王巨龍 ，王西軍，蕭 晟，王本忠，黎 婷

(1.蕪湖職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物工程學(xué)院，安徽蕪湖 241003；2.山東濰坊盛世富民合作社，山東濰坊 261100)

0 引言

特種經(jīng)濟(jì)動物北極狐作為重要的皮毛動物，已成為我國皮裘市場的支柱產(chǎn)業(yè)之一.近年來，隨著北極狐大規(guī)模的養(yǎng)殖，在自然發(fā)情的狀態(tài)下出現(xiàn)初產(chǎn)母狐乏情、發(fā)情不明顯、產(chǎn)仔數(shù)低和無法集中發(fā)情等生殖機(jī)能障礙[1].這些現(xiàn)象嚴(yán)重影響北極狐的繁殖力，加重養(yǎng)殖戶的飼養(yǎng)成本.早在20世紀(jì)初，我國科研工作者便開展了家畜動物發(fā)情研究[2].當(dāng)前研究多為外源性生殖激素FSH和PMSG對卵泡發(fā)育及LH和hCG 對排卵影響.這些方法和技術(shù)已成功應(yīng)用于牛、羊、豬等家畜動物中[3-5]，并取得重大的經(jīng)濟(jì)效應(yīng).1994年，白云君、劉志平等人對藍(lán)狐和銀黑狐進(jìn)行了休情期的超排處理，初步探索了藍(lán)狐和銀黑狐超數(shù)排卵技術(shù)的基本方法和影響因素[6-7].對于使用外源性生殖激素孕馬血清促性腺激素PMSG對狐貍促發(fā)情效果的觀察研究，崔青山等人的研究結(jié)果表明，采用PMSG450 IU和hCG600 IU可獲得較好的發(fā)情效果[8].當(dāng)前，關(guān)于PMSG和hCG對北極狐發(fā)情及組合使用對其繁殖性能的影響，目前尚未有報道.本研究我們擬探究外源性生殖激素PMSG和hCG對初產(chǎn)北極狐繁殖性能的影響，以此提高養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)效益.

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗選用體重達(dá)11～13 Kg健康初產(chǎn)雌性北極狐，這些試驗狐均來自山東濰坊富民合作社.這些狐隨機(jī)分籠飼養(yǎng)，2～3只一籠，1月份后單籠飼養(yǎng)，定時投喂飼料(注：試驗喂養(yǎng)的北極狐飼糧是由合作單位提供的飼料.飼料中動物性飼料占60%～70%，主要有魚類、血、蝦類及畜禽副產(chǎn)品，植物性飼料占30%左右，主要有玉米、小麥、麥麩等)，自由飲水.

1.1.1 試驗藥品及器械 生理鹽水、孕馬血清促性腺激素PMSG(寧波第二激素廠)、人絨毛膜促性腺激素hCG(寧波第二激素廠)、人工授精器械、10 mL 注射器、消毒酒精、載玻片、顯微鏡、鑷子.

1.1.2 試驗時間 2018.2.4-2019.7.15

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗設(shè)計一 選取60只母狐隨機(jī)分成4組，每組15只.其中A、B和C為試驗組，D為對照組，外源生殖激素處理如表1所示.然后統(tǒng)計發(fā)情率、受胎率、產(chǎn)仔數(shù).

1.2.2 試驗設(shè)計二 選取55只母狐隨機(jī)分成4組，其中A、B和C為試驗組.按試驗設(shè)計一注射后進(jìn)行發(fā)情鑒定，對發(fā)情母狐在人工授精前12 h注射對應(yīng)等量的hCG.統(tǒng)計發(fā)情率、受胎率和產(chǎn)仔數(shù).

1.3 發(fā)情鑒定的判定

北極狐的發(fā)情表現(xiàn)主要包括其外生殖道變化、行為表現(xiàn)以及陰道上皮細(xì)胞變化等方面.通過外生殖器官及陰道上皮細(xì)胞檢查綜合判定發(fā)情，確保母狐處于最佳的人工授精時間，確保母狐受胎率.

