王艷艷，翟春梅，懷雪，孟永海，申柯欣，李廷利，黃莉莉

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江哈爾濱150040）

刺人參為五加科刺人參屬刺人參（Oplopanax elatus Nakai.）的干燥根及根莖，也稱刺參或東北刺人參，有補(bǔ)氣助陽(yáng)、強(qiáng)心利尿的功效，主要分布于我國(guó)的吉林省長(zhǎng)白山地區(qū)，以及俄羅斯遠(yuǎn)東山區(qū)和朝鮮北部山區(qū)[1]。在韓國(guó)，東北刺人參被認(rèn)為具有與人參類似的適應(yīng)原樣作用，主要用于治療慢性疲勞綜合癥、神經(jīng)衰弱、精神分裂癥、心血管疾病等，蘇聯(lián)早在20 世紀(jì)50年代就將其正式批準(zhǔn)作為補(bǔ)品和抗糖尿病藥物用于臨床[2-4]。東北刺人參主要含有皂苷、蒽醌、脂肪酸、黃酮、氨基酸、揮發(fā)油等化學(xué)成分。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，東北刺人參具有抗菌、抗炎、抗衰老、抗驚厥、抗疲勞、解熱、改善睡眠、調(diào)節(jié)血壓、改善生殖功能和降糖等多方面的生物活性。目前，國(guó)內(nèi)對(duì)東北刺人參不定根抗氧化能力研究已有文獻(xiàn)報(bào)道[5]，而野生東北刺人參藥材的抗氧化活性研究較少。本文對(duì)產(chǎn)于吉林長(zhǎng)白山的東北刺人參水煎液的抗氧化和抗衰老作用進(jìn)行考察，為人工栽培品的藥效質(zhì)量的研究提供理論依據(jù)，同時(shí)，也為更好的保護(hù)和利用刺人參的野生資源奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

野生型Canton S 品系黑腹果蠅，由中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)院果蠅技術(shù)平臺(tái)提供。ICR 小鼠，雌雄各半，體重（20±2）g，SPF 級(jí)，均由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥物安全評(píng)價(jià)中心提供，許可證號(hào)：SCXK（黑）2013-004。

1.2 試驗(yàn)藥物

東北刺人參產(chǎn)自吉林省集安市野生藥材種植基地，秋季采收，將其根及根莖，洗凈，切段曬干備用。經(jīng)黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)王振月教授鑒定為東北刺人參的根及根莖。

東北刺人參根及根莖凍干粉由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)中藥藥理實(shí)驗(yàn)室自制：稱取一定量的野生東北刺人參藥材，用10 倍量的蒸餾水浸泡2 h，加熱回流提取2 次，每次1.5 h，合并提取液，濾過(guò)濃縮得東北刺人參水煎液，凍干，待用。

1.3 試劑

1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1-diphenyl-2-trinitrophenyl hydrazine，DPPH）：上海梯希愛(ài)化成工業(yè)發(fā)展有限公司；蔗糖（批號(hào)20180103）：天津市濱?？频匣瘜W(xué)試劑有限公司；瓊脂細(xì)菌學(xué)級(jí)（批號(hào)1182GR500）：Oxoid L.td.Wade Road.Basingstoke.Hants；丙酸（批號(hào)20160327）：天津市福晨化學(xué)試劑廠；酵母粉（批號(hào)LP0021）：英國(guó)OXOID 公司?？捡R斯亮藍(lán)測(cè)試盒（批號(hào)20180514）、丙二醛測(cè)試盒（MAD，批號(hào)20180710）、超氧化物歧化酶測(cè)試盒（SOD，批號(hào)20180709）：南京建成成生物工程研究所。

1.4 儀器

CT15RE 高速冷凍離心機(jī)：日本HITACHI 公司；AL 204 電子天平：美國(guó) METTLER TOLEDO 公司；SynergyMX 酶標(biāo)儀：美國(guó) BIOTEK 公司；EYELA 冷凍干燥機(jī)：上海愛(ài)郎儀器有限公司；FJ-200 高速萬(wàn)能粉碎機(jī)：上海申勝儀器公司；HH.WZ.CY600 電熱恒溫水浴鍋：上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司。

