吳 靜 王庚申 柳敏海 李偉業(yè), 汪 瑋 施 慧許文軍 謝建軍 何 杰

(1. 浙江海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院, 舟山 316000; 2. 浙江省海洋水產(chǎn)研究所, 浙江省海水增養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 舟山 316000;3. 舟山市水產(chǎn)研究所, 舟山 316000; 4. 寧波大學(xué), 寧波 315000)

美洲黑石斑(Centropristis striata), 又稱條紋鋸鮨和黑鋸鮨, 俗稱黑石斑。屬鮨科(Serranidae)、石斑魚亞科(Epinephelinae)、石斑魚屬(Epinephelus),原產(chǎn)于美國大西洋和墨西哥沿岸。因其肉質(zhì)肥美、口感滑而不膩, 而且生長速度快, 病害少, 易于養(yǎng)殖, 深受美國和加拿大消費(fèi)者歡迎。2002年, 我國首次引入美洲黑石斑并進(jìn)行了育苗試驗(yàn), 2006年實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)并逐步走向網(wǎng)箱、工廠化養(yǎng)殖, 如今美洲黑石斑已成為非常有前景和市場(chǎng)價(jià)值的養(yǎng)殖對(duì)象[1,2]。

目前, 國外關(guān)于美洲黑石斑的研究主要集中在健康養(yǎng)殖與繁育、生態(tài)漁業(yè)評(píng)價(jià)和生物學(xué)等方面,Copeland等[3]研究了野生美洲黑石斑以四種不同密度圈養(yǎng)在循環(huán)池系統(tǒng)中的生長與飼料利用; Alam等[4]研究了美洲黑石斑幼魚的膳食蛋白需要量;Weirich[5]研究了美洲黑石斑幼魚在不同鹽度下對(duì)急性氨和亞硝酸鹽暴露的耐受性; 國內(nèi)對(duì)美洲黑石斑的研究主要集中在營養(yǎng)成分[6]、育苗及養(yǎng)成技術(shù)等方面, 李海燕等[7]用解剖和光鏡技術(shù)觀察了美洲黑石斑消化道的形態(tài)及組織學(xué)結(jié)構(gòu); 邱金海等[8]對(duì)美洲黑石斑進(jìn)行了營養(yǎng)成分分析與營養(yǎng)價(jià)值評(píng)價(jià),但涉及病害方面的研究報(bào)道很少。2018年7月, 舟山市水產(chǎn)研究所圍塘養(yǎng)殖的一批美洲黑石斑幼齡魚暴發(fā)性死亡, 死亡率達(dá)30%。病魚活動(dòng)緩慢, 沉于養(yǎng)殖池底部。魚體表完好未見異常, 解剖病魚發(fā)現(xiàn), 魚鰓絲上白點(diǎn)明顯, 脾臟和腎臟組織均布滿1—2 mm左右灰白色小結(jié)節(jié), 肝臟未見結(jié)節(jié)。本課題組從發(fā)病魚體內(nèi)臟組織分離純化到一株致病菌,開展了致病性、細(xì)菌形態(tài)學(xué)、生理生化, 分子生物鑒定、藥敏試驗(yàn)以及組織病理和電鏡超微病理切片等研究, 以期為美洲黑石斑健康養(yǎng)殖和疾病防治提供理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

發(fā)病美洲黑石斑于2018年7月采集自舟山市水產(chǎn)研究所, 體長10—12 cm, 體重40—50 g, 選取臨床表現(xiàn)出特征性的鰓絲蒼白的病魚。人工感染試驗(yàn)材料為舟山市水產(chǎn)研究所健康美洲黑石斑, 體長12—14 cm。

主要試劑： 胰蛋白胨大豆肉湯(TSB)購于青島高科園海博生物技術(shù)有限公司, TCBS瓊脂購于杭州濱和微生物試劑有限公司, 細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒購自QIAGEN公司, 藥敏紙片購于杭州微生物試劑有限公司,TaqDNA聚合酶、dNTP購自TaKaRa公司。

1.2 病原菌分離培養(yǎng)

取臨床表現(xiàn)出典型病癥的瀕死病魚, 取鰓絲、體表黏液及腸道內(nèi)容物等制成水浸片, 顯微鏡下觀察。用75%酒精棉球?qū)Σ◆~體表消毒后, 在無菌條件下取病魚肝臟、腎臟小塊, 進(jìn)行組織勻漿, 并劃線接種于常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)基胰蛋白胨大豆瓊脂(TSA)和弧菌選擇性培養(yǎng)基(TCBS)培養(yǎng)基上, 28℃培養(yǎng)24—48h, 觀察細(xì)菌生長情況。挑選形態(tài)一致的菌株純化培養(yǎng), 將純化后的菌株置于30%甘油溶液中-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 形態(tài)學(xué)觀察和生理生化特性鑒定

挑取TSA培養(yǎng)基上純化培養(yǎng)的菌落, 進(jìn)行革蘭氏染色, 并在顯微鏡下觀察其菌落形態(tài)和大小。采用API 20E試劑盒鑒定其生理生化特性, 具體操作按照試劑盒說明進(jìn)行。