1.3.1 外生殖器官檢查 母狐發(fā)情期通常在春季出現(xiàn)，外生殖器官發(fā)生特征性生理變化，大致分為3個時期.

第一時期：由靜止期到發(fā)情前期，陰毛覆蓋的陰門開始變?yōu)橥馔鼓[脹，陰門略開，極少可見有粘液流出，陰毛分開，陰蒂開始增大.此時，母狐貍出現(xiàn)生理性沖動，接近公狐貍但不接受爬跨.

第二時期：發(fā)情期，陰門持續(xù)腫脹近圓形，腫脹面如硬塊，表面充血，陰蒂增大呈紅潤色，有少量的粘液從陰門流出.母狐表現(xiàn)異常興奮，表現(xiàn)活躍，開始主動接觸公狐貍，但拒絕接受交配.

第三時期：發(fā)情期到發(fā)情后期，此階段母狐陰門腫脹呈圓形，腫脹面變軟，出現(xiàn)輕微皺紋，顏色變深，外翻，陰門處可見有白色乳白色的分泌物.母狐表現(xiàn)安靜，主動接近公狐貍并翹起尾巴，接收公狐爬跨完成交配.此階段也是人工授精的最佳時間.

1.3.2 陰道上皮細(xì)胞圖像檢查 取少許北極狐陰道分泌物，制成涂片置于顯微鏡下觀察，并記錄發(fā)情.根據(jù)母狐陰道分泌物細(xì)胞圖像，其發(fā)情周期可大致分為四個時期.發(fā)情靜止期，涂片僅見大量球形的白細(xì)胞；發(fā)情前期，白細(xì)胞大量消失，視野下可見少量多角形有核角化上皮細(xì)胞；發(fā)情期，白細(xì)胞消失，多角形有核角化上皮細(xì)胞明顯增多，此時處于最佳授精時間；發(fā)情后期，多角形角化上皮細(xì)胞，出現(xiàn)碎裂，白細(xì)胞出現(xiàn).

1.4 人工授精技術(shù)

為了保證精液中精子數(shù)量與精子活力高，提高北極狐受孕率，試驗采集新鮮種用北極狐精液，3倍精液稀釋，人工授精每次所輸?shù)木訑?shù)量不低于4 000萬個[9-10].一人將發(fā)情的母狐固定并提起尾巴，另一人一手持輸精管，一只手握住子宮頸口位置，緩慢的插入輸精針置于子宮內(nèi)，將精液注入子宮內(nèi).北極狐的排卵可持續(xù)3 d，要求24 h內(nèi)必須復(fù)配，連續(xù)輸精3次，統(tǒng)計北極狐的受胎率.

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

實驗數(shù)據(jù)通過SPSS 17.0軟件進(jìn)行LSD多重比較進(jìn)行顯著性分析.

發(fā)情率=發(fā)情母狐總數(shù)/試驗?zāi)负倲?shù)*100%；

受胎率=妊娠母狐總數(shù)/發(fā)情母狐總數(shù)*100%；

產(chǎn)仔數(shù)/窩=妊娠母狐產(chǎn)仔總數(shù)(包括死胎和死產(chǎn))/妊娠母狐數(shù)；

產(chǎn)活數(shù)/窩=出生一個月后存活的幼仔總數(shù)/妊娠母狐總數(shù).

2 試驗結(jié)果與分析

2.1 PMSG對北極狐生殖能力的影響

利用外源性生殖激素PMSG對北極狐發(fā)情率、受胎率、產(chǎn)仔數(shù)、產(chǎn)仔數(shù)/窩、產(chǎn)活數(shù)/窩的影響.結(jié)果顯示(表1)，肌注PMSG劑量為100 IU，其發(fā)情率達(dá)86.7%、受胎率為92.3%.與對照組相比，肌注PMSG200 IU北極母狐的發(fā)情率為100%，母狐的發(fā)情率、受胎率、產(chǎn)仔數(shù)顯著的提高.其產(chǎn)仔數(shù)/窩提高了1.45只，產(chǎn)活數(shù)/窩提高1.405只.B組與C組在發(fā)情率100%情況下，C組的受胎率、窩產(chǎn)數(shù)、產(chǎn)活數(shù)要高于B組.