1.5 實(shí)驗(yàn)環(huán)境

將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物置于獨(dú)立通氣籠中（噪音≤55dB（A），換氣次數(shù)：20 次/h～50 次/h，潔凈度：100 級(jí)，壓差≥10 Pa，菌落數(shù)≤1 個(gè)/皿時(shí)）飼養(yǎng)；外界溫度（24±2）℃，濕度（55±15）%，光照強(qiáng)度：300 lux，12 h/12 h 明暗交替（7：00-19：00 光照；19：00～次日 7：00 黑暗）。

1.6 方法

1.6.1 微板法檢測(cè)DPPH 自由基方法的建立

1.6.1.1 DPPH 溶液制備

取16 mg DPPH 試劑，精密稱定，至10 mL 容量瓶，用無(wú)水乙醇為溶劑溶解并定容，搖勻，得到DPPH儲(chǔ)備液的濃度為1.6 mg/mL，DPPH 儲(chǔ)備液在4 ℃冰箱避光冷藏。

1.6.1.2 DPPH 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

取DPPH 儲(chǔ)備液，稀釋成以下系列濃度：1、0.75、0.5、0.25、0.125、0.062 5 mg/mL，搖勻，在波長(zhǎng) 517 nm 下測(cè)定吸光度值，以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，DPPH 濃度為橫坐，標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.6.1.3 DPPH 法實(shí)驗(yàn)參數(shù)的優(yōu)化

1）不同反應(yīng)溫度的考察

參照 Brand-WilliamsW 和 Zim mer AR[6-7]建立的DPPH 自由基清除實(shí)驗(yàn)稍作改進(jìn)，即DPPH 溶液與樣品溶液按體積比 1 ∶1 加入 96 孔板，振搖 30 s，分別考察避光反應(yīng)時(shí)間分別為 15、30、45 min 后，于 517 nm 處測(cè)定的吸光度（OD 值）。其中DPPH 溶液中加入樣品溶液的吸光度為 A1（100 μL DPPH 溶液+100 μL 樣品溶液）；樣品溶液吸光度為A2（100 μL 無(wú)水乙醇+100 μL樣品溶液），DPPH 溶液加入空白溶劑的吸光度為A3（100 μL DPPH 溶液+100 μL 無(wú)水乙醇）。根據(jù)公式計(jì)算DPPH 清除率（%）。樣品溶液清除DPPH 自由基減少吸光度為 A3-（A1-A2）[8-9]。DPPH 清除率/%=[1-（A1-A2）/A3]×100%。

2）不同反應(yīng)體系的考察

在反應(yīng)時(shí)間確定的基礎(chǔ)上，考察了DPPH 溶液與樣品溶液按不同反應(yīng)體積體系配比（3 ∶2，2 ∶1，1 ∶1），對(duì)DPPH 自由基清除率（%）的影響，其它步驟同1.6.1.3中1）的方法。

1.6.1.4 東北刺人參的抗氧化作用

精確稱量刺人參凍干粉0.5 g，溶劑定容于25 mL容量瓶，搖勻，并稀釋為不同的濃度梯度（0.625、1.25、2.5、5、7.5、10 mg/mL），以維生素 C（VC）為陽(yáng)性對(duì)照藥，按照“1.6.1.3”中1）的優(yōu)化方法測(cè)定各組吸光度值，計(jì)算DPPH 自由基清除率，并把清除率對(duì)濃度作非線性回歸擬合，得到兩者的量效關(guān)系，求出當(dāng)清除率為50 %時(shí)對(duì)應(yīng)的濃度，從而得出各自的IC50值[8]。