1.4 藥敏試驗(yàn)

將優(yōu)勢(shì)菌株接種于TSA培養(yǎng)基上, 經(jīng)28℃純化培養(yǎng)48h后, 加入無菌生理鹽水制成菌懸液, 采用紙片擴(kuò)散法, 取100 μL制備的菌懸液(經(jīng)顯微鏡計(jì)數(shù)約為109CFU/mL)涂布于TSA平板, 用無菌鑷子將藥敏紙片輕輕貼在平板表面, 28℃恒溫培養(yǎng)24h后測(cè)定抑菌圈直徑, 根據(jù)說明書的標(biāo)準(zhǔn)確定分離菌株對(duì)不同抗生素的敏感性。

1.5 人工感染實(shí)驗(yàn)

將分離到的優(yōu)勢(shì)菌株經(jīng)TSA培養(yǎng)基28℃培養(yǎng)48h后, 用0.85%的無菌生理鹽水制成菌懸液。采用分光光度法測(cè)定菌液濃度, 配置1×107、1×106和1×105CFU/mL的菌懸液。選擇規(guī)格均一、有活力的健康美洲黑石斑進(jìn)行回感實(shí)驗(yàn)(體重80 g左右, 體長12—14 cm), 每組7尾魚, 每個(gè)感染組設(shè)一個(gè)平行對(duì)照分別對(duì)應(yīng)A、B、C組, 并設(shè)1個(gè)空白對(duì)照組。采用腹腔注射法對(duì)美洲黑石斑進(jìn)行人工感染實(shí)驗(yàn),每尾魚注射1.5 mL菌懸液, 空白對(duì)照組注射等量的0.85%生理鹽水。試驗(yàn)水溫26℃, 連續(xù)充氣, 不投喂, 每天換水量為30%, 連續(xù)觀察7d, 記錄發(fā)病癥狀和死亡情況。并對(duì)瀕死病魚進(jìn)行重分離實(shí)驗(yàn)。

1.6 組織病理學(xué)觀察

光鏡樣品制備及觀察選擇鰓部白點(diǎn)癥狀明顯的發(fā)病魚, 分別取其肝、脾及腎等組織經(jīng)Bouin氏液固定, 在24h后換數(shù)次75%乙醇沖洗, 最后保存于75%的乙醇中。固定樣品經(jīng)后續(xù)乙醇系列及丙酮脫水過程, 移入二甲苯溶液中透明, 浸蠟包埋后切片, 烤干后展片以蘇木精-伊紅染色法(HE 染色) 染色, 中性樹膠封片, 顯微鏡下觀察拍照[9—11]。

電鏡樣品制備及觀察選擇患病活魚, 將病魚肝、脾及腎等內(nèi)臟組織切成2 mm×2 mm×2 mm的小塊分別固定于2.5%戊二醛磷酸緩沖液(0.1 mol/L, pH 7.4) 中, 4℃固定4h以上。在0.1 mol /L磷酸緩沖液中4℃漂洗過夜后再用1%鋨酸溶液固定, 經(jīng)過一系列濃度的乙醇脫水, 樣品塊經(jīng)環(huán)氧樹脂包埋后制備超薄切片, 在透射電鏡下觀察拍照[12,13]。

1.7 分離菌16S rDNA基因序列測(cè)定及系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建

利用細(xì)菌基因組提取試劑盒提取分離菌的全基因組DNA作為PCR模板。采用細(xì)菌16S rDNA通用擴(kuò)增引物, 正向引物27F： 5′-AGAGTTTGAT CMTGGCTCAG-3′, 反向引物1492R： 5′-TACG GYTACCTTGTTACGACTT-3′。引物由上海生物工程公司合成。

PCR反應(yīng)體系為50 μL： 10×PCR緩沖液5 μL,2.5 mmol/L dNTP 4 μL,Taq聚合酶(5 U/μL) 0.5 μL,10 μmol/L正向和反向引物各0.5 μL, 1 μL模板, 其余用無菌去離子水補(bǔ)足。

PCR反應(yīng)條件： 94℃預(yù)變性5min, 94℃變性1min, 56℃退火45s, 72℃延伸1min, 30個(gè)循環(huán), 72℃延伸10min。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后,由上海生物工程公司測(cè)序。

運(yùn)用DNAMAN 軟件對(duì)獲取的基因序列進(jìn)行排序、比對(duì), 同時(shí)應(yīng)用NCBI 中BLAST軟件對(duì)測(cè)得的基因序列進(jìn)行同源檢索。從GenBank中下載同源性較高基因序列作參考, 使用MEGA3.1分析軟件,Kimura-2法計(jì)算遺傳距離, 并采用bootstrap (重復(fù)次數(shù)1000)進(jìn)行自舉分析, 鄰接法構(gòu)建分子發(fā)育樹。