表1 不同劑量PMSG 對母狐生殖能力的影響Tab.1 Effect of different doses of PMSG on the reproductive function of female arctic fox

2.2 PMSG與hCG協(xié)同對北極狐生殖能力的影響

為進(jìn)一步探究PMSG與hCG協(xié)同對北極狐生殖能力的影響，處理如表2所示.結(jié)果顯示，PMSG配合hCG北極狐受胎率表現(xiàn)為86%～100%，其中使用150、200 IUPMSG配合等量單位的hCG，北極狐受胎率達(dá)100%，顯著高于對照組的85.7%的受胎率；與對照組相比，150 IUPMSG配合hCG作用下，可顯著提高北極狐的窩產(chǎn)數(shù)及產(chǎn)活數(shù).其窩產(chǎn)數(shù)、產(chǎn)活數(shù)分別提高2.7只、3.4只.B組與C組在受胎率100%情況下，B組的窩產(chǎn)數(shù)、產(chǎn)活數(shù)分別要高于C組.

表2 PMSG與HCG對母狐生殖能力的影響Tab.2 Effects of PMSG and HCG on the reproductive function of female arctic fox

3 討論

生殖激素是調(diào)控動物發(fā)情周期的關(guān)鍵因素.通過外源性注射生殖激素可以促進(jìn)卵泡發(fā)育，利于卵子排出.當(dāng)前在許多國外大型規(guī)模化家畜養(yǎng)殖場內(nèi)，外源性生殖激素已得到了廣泛的應(yīng)用[11].我國在這方面的研究也取得了較好的經(jīng)濟(jì)效果.北極狐屬犬科，季節(jié)性單次發(fā)情且發(fā)情期持續(xù)3～5 d[12].北極狐發(fā)情和配種集中在每年的2月份中旬，然而年輕適配的母狐往往出現(xiàn)發(fā)情不明顯，延期發(fā)情或不發(fā)情等生殖障礙[1]，造成生產(chǎn)管理上困難，飼養(yǎng)成本增加.

外源性PMSG又稱孕馬血清促性腺激素，其功能為刺激卵巢發(fā)育，促進(jìn)動物卵泡發(fā)育.HCG 激素可促進(jìn)卵泡成熟、排卵和黃體出現(xiàn)，兩者同時應(yīng)用具有協(xié)同作用.在家畜生產(chǎn)使用PMSG激素誘導(dǎo)動物發(fā)情，促進(jìn)閉鎖卵泡發(fā)育及成熟，利于動物超數(shù)排卵.如崔青山[8]研究顯示，利用PMSG對母狐的催情的效果達(dá)100%.我們試驗使用150 IU及200 IUPMSG所獲結(jié)果與其研究結(jié)果一致.合理利用PMSG劑量能夠提高年輕母狐的發(fā)情率，便于北極狐集中繁殖管理.

PMSG和hCG協(xié)同配合使用可提高動物的繁殖能力.外源生殖激素協(xié)同作用研究已應(yīng)用于牛、豬、水貂等動物上.李非平等[13]等人研究顯示通過注射外源性生殖激素PMSG和hCG可提高母豬的產(chǎn)仔數(shù).本文的研究顯示PMSG和hCG在150 IU顯著提高北極狐繁殖性能，窩產(chǎn)數(shù)比對照組高32.5%.但在高劑量200 IU作用下，產(chǎn)仔數(shù)低于150 IU組.表明高劑量生殖激素可能會產(chǎn)生負(fù)效應(yīng).很大可能是卵巢受到過度刺激作用，出現(xiàn)卵母細(xì)胞發(fā)育停滯或成熟卵子不排出現(xiàn)象[13].這也有待于我們后期進(jìn)一步研究.