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)調(diào)控過程中起重要作用[8]。研究[9]表明，miRNA可作為促癌或抑癌基因參與婦科惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展。miR-148a-3p位于人染色體7p15.2，在病毒感染、腫瘤等疾病發(fā)生發(fā)展中均扮演著至關(guān)重要的角色[10]。曾菁莘等[11]研究發(fā)現(xiàn)，miR-148a-3p可通過調(diào)控細(xì)胞死亡調(diào)節(jié)因子(Bim)蛋白的表達(dá)，參與尋常型銀屑病的發(fā)生、發(fā)展。另有多位學(xué)者研究[12-15]報(bào)道，miR-148a-3p在胃癌、宮頸癌、上皮性卵巢癌、乳腺癌等腫瘤均呈異常表達(dá)，參與腫瘤發(fā)生、發(fā)展。而其與宮頸HPV持續(xù)感染關(guān)系尚不清楚，為此，本研究分析宮頸HPV持續(xù)感染患者脫落細(xì)胞中miR-148a-3p的表達(dá)及意義。

本研究結(jié)果顯示，年齡、初次性生活年齡、人流次數(shù)及生殖道炎癥情況與宮頸HPV持續(xù)感染發(fā)生有關(guān)。HPV持續(xù)感染組患者脫落細(xì)胞中miR-148a-3p表達(dá)水平遠(yuǎn)低于HPV非持續(xù)感染組患者，與張波等[12]、Li等[13]、Wang等[14]、李楊等[15]研究結(jié)果類似，提示脫落細(xì)胞中miR-148a-3p表達(dá)水平降低，可能參與宮頸HPV持續(xù)感染發(fā)生。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，高危型宮頸HPV持續(xù)感染患者脫落細(xì)胞中miR-148a-3p表達(dá)水平遠(yuǎn)低于低危型宮頸HPV持續(xù)感染患者，提示脫落細(xì)胞中miR-148a-3p表達(dá)水平變化可能與宮頸HPV類型有關(guān)。多因素logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，年齡、人流次數(shù)及脫落細(xì)胞中miR-148a-3p表達(dá)水平均是影響宮頸HPV持續(xù)感染的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示除考慮患者年齡、人流次數(shù)外，臨床檢測(cè)脫落細(xì)胞中miR-148a-3p表達(dá)水平可能對(duì)早期判斷宮頸HPV持續(xù)感染發(fā)生提供依據(jù)。此外，ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)，脫落細(xì)胞中miR-148a-3p表達(dá)水平診斷宮頸HPV持續(xù)感染的曲線下面積為0.923，提示miR-148a-3p對(duì)宮頸HPV持續(xù)感染具有較高診斷價(jià)值，當(dāng)其表達(dá)水平為0.75時(shí)，診斷特異度高達(dá)96.30%，臨床可通過檢測(cè)脫落細(xì)胞中miR-148a-3p表達(dá)，早期預(yù)測(cè)宮頸HPV持續(xù)感染發(fā)生情況。

綜上所述，宮頸HPV持續(xù)感染患者脫落細(xì)胞中miR-148a-3p表達(dá)水平明顯降低，其是影響宮頸HPV持續(xù)感染的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，脫落細(xì)胞中miR-148a-3p表達(dá)水平有望作為判斷宮頸HPV持續(xù)感染發(fā)生的重要分子標(biāo)記物。臨床應(yīng)密切關(guān)注脫落細(xì)胞中miR-148a-3p表達(dá)水平降低患者，以期為早期防治宮頸HPV持續(xù)感染提供幫助。由于宮頸HPV持續(xù)感染發(fā)生與多種因素有關(guān)，可能影響本研究結(jié)果，因此應(yīng)加大樣本進(jìn)一步研究。