1.6.2 東北刺人參對(duì)果蠅壽命的影響

果蠅培養(yǎng)基的制備采用基礎(chǔ)培養(yǎng)基配方，主要由蒸餾水69 mL，玉米粉 6.3 g，蔗糖 4.65 g，瓊脂 0.45 g，酵母粉0.45 g，丙酸0.45 mL 組成，在該培養(yǎng)基配制過(guò)程中添加 0.374、0.187、0.098、0.049 g 的刺人參提取物凍干粉，分別折合藥物質(zhì)量濃度為0.46 %、0.23 %、0.12%、0.06%，對(duì)照組則給予正常培養(yǎng)基飼養(yǎng)。參照文獻(xiàn)方法加以改進(jìn)[10-12]對(duì)果蠅行為學(xué)考察如下。

1.6.2.1 壽命實(shí)驗(yàn)

收集12 h 內(nèi)羽化成蟲(chóng)的果蠅，隨機(jī)分為對(duì)照組和給藥組，每組雌雄各 100 只，在（25±4）℃、相對(duì)濕度為（60±10）%、光/暗時(shí)間為 12 h/12 h 的恒溫恒濕智能培養(yǎng)室中培養(yǎng)。每4 天更換一次培養(yǎng)基并觀察記錄果蠅的情況。計(jì)算平均壽命、中間壽命、最高壽命。

1.6.2.2 亞急性氧化損傷實(shí)驗(yàn)

取30 日齡果蠅，每組雌雄各100 只，分別給予含20%的H2O2的6%的葡萄糖溶液，每4 小時(shí)記錄一次，直至果蠅全部死亡。

1.6.2.3 衰老果蠅的攀爬實(shí)驗(yàn)

收集12 h 內(nèi)羽化成蟲(chóng)的果蠅，每組10 只果蠅，雌雄各半。于第 0、10、20、30 天移入空的果蠅管中，觀察10 s 內(nèi)攀爬超過(guò)8 cm 處的果蠅只數(shù)。每組重復(fù)實(shí)驗(yàn) 5 次。

1.6.2.4 生殖實(shí)驗(yàn)

分別取7、15、30 天果蠅，每管雌雄各一只，飼養(yǎng)3天后取出，記錄第一天出生的子代蠅個(gè)數(shù)，連續(xù)記錄7天，每組實(shí)驗(yàn)平行6 次。

1.6.3 刺人參對(duì)力竭游泳實(shí)驗(yàn)小鼠MDA 含量和SOD活力的影響

選取ICR 小鼠，置于實(shí)驗(yàn)環(huán)境中適應(yīng)一周。隨機(jī)分為5 組，每組12 只，分別為空白對(duì)照組，東北刺人參凍干粉高、中、低劑量組。高、中、低劑量組分別按500、250、125 mg/kg 劑量灌胃給藥，空白組動(dòng)物給予生理鹽水溶液，給藥容積為0.2 mL/10 g 體重，連續(xù)給藥15天，小鼠末次給藥30 min 后，不負(fù)重游泳90 min，頸椎脫臼處死，解剖取出肝臟，生理鹽水洗去血液，制成10%肝勻漿。參照丙二醛測(cè)定試劑盒、超氧化物歧化酶試劑盒說(shuō)明書(shū)操作測(cè)定MDA 含量和SOD 活力。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

計(jì)量資料的統(tǒng)計(jì)采用SPSS 17.0 軟件進(jìn)行方差分析（Analysis of variance，ANOVA）單因素方差分析，數(shù)據(jù)以D 表示，組間做t 檢驗(yàn)，P<0.05 則表示有顯著性差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01 為極顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 東北刺人參清除DPPH 自由基的能力

2.1.1 DPPH 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

DPPH 儲(chǔ)備液稀釋后檢測(cè)各濃度的吸光度值，以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，DPPH 濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性方程為y=1.023 7x-0.143 4，R2=0.999 4。結(jié)果表明 DPPH 在 0.062 5 mg/mL～0.5 mg/L 濃度范圍內(nèi)，吸光度與濃度范圍具有良好的線性關(guān)系。

