胡慧婷，袁靜芝，史清海，鄧夢蕓，楊 奇，王 黎，牛莉莉，伏建峰△

(1.新疆軍區(qū)總醫(yī)院全軍臨床檢驗診斷中心，新疆烏魯木齊 830000；2.江蘇大學(xué)附屬澳洋醫(yī)院檢驗科，江蘇張家港 215600；3.新疆昌吉州人民醫(yī)院檢驗科，新疆昌吉 831100)

肺部感染包括終末氣道、肺泡腔及在內(nèi)的肺實質(zhì)炎癥，病因以感染最為常見，還可由理化、免疫及藥物引起。肺部感染的臨床診斷是基于胸部影像檢查、臨床體征以及外周血白細胞計數(shù)等檢查，同時還需進行痰、支氣管肺泡灌洗液微生物培養(yǎng)及藥敏試驗，通常需要48 h才能獲得結(jié)果[1]，診斷周期較長。在明確病原學(xué)診斷之前，臨床醫(yī)生通常粗略地根據(jù)經(jīng)驗給予抗菌藥物治療，導(dǎo)向性欠佳?；诳s短診斷周期和明確治療導(dǎo)向的考慮，目前臨床常用白細胞計數(shù)、C-反應(yīng)蛋白等檢測項目作為快速輔助診斷肺部感染的檢測指標，但診斷靈敏度和特異度均不理想[2]。大量研究顯示，可溶性白細胞分化抗原14(sCD14)與高遷移率族蛋白B1(HMGB1)與感染性疾病密切相關(guān)。因此，本研究擬評估血清中sCD14、HMGB1檢測對肺部感染疾病診斷的臨床應(yīng)用前景，并評價其聯(lián)合檢測的臨床診斷效能。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年10月至2018年5月在新疆軍區(qū)總醫(yī)院確診的新發(fā)的肺部感染74例患者作為實驗組。其中男性55例，女性19例，年齡20～98歲，平均(78.74±1.64)歲。符合中國成人社區(qū)獲得性肺炎診斷和治療指南(2016年版)的診斷標準，納入標準：(1)新近出現(xiàn)的咳嗽、咳痰或原有呼吸道疾病癥狀加重并出現(xiàn)膿性痰，伴或不伴胸痛；(2)發(fā)熱；(3)肺實變體征和(或)聞及濕性啰音；(4)白細胞>10×109/L或<4×109/L，伴或不伴中性粒細胞核左移；(5)胸部X線檢查顯示片狀、斑片狀浸潤性陰影或間質(zhì)性改變，伴或不伴胸腔積液。以上1～4項中任何1項加第5項，除外非感染性疾病可做出診斷。排除標準：(1)年齡<18歲；(2)妊娠；(3)惡性腫瘤及血液病患者；(4)手術(shù)及外傷患者；(5)合并其他感染；(6)慢性腎功能不全(3期及以上)患者；(7)使用大劑量激素、免疫抑制劑進行治療的患者；(8)器官移植患者。對照組選取體檢中心62例健康體檢者，血常規(guī)、生化檢驗等檢測指標均在正常范圍內(nèi)。其中男性46例，女性16例，年齡32～60歲，平均(46.58±1.11)歲。本項研究經(jīng)新疆軍區(qū)總醫(yī)院倫理委員會評審?fù)ㄟ^，所有患者及家屬均知情同意。

1.2儀器與試劑 Tecan Sunrise酶標儀購自瑞士帝肯公司；Cobase 411全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀購自瑞士羅氏公司。sCD14、HMGB1酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒均購自中國武漢伊萊瑞特公司。

1.3方法

1.3.1標本收集 所有肺部感染患者及健康體檢者均空腹抽取5 mL肘靜脈血,3 h內(nèi)3 500 r/min離心15min，提取上清液，凍存于-40 ℃冰箱待檢。

