馬文鋒 ， 朱艷芝， 陳曉晨， 孫利鵬， 張永欽， 郭 亮

（1.河南科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，河南洛陽471023；2.河南仰韶生化工程有限公司，河南三門峽472400；3.天津農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)與動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，天津300384）

仔豬斷奶后，營養(yǎng)素的攝入由母乳向植物飼糧轉(zhuǎn)變，極易引起斷奶仔豬消化吸收紊亂、生長停滯等問題， 嚴(yán)重時(shí)甚至造成仔豬死亡 （Skinner 等，2014；Herfel 等，2013）。 研究表明，啤酒酵母菌、蛋白酶和枯草芽孢桿菌作為斷奶仔豬常用的功能性添加劑，可以提高仔豬機(jī)體免疫力，緩解斷奶應(yīng)激對生長的不良影響 （Lee 等，2014；Lemieux 等，2010）。 本試驗(yàn)旨在比較此三種添加劑對斷奶仔豬生長性能、血清生化指標(biāo)和免疫功能的影響，為篩選適宜于斷奶仔豬階段的功能性添加劑提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 堿性蛋白酶（AP）由河南仰韶生化工程有限公司提供，酶活性為25000 U/g，其余添加劑由市場上購買獲得。 枯草芽孢桿菌（BS）有效含量≥1×109cfu/g， 啤酒酵母菌 （SC） 有效含量≥1×109cfu/g。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選取23 日齡斷奶仔豬240 頭，隨機(jī)分為4 組，每組5 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)12 頭（公母各占1/2）。 對照組飼糧參照美國NRC（2012）營養(yǎng)推薦配制，飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。 試驗(yàn)組在飼糧基礎(chǔ)上分別補(bǔ)充啤酒酵母菌、 堿性蛋白酶和枯草芽孢桿菌，添加比例均為200 mg/kg。 試驗(yàn)期為24 d。

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)仔豬自由采食和飲水，飼養(yǎng)管理按照豬場常規(guī)程序進(jìn)行。

1.4 檢測指標(biāo)

1.4.1 生長性能測定 測定各組斷奶仔豬的采食量和體增重，計(jì)算平均日采食量（g/d）、平均日增重（g/d）和飼料增重比。

1.4.2 血清生化和免疫指標(biāo)測定 試驗(yàn)第24 天，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取1 頭仔豬于前腔靜脈采血10 mL，3000 r/min 離心5 min， 分離血清，-20 ℃保存， 使用全自動(dòng)生化儀測定血清總蛋白（TP）、球蛋白（GLB）、葡萄糖（GLU）、鈣（Ca）、磷（P）、尿素氮（UN）、肌酐（Cr）含量、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）活性；免疫球蛋白 （IgA、IgG、IgM） 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法測定，試劑盒均購于南京建成生物工程研究所。

表1 飼糧組成及營養(yǎng)水平（飼喂基礎(chǔ)）

1.5 統(tǒng)計(jì)方法 試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)采用SAS 8.0 統(tǒng)計(jì)軟件Oneway-ANOVA 進(jìn)行分析， 差異顯著性則用Duncan 氏法進(jìn)行多重比較， 以P ＜0.05 作為差異顯著性判定標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 補(bǔ)充添加劑對斷奶仔豬生長性能的影響由表2 可知，與對照組相比，飼糧中添加蛋白酶組斷奶仔豬飼料增重比下降了4.94%（P ＜0.05）。在試驗(yàn)期間，飼料中添加啤酒酵母菌、蛋白酶和枯草芽孢桿菌對平均日增重和平均日采食量均無顯著影響（P ＞0.05）。 蛋白酶組仔豬的平均日增重最高， 相比啤酒酵母菌組和枯草芽孢桿菌組分別提高了6.5%和9.1%。 與對照組相比，添加蛋白酶組平均日增重和平均日采食量分別提高11.9%和6.9%。