2.1.2 微板法實(shí)驗(yàn)參數(shù)的優(yōu)化結(jié)果

以刺人參凍干粉為考察對(duì)象，供試品溶液濃度為7.5 mg/mL，根據(jù)不同反應(yīng)時(shí)間與反應(yīng)體積比之間的關(guān)系設(shè)定的參數(shù)優(yōu)化的結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 不同反應(yīng)時(shí)間和反應(yīng)體積比的樣本清除率Table 1 Sample clearance rate for different reaction times and reaction volume ratios

表1 結(jié)果表明，微板法測(cè)定DPPH 自由基參數(shù)，最佳反應(yīng)時(shí)間為30 min，反應(yīng)體積為1 ∶1。

2.1.3 東北刺人參的抗氧化作用

東北刺人參的抗氧化作用見(jiàn)表2。

刺人參水煎液凍干粉在0.625 mg/mL～10.0 mg/mL的濃度范圍內(nèi)，自由基清除率為42.2%～89.0%。陽(yáng)性對(duì)照藥 VC在 0.062 5 mg/mL～1.00 mg/mL 的濃度范圍內(nèi)，自由基清除率為54.8%～97.4%。根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算IC50值，陽(yáng)性對(duì)照VC為0.040 1 mg/mL，刺人參為0.829 mg/mL。

2.2 東北刺人參對(duì)果蠅壽命相關(guān)行為學(xué)指標(biāo)考察結(jié)果

2.2.1 東北刺人參對(duì)果蠅壽命的影響

東北刺人參對(duì)果蠅壽命的影響見(jiàn)表3。

表2 東北刺人參的抗氧化作用（D）Table 2 Antioxidant effect of CRS supplement（D）

表2 東北刺人參的抗氧化作用（D）Table 2 Antioxidant effect of CRS supplement（D）

組別DPPH 自由基清除率/%1 0.625 42.2±2.04 0.0625 54.8±1.33 2 1.250 57.6±1.02 0.125 76.2±1.60 3 2.50 82.6±0.49 0.250 96.0±0.63 4 5.00 86.0±0.63 0.500 96.8±1.60 5 7.50 87.2±0.98 0.750 97.2±1.33 6 10.00 89.0±2.28 1.000 97.4±1.50東北刺人參 VC濃度/（mg/mL）DPPH 自由基清除率/%濃度/（mg/mL）

表3 東北刺人參對(duì)果蠅壽命的影響（n=100，D）Table 3 Lifespan parameters in drosophila following CRS supplement（n=100，D）

表3 東北刺人參對(duì)果蠅壽命的影響（n=100，D）Table 3 Lifespan parameters in drosophila following CRS supplement（n=100，D）

注：*P<0.05 與對(duì)照組相比差異顯著，**P<0.01 與對(duì)照組相比差異極顯著。

組別 性別/數(shù)量 平均壽命/d 最長(zhǎng)壽命/d對(duì)照組 ♀n=82 40.40±13.01 61.20±1.92♂n=70 39.37±13.72 61.20±1.93刺人參 1 組（0.46 %） ♀n=93 40.65±14.33 64.80±2.53**♂n=82 45.22±13.72** 66.80±1.93**刺人參 2 組（0.23 %） ♀n=100 43.40±14.01 64.80±3.15**♂n=97 42.70±15.18 66.80±1.93**刺人參 3 組（0.12 %） ♀n=88 43.57±13.30* 65.20±3.29**♂n=67 40.63±13.30 62.40±2.06刺人參 4 組（0.06 %） ♀n=85 41.03±13.15 64.40±2.95*♂n=85 40.37±12.40 63.60±3.98*

在果蠅壽命實(shí)驗(yàn)中，與空白對(duì)照組相比，各給藥組的果蠅平均壽命和最長(zhǎng)壽命，均有不同程度的延長(zhǎng)，其中，雌雄果蠅在藥物濃度為0.46%和0.23%時(shí)最長(zhǎng)壽命均呈現(xiàn)極顯著差異（P<0.01），雌果蠅在藥物濃度為0.12 %時(shí)最長(zhǎng)壽命亦呈現(xiàn)極顯著差異（P<0.01），藥物濃度為0.06%的雌雄果蠅的最長(zhǎng)壽命呈現(xiàn)顯著差異（P<0.05）。