1.3.2實驗方法 將凍存的血清解凍，平衡至室溫后以1 000 r/min離心20 min，取上清。采用酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測sCD14、HMGB1，實驗嚴格按照試劑說明書要求進行操作；采用全自動免疫化學(xué)發(fā)光分析儀檢測降鈣素原(PCT)及白細胞介素-6(IL-6)，操作按標準作業(yè)程序文件進行。

2 結(jié) 果

2.1肺部感染時sCD14、HMGB1水平顯著升高 sCD14、HMGB1水平經(jīng)正態(tài)性檢驗和方差齊性檢驗，數(shù)據(jù)呈非正態(tài)分布，以中位數(shù)(四分位數(shù))[M(P25～P75)]表示。結(jié)果顯示，實驗組sCD14的水平為4.06(2.98～5.31)ng/mL、HMGB1的水平為469.50(251.35～746.33)pg/mL，顯著高于對照組(P<0.05)，與PCT、IL-6水平的變化趨勢一致。見表1、圖1。

注：實線代表各組檢測項目水平的中位數(shù)及四分位數(shù)。

圖1sCD14、HMGB1在兩組間的水平分布散點圖

表1 兩組間研究對象血清標志物水平[M(P25～P75)]

注：與對照組比較，*P<0.05。

2.2sCD14、HMGB1聯(lián)合檢測與PCT、IL-6聯(lián)合檢測效能相當 單獨sCD14、HMGB1檢測診斷肺部感染的靈敏度依次為82.40%、56.80%，特異度為90.30%、85.50%；二者聯(lián)合檢測可提升靈敏度至92.40%，與PCT、IL-6聯(lián)合檢測的診斷效能接近，靈敏度99.72%(P>0.05)。兩種聯(lián)合檢測方法的診斷效能比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，見表2、圖2。

表2 sCD14、HMGB1及聯(lián)合診斷對于肺部感染的診斷效能

注：與PCT+IL-6聯(lián)合診斷比較,*P>0.05。

圖2 PCT、IL-6、sCD14及HMGB1單獨和聯(lián)合診斷肺部感染的ROC曲線

3 討 論

肺部是最常見的感染部位，由于不同疾病的嚴重程度和致病特征，肺部感染可能導(dǎo)致不同的結(jié)果[2]。因此，肺部感染的早期診斷在臨床診療過程中至關(guān)重要。目前常用的傳統(tǒng)快速輔助診斷肺部感染的檢測指標主要有：白細胞、C-反應(yīng)蛋白、PCT及IL-6等。其中白細胞、C-反應(yīng)蛋白對于肺部感染診斷的特異度較差，而PCT、IL-6是目前臨床上公認的診斷肺部感染的實驗室指標，其聯(lián)合檢測對于肺部感染具有較高的診斷效能[2-6]。