表2 三種添加劑對斷奶仔豬生長性能的影響

2.2 補(bǔ)充添加劑對斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的影響 由表3 可知，與對照組相比，飼糧中添加啤酒酵母菌、 蛋白酶和枯草芽孢桿菌組斷奶仔豬血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性分別提高39.76%、47.91%、43.54%（P ＜0.05）； 飼糧中添加枯草芽孢桿菌組斷奶仔豬的血清尿素氮水平降低了22.02%（P ＜0.05）；飼糧中添加蛋白酶組斷奶仔豬的血清球蛋白含量提高了15.15%（P ＜0.05）； 其余血清生化指標(biāo)如總蛋白、肌酐含量及堿性磷酸酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶活性均差異不顯著（P ＞0.05）。

表3 三種添加劑對斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的影響

2.3 補(bǔ)充添加劑對斷奶仔豬血清葡萄糖和鈣、磷含量的影響 由表4 可知，與對照組相比，飼糧中補(bǔ)充蛋白酶組斷奶仔豬的血清葡萄糖水平提高了10.43%（P ＜0.05）；飼糧中添加啤酒酵母菌、蛋白酶或枯草芽孢桿菌對斷奶仔豬血清鈣和磷的含量無顯著影響（P ＞0.05）。

表4 三種添加劑對斷奶仔豬血清葡萄糖和鈣磷代謝的影響mg/100 mL

2.4 補(bǔ)充添加劑對斷奶仔豬血清免疫功能的影響 由表5 可知，與對照組相比，飼糧中補(bǔ)充蛋白酶組斷奶仔豬IgG 含量提高了17.00%（P ＜0.05）；飼糧中添加啤酒酵母菌或枯草芽孢桿菌對血清免疫球蛋白無顯著影響（P ＞0.05）。

表5 三種添加劑對斷奶仔豬血清免疫球蛋白的影響g/L

3 討論

3.1 補(bǔ)充添加劑對斷奶仔豬生長性能的影響 啤酒酵母含有大量的B 族維生素和礦物質(zhì)（Trevisi等，2016；Weedman 等，2011；Lemieux 等，2010），本研究表明， 飼糧中添加啤酒酵母菌可在一定程度上提高斷奶仔豬的采食量， 對平均日增重?zé)o明顯影響；枯草芽孢桿菌是一種革蘭氏陰性菌（Jorgensen 等，2016； 周盟等，2014；Giang 等，2010），通過消耗腸道的游離氧可促進(jìn)有益菌的生長，其產(chǎn)生的有機(jī)酸可以降低腸道pH （Maneewan 等，2011），間接抑制致病菌的生長（Giang 等，2012）。在本試驗(yàn)中， 飼糧中添加枯草芽孢桿菌對斷奶仔豬的生長性能無顯著影響， 可能由于添加單一益生菌的作用效果并不穩(wěn)定，需要補(bǔ)充復(fù)合益生菌，才能更好的改善斷奶仔豬生長性能（肖華，2013；辛娜等，2012；虞澤鵬等，2002）；蛋白酶作為一種綠色環(huán)保的飼料添加劑， 已在養(yǎng)豬生產(chǎn)中得到廣泛應(yīng)用。本試驗(yàn)中選用的堿性蛋白酶，其屬于絲氨酸蛋白酶的一類， 具有催化水解蛋白質(zhì)肽鍵的能力，可以將大分子蛋白質(zhì)分解為蛋白胨、多肽及游離氨基酸（Miyazawa，1999）。飼用蛋白酶的添加對畜禽的生長具有重要作用， 可以緩解幼齡動(dòng)物機(jī)體蛋白酶分泌量的不足， 減少幼齡動(dòng)物的過敏反應(yīng)（Adebiyi 和Olukosi，2015）。 本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加堿性蛋白酶可以顯著改善斷奶仔豬生長性能，此與Zuo 等（2015）的研究結(jié)果一致。本試驗(yàn)中， 添加蛋白酶對斷奶仔豬生長性能的改善程度優(yōu)于枯草芽孢桿菌和啤酒酵母菌。