2.2.2 東北刺人參對(duì)果蠅亞急性氧化損傷實(shí)驗(yàn)

東北刺人參對(duì)果蠅亞急性氧化損傷實(shí)驗(yàn)見(jiàn)表4。

表4 東北刺人參對(duì)果蠅亞急性氧化損傷的作用（n=100，D）Table 4 Survival time parameters in drosophila exposed to H2O2 following CRS（n=100，D）

表4 東北刺人參對(duì)果蠅亞急性氧化損傷的作用（n=100，D）Table 4 Survival time parameters in drosophila exposed to H2O2 following CRS（n=100，D）

平均存活率延長(zhǎng)/%對(duì)照組 ♀n=82 31.80±9.49 -♂n=70 32.28±11.21 -刺人參 1 組（0.46%） ♀n=74 37.89±9.32** 19.15♂n=97 36.57±12.27** 13.29組別 性別/數(shù)量 平均存活時(shí)間/h

續(xù)表4 東北刺人參對(duì)果蠅亞急性氧化損傷的作用（n=100，D）Continue table 4 Survival time parameters in drosophila exposed to H2O2 following CRS（n=100，D）

續(xù)表4 東北刺人參對(duì)果蠅亞急性氧化損傷的作用（n=100，D）Continue table 4 Survival time parameters in drosophila exposed to H2O2 following CRS（n=100，D）

注：**P<0.01 與對(duì)照組相比差異極顯著；-表示無(wú)數(shù)值。

平均存活率延長(zhǎng)/%刺人參 2 組（0.23%） ♀n=74 39.67±9.86** 24.75♂n=78 37.17±10.86** 15.15刺人參 3 組（0.12%） ♀n=74 33.36±9.87 4.90♂n=82 39.60±5.98** 22.67刺人參 4 組（0.06%） ♀n=81 34.27±12.14 7.77♂n=67 32.71±10.89 1.33組別 性別/數(shù)量 平均存活時(shí)間/h

在亞急性氧化損傷實(shí)驗(yàn)中，與空白對(duì)照組比較，在藥物濃度為0.46%和0.23%時(shí)雌雄果蠅平均存活時(shí)間分別呈現(xiàn)極顯著差異（P<0.01），藥物濃度為的0.12 %的雄果蠅平均存活時(shí)間亦呈現(xiàn)極顯著性差異（P<0.01）。

2.2.3 東北刺人參對(duì)不同時(shí)期果蠅的攀爬活動(dòng)的影響

東北刺人參對(duì)不同時(shí)期果蠅的攀爬活動(dòng)的影響見(jiàn)表5。

表5 東北刺人參對(duì)不同時(shí)期果蠅的攀爬活動(dòng)的影響（n=5，D）Table 5 Climbing ability in drosophila following CRS supplement（n=5，D）

表5 東北刺人參對(duì)不同時(shí)期果蠅的攀爬活動(dòng)的影響（n=5，D）Table 5 Climbing ability in drosophila following CRS supplement（n=5，D）

注：*P<0.05 與對(duì)照組相比差異顯著。

組別 攀爬能力/只10 d 20 d 30 d對(duì)照組 ♀ 4.80±0.84 4.20±0.84 3.40±0.89♂ 4.80±0.33 4.40±0.33 2.80±0.84刺人參 1 組（0.46 %） ♀ 4.80±0.71 5.20±0.54 3.40±0.89♂ 4.80±1.30 6.00±0.71* 3.40±1.14刺人參 2 組（0.23 %） ♀ 4.60±0.54 4.80±0.84 2.80±0.84♂ 4.90±0.54 5.80±0.84* 2.80±0.84刺人參3 組（0.12 %） ♀ 4.80±1.92 4.20±0.83 2.40±0.55♂ 4.60±1.14 4.40±1.14 2.80±1.00刺人參4 組（0.06 %） ♀ 5.00±1.58 5.00±0.71 3.20±0.84♂ 4.60±1.14 4.20±0.45 2.40±0.89