近年來，大量研究顯示，sCD14和HMGB1與感染性疾病密切相關(guān)，有望成為感染性疾病的候選診斷指標。白細胞分化抗原14(CD14)是主要表達于單核/巨噬細胞的一類白細胞分化抗原，包括sCD14和膜CD14兩種亞型[7]，其中sCD14主要存在于人和動物的血液及尿液中，介導(dǎo)內(nèi)皮細胞和上皮細胞發(fā)生炎性反應(yīng)[8]。KLOUCHE等[9]的一項針對重癥加強護理病房中肺部感染患者及非感染性呼吸衰竭患者的研究顯示，肺部感染患者血漿sCD14水平顯著高于非感染性呼吸衰竭患者，AUC為0.859，靈敏度81%，特異度80%，sCD14具有良好的診斷效能，可以作為診斷肺部感染的生物標志物。HMGB1是一種進化上保守的非組蛋白DNA結(jié)合蛋白，廣泛分布于腦、肝、肺、心、胰腺及淋巴組織等[10]。HMGB1作為一種重要的炎癥標志物，在介導(dǎo)炎性反應(yīng)方面具有重要作用，已被證明與肺部感染、膿毒癥等多種炎癥疾病相關(guān)[11]。DING等[12]的一項研究顯示，HMGB1的高表達與患兒難治性肺炎支原體肺炎相關(guān)，HMGB1診斷患兒難治性肺炎支原體肺炎的AUC為0.876，靈敏度83.3%，特異度82.4%，是區(qū)分難治性肺炎支原體肺炎和非難治性肺炎支原體肺炎的良好診斷生物標志物。本研究分別檢測了肺部感染患者及健康體檢者的血清sCD14、HMGB1水平，研究結(jié)果顯示，實驗組患者血清sCD14的水平為4.06(2.98～5.31)pg/mL、HMGB1水平為469.50(251.35～746.33)ng/mL，顯著高于對照組，并與PCT及IL-6水平具有一致的變化趨勢，提示sCD14、HMGB1在肺部感染患者的血清中具有明顯的高表達。研究顯示，sCD14、HMGB1診斷肺部感染、膿毒癥的靈敏度分別在70%～90%、70%～80%，特異度分別在55%～85%、80%～90%[9,12-17]，本研究中sCD14、HMGB1診斷肺部感染的靈敏度分別為82.4%、56.8%，特異度分別為90.30%、85.50%，除HMGB1靈敏度略低外，其他與文獻中所述一致。對sCD14、HMGB1行ROC分析，結(jié)果顯示sCD14及HMGB1的AUC分別為0.937、0.759，提示二者均有較可行的診斷價值。近幾年，臨床檢驗新技術(shù)、新檢測指標不斷涌現(xiàn)，相關(guān)檢測項目組合檢測或聯(lián)合檢測取代過去單一指標檢測應(yīng)用于臨床診療稱為一種常規(guī)模式。因此，筆者評估了sCD14和HMGB1聯(lián)合檢測的臨床診斷效能。結(jié)果顯示，與各自的單獨檢測相比，sCD14、HMGB1聯(lián)合檢測可提高AUC至0.944，提高靈敏度至92.40%；與目前臨床常用指標組合(PCT、IL-6聯(lián)合檢測)進行比較，兩種聯(lián)合檢測方法AUC、靈敏度比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，提示sCD14、HMGB1聯(lián)合檢測與PCT、IL-6聯(lián)合檢測具有相當?shù)脑\斷效能。進一步將sCD14、HMGB1分別與PCT、IL-6進行三者聯(lián)合檢測時可提高AUC至0.985、0.992，提高靈敏度至98.70%、99.89%；將sCD14、HMGB1、PCT、IL-6 4個指標進行聯(lián)合可進一步提高AUC至0.998，提高靈敏度至99.98%。綜上，筆者認為sCD14、HMGB1聯(lián)合檢測有望作為新型感染性標志物應(yīng)用于臨床。

新疆遠離內(nèi)地，地理位置特殊，許多衛(wèi)生醫(yī)療機構(gòu)分布特點是小、散、遠，醫(yī)療水平相對落后，缺乏大型醫(yī)療設(shè)備，不利于PCT、IL-6聯(lián)合檢測的推廣與普及。而sCD14、HMGB1的檢測無需大型設(shè)備，操作簡捷、便攜、易行，診斷效能與PCT、IL-6聯(lián)合檢測相當。故認為sCD14、HMGB1作為快速判斷肺部疾病的感染性標志物比較符合這一地區(qū)特點，具有普及推廣價值。

4 結(jié) 論

基于本研究實驗結(jié)果并兼顧方法學(xué)影響和本地區(qū)基層衛(wèi)生醫(yī)療機構(gòu)分布小、散、遠的特點，本研究得出以下結(jié)論：(1)在方法學(xué)進一步完善的基礎(chǔ)上，sCD14、HMGB1可作為快速判斷肺部感染性疾病的候選指標；(2)sCD14、HMGB1檢測簡捷、便攜、可操作性強，可作為暫不能開展PCT、IL-6檢測的基層醫(yī)療機構(gòu)的替代指標。