3.2 補(bǔ)充添加劑對斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的影響 血清生化指標(biāo)是反映機(jī)體營養(yǎng)代謝和機(jī)體免疫能力的重要指標(biāo)，可在一定程度上反映動(dòng)物的健康程度和生理狀態(tài)（劉輝等，2013）。 依據(jù)血清中TP 含量的變化， 可以判斷機(jī)體蛋白質(zhì)代謝的旺盛程度，同時(shí)可反映肝臟蛋白質(zhì)代謝及機(jī)體蛋白質(zhì)的沉積狀態(tài)。 另外，血清GLB 的含量主要反映了機(jī)體防御抗原的能力，其含量越高，顯示機(jī)體的免疫能力越強(qiáng)。 本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼糧中添加蛋白酶可顯著提高斷奶仔豬血清GLB 含量（P ＜0.05）， 表明蛋白酶的添加可以改善仔豬的機(jī)體免疫狀態(tài)。

血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和尿素氮的水平可以反映機(jī)體氨基和氮素的代謝狀態(tài) （董曉麗等，2013）。谷丙轉(zhuǎn)氨酶是影響機(jī)體轉(zhuǎn)氨基作用的關(guān)鍵酶，而尿素氮的含量與機(jī)體蛋白質(zhì)的利用效率呈負(fù)相關(guān)。 本試驗(yàn)結(jié)果顯示，在斷奶仔豬飼糧中補(bǔ)充啤酒酵母菌、蛋白酶和枯草芽孢桿菌，均可以顯著提高血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶的水平（P ＜0.05），說明三種添加劑均可以促進(jìn)仔豬肝臟蛋白質(zhì)代謝，提高仔豬對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收。 另外，枯草芽孢桿菌組斷奶仔豬血清尿素氮水平顯著低于其余各組（P ＜0.05）， 表明飼糧中補(bǔ)充枯草芽孢桿菌可以提高仔豬的氮素利用效率。

血糖是動(dòng)物組織及細(xì)胞活動(dòng)的主要能量來源， 血糖的含量變化可以反映機(jī)體能量的攝入及代謝狀態(tài)， 具有重要的臨床和生產(chǎn)意義（石秋鋒等，2013）。 研究表明，在一定范圍內(nèi)的血糖升高，可以提升動(dòng)物對外界的免疫防御能力。 本試驗(yàn)檢測了三種添加劑對斷奶仔豬采食狀態(tài)下血糖水平的影響， 結(jié)果表明飼糧中補(bǔ)充蛋白酶可以一定程度上提高仔豬的血糖水平（P ＜0.05），這可能與蛋白酶組仔豬采食量最高， 能量攝入量較其余各組有所增加有關(guān)。

3.3 補(bǔ)充添加劑對斷奶仔豬血清免疫指標(biāo)的影響 血清免疫球蛋白是反映機(jī)體體液免疫能力的重要指標(biāo)，一般由IgM、IgG 和IgA 三類球蛋白組成（石秋峰等，2013）。 其中，IgM 是機(jī)體抵御外界抗原初期產(chǎn)生的免疫球蛋白；IgA 主要是在非特異性免疫下發(fā)揮作用， 是黏膜免疫的重要組成部分；IgG是血清中含量較高的球蛋白，也是機(jī)體抵御和清除抗原最重要的免疫球蛋白。 本試驗(yàn)的結(jié)果表明，飼糧中補(bǔ)充蛋白酶可以顯著提高斷奶仔豬的血清IgG 水平（P ＜0.05），改善仔豬的免疫功能。

4 結(jié)論

飼糧中添加適宜劑量的蛋白酶可以改善斷奶仔豬生長性能， 其作用效果優(yōu)于啤酒酵母菌和枯草芽孢桿菌； 添加蛋白酶可顯著提高斷奶仔豬血清葡萄糖、球蛋白和IgG 的含量；飼糧中分別添加蛋白酶、啤酒酵母菌或枯草芽孢桿菌，均可顯著提高仔豬的血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性； 飼糧中添加枯草芽孢桿菌可顯著降低血清尿素氮含量。