由表5 可知，與空白對(duì)照組相比，東北刺人參給藥濃度為0.46%和0.23%的雄果蠅攀爬能力在第20 天顯著增加（P<0.05）；其余各組無(wú)顯著性差異。

2.2.4 東北刺人參對(duì)果蠅繁殖能力的影響

東北刺人參對(duì)果蠅繁殖能力的影響見(jiàn)表6。

與空白對(duì)照組相比，給藥后各組7 日和15 日蠅的子代數(shù)均呈不同程度增加，其中，給藥濃度為0.46%組7 日齡果蠅的子代數(shù)增加有極顯著意義（P<0.01）；給藥濃度為0.23%組7 日齡果蠅的子代數(shù)增加有極顯著意義（P＜0.01）；給藥各組15 日齡果蠅的子代數(shù)增加均有顯著性差異（P＜0.05）；給藥濃度0.46%和0.23%組的30 天蠅的子代數(shù)增加有顯著差異（P＜0.05）。

表6 東北刺人參對(duì)果蠅繁殖能力的影響（n=6，D）Table 6 Reproduction parameters in Drosophila following CRS supplement（n=6，D）

表6 東北刺人參對(duì)果蠅繁殖能力的影響（n=6，D）Table 6 Reproduction parameters in Drosophila following CRS supplement（n=6，D）

注：*P＜0.05 與對(duì)照組相比差異顯著，**P＜0.01 與對(duì)照組相比差異極顯著。

組別 繁殖能力/只7 d 15 d 30 d對(duì)照組 25.33±6.47 25.17±6.31 23.50±6.30刺人參 1 組（0.46 %） 53.17±9.37** 38.50±4.93* 33.83±2.92*刺人參 2 組（0.23 %） 41.67±8.09** 37.67±10.76* 33.50±7.74*刺人參 3 組（0.12 %） 37.83±5.11* 35.33±4.27* 29.50±9.89刺人參 4 組（0.06 %） 36.83±5.04 36.67±10.57* 28.33±5.56

2.3 刺人參對(duì)力竭游泳實(shí)驗(yàn)小鼠SOD含量和MDA活力的影響

刺人參對(duì)力竭游泳實(shí)驗(yàn)小鼠SOD 含量和MDA 活力的影響見(jiàn)表7。

表7 刺人參對(duì)小鼠SOD 和MDA 含量的影響（D）Table 7 Effects of Oplopanax elatus on MDA and SOD of mice（D）

表7 刺人參對(duì)小鼠SOD 和MDA 含量的影響（D）Table 7 Effects of Oplopanax elatus on MDA and SOD of mice（D）

注：#P＜0.05 與對(duì)照組相比差異顯著；##P＜0.01 與對(duì)照組相比差異極顯著；*P＜0.05 與對(duì)照組相比差異顯著。

組別SOD/（U/mg）MDA/（nmol/mg）對(duì)照組 417.13±29.23 12.45±0.22刺人參高劑量組 502.76±12.84* 7.61±0.15##刺人參中劑量組 461.96±10.74 9.12±0.93#刺人參低劑量組 437.08±18.81 10.60±1.51

由表7 可知，與空白對(duì)照組相比，刺人參凍干粉高劑量組MDA 含量降低具有顯著差異（P＜0.01），中劑量組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。同理，與空白對(duì)照組相比，刺人參凍干粉高劑量組SOD 活性升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），上述結(jié)果提示東北刺人參能清除在有氧條件下產(chǎn)生的超氧自由基，以阻止自由基被破壞，抑制過(guò)氧化物產(chǎn)生，具有抗氧化的作用。

3 結(jié)論

研究發(fā)現(xiàn)，活性氧自由基產(chǎn)生過(guò)多，可導(dǎo)致生物膜中的多種不飽和脂類發(fā)生超氧化，形成脂質(zhì)過(guò)氧化物，從而引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能破壞。氧化損傷不僅與多種疾病的發(fā)生有著密切相關(guān)，還會(huì)造成細(xì)胞變形、突變和死亡，是人類衰老的重要原因之一[13]。天然抗氧化劑因在疾病預(yù)防與治療、延緩衰老過(guò)程中發(fā)揮重要作用而廣為人知，欲驗(yàn)證這些天然抗氧化劑的生物活性，需采用體內(nèi)外多種實(shí)驗(yàn)方法。本實(shí)驗(yàn)首先優(yōu)化微板法測(cè)定DPPH 自由基清除率的條件，確定最佳反應(yīng)時(shí)間為30 min，反應(yīng)體積為1 ∶1，刺人參水煎液DPPH自由基清除率的IC50值為0.829 mg/mL，體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，刺人參具有顯著的抗氧化活性。國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)[1，14]，東北刺人參中主要含揮發(fā)油、皂苷、蒽醌、黃酮、脂肪酸、游離氨基酸等多種成分，其中酚類、多糖和皂苷類成分可能為抗氧化作用的有效成分。

果蠅作為一種真核多細(xì)胞生物，因其壽命短、繁殖力強(qiáng)，且其代謝、生理狀況和生長(zhǎng)發(fā)育等也同哺乳動(dòng)物基本相似，是研究抗氧化及抗衰老藥物的理想模型[15-16]。本實(shí)驗(yàn)選取果蠅為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，分別考察不同濃度的東北刺人參對(duì)果蠅壽命相關(guān)行為學(xué)指標(biāo)的影響。在考察壽命實(shí)驗(yàn)中，各給藥組的果蠅平均壽命和最長(zhǎng)壽命均有不同程度的延長(zhǎng)，上述結(jié)果表明，長(zhǎng)期服用東北刺人參具有延長(zhǎng)壽命的作用，而此作用并未體現(xiàn)劑量依賴性。在繁殖能力實(shí)驗(yàn)中，給藥后各組對(duì)果蠅的子代數(shù)均呈不同程度增加，由結(jié)果可知，東北刺人參具有改善果蠅生殖能力的作用，且呈現(xiàn)計(jì)量依賴性，而隨著日齡增加果蠅子代數(shù)增加呈降低趨勢(shì)，提示適量補(bǔ)充東北刺人參可提高果蠅的繁殖能力。已有文獻(xiàn)報(bào)道[17-18]，東北刺人參對(duì)糖代謝紊亂所致的小鼠亞急性衰老模型癥狀有逆轉(zhuǎn)作用，與人參呈現(xiàn)相似的抗衰老作用。在體外抗氧化實(shí)驗(yàn)中，刺人參水煎液凍干粉在0.625 mg/mL～10.0 mg/mL 的濃度范圍內(nèi)，自由基清除率為42.2%～89.0%，生物活性和濃度成正相關(guān)，在體內(nèi)亞急性氧化損傷實(shí)驗(yàn)中，不同濃度東北刺人參雌雄果蠅平均存活時(shí)間不同程度延長(zhǎng)，此外，該藥可降低力竭游泳實(shí)驗(yàn)小鼠MDA 含量，提高SOD 活力。因此，東北刺人參不僅在體外有一定的抗氧化作用，而且在動(dòng)物體內(nèi)也有顯著的抗亞急性氧化損傷效果。

綜上所述，東北刺人參可延長(zhǎng)果蠅壽命，增加果蠅的子代數(shù)量，提高老年蠅的攀爬能力，提高老齡果蠅抗亞急性氧化損傷能力，并降低力竭游泳實(shí)驗(yàn)小鼠MDA 含量，提高SOD 活力，具有體內(nèi)外抗氧化作用，并可改善果蠅與壽命相關(guān)的指標(biāo)，上述研究結(jié)果可為東北刺人參的開(kāi)發(fā)利用提供參考。