2 結(jié)果

2.1 解剖觀察與臨床癥狀

發(fā)病池塘水溫29℃左右, 發(fā)病魚多為體長12 cm左右的幼魚, 該病日死亡率在1%以上。病魚體表完好、無潰瘍等異常病癥。解剖瀕死活魚, 主要病癥表現(xiàn)為鰓部白點(diǎn)明顯; 肝臟發(fā)白; 脾臟腫大, 布滿白色結(jié)節(jié); 頭腎、后腎腫大, 布滿白色結(jié)節(jié); 心臟上偶見有白色結(jié)節(jié)(圖1); 將組織器官上的白色結(jié)節(jié)壓片后, 革蘭氏染色可見大量陰性短桿菌(圖2)。

圖1 患病美洲黑石斑魚及其解剖圖Fig. 1 Sick black seabass and its anatomy

2.2 寄生蟲檢測(cè)和細(xì)菌分離

對(duì)采集病魚樣本的體表黏液、鰓絲、腸道內(nèi)容物等進(jìn)行顯微鏡檢, 均未發(fā)現(xiàn)致病性寄生蟲。在無菌條件下, 使用細(xì)菌培養(yǎng)基TSA和TCBS對(duì)病魚的肝、腎和脾等內(nèi)臟組織進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng), 28℃培養(yǎng)24—48h后觀察。在24h后, TSA和TCBS未發(fā)現(xiàn)有優(yōu)勢(shì)致病菌出現(xiàn), 48h在TSA培養(yǎng)基上長出直徑約1 mm, 表面濕潤、隆起的灰白色菌落。TCBS上為綠色、直徑約1 mm左右的細(xì)小菌落。

2.3 形態(tài)特征及生理生化試驗(yàn)結(jié)果

分離菌ZS201807經(jīng)革蘭氏染色后為陰性、桿狀菌, 其大小約0.5 μm×2 μm, 可運(yùn)動(dòng)。采用API 20E系統(tǒng)鑒定分離菌, 其主要生理特征為賴氨酸脫羧酶、鳥氨酸脫羧酶陽性, 精氨酸雙水介酶、鄰硝基苯-半乳糖苷酶、脲酶、明膠酶陰性, 產(chǎn)生H2S,不形成吲哚, 不利用檸檬酸, V-P試驗(yàn)陰性, 氧化酶陰性, 能發(fā)酵葡萄糖, 不能利用甘露醇、肌醇、山梨醇、鼠李糖、蔗糖、阿拉伯糖產(chǎn)酸。鑒定結(jié)果與文獻(xiàn)[14]遲緩愛德華氏菌(Edwardsiella tarda)生理生化特征基本一致, 初步將ZS201807鑒定為遲緩愛德華氏菌(表1)。

2.4 藥敏試驗(yàn)

利用27種抗生素對(duì)分離菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)(表2)。用紙片法測(cè)得分離菌株對(duì)環(huán)丙沙星、頭孢曲松、諾氟沙星、頭孢噻肟、氧氟沙星、四環(huán)素、恩諾沙星等14種藥物敏感; 對(duì)青霉素、阿奇霉素、丁胺卡那、妥布霉素、鏈霉素、卡那霉素、萬古霉素等13種藥物耐受。

2.5 16S rDNA基因序列分析結(jié)果

通過PCR反應(yīng)擴(kuò)增, 經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)獲得1400 bp的特異性條帶。經(jīng)測(cè)序獲得16S rDNA基因序列, 與GenBank中已登陸的核酸序列進(jìn)行BLAST分析, 采用MEGA軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹, 結(jié)果顯示分離菌與愛德華氏菌屬自然聚為一分支, 分離菌的16S rDNA基因序列與遲緩愛德華氏菌最為相似, 同源性高達(dá)99% (圖3)。結(jié)合生理生化鑒定結(jié)果, 進(jìn)一步確定ZS201807為遲緩愛德華氏菌。

2.6 人工感染實(shí)驗(yàn)

用分離到的優(yōu)勢(shì)菌對(duì)健康美洲黑石斑進(jìn)行腹腔注射感染實(shí)驗(yàn), 接種后第2天開始出現(xiàn)死亡。A組在感染4d后全部死亡, B組在7d內(nèi)死亡率為28.6%,C組在7d內(nèi)死亡率為0, 對(duì)照組在實(shí)驗(yàn)期間無發(fā)病癥狀、無死亡(表3)。人工感染試驗(yàn)發(fā)病魚表現(xiàn)的臨床癥狀與自然發(fā)病魚的相似, 活力下降, 解剖病死魚, 脾臟腫大并有大量白色結(jié)節(jié), 但鰓部和其他內(nèi)臟組織未見白色結(jié)節(jié)(圖4); 從感染魚分離得到的優(yōu)勢(shì)菌與ZS201807菌落形態(tài)、生理生化特征基本一致, 經(jīng)16S rDNA基因序列測(cè)定與回感菌株一致,證實(shí)分離菌株ZS201807是導(dǎo)致此次美洲黑石斑暴發(fā)性死亡的病原菌。

2.7 組織病理切片觀察結(jié)果

在普通光學(xué)顯微鏡下觀察病魚的組織病理切片, 發(fā)現(xiàn)病魚的肝臟、腎臟等組織有嚴(yán)重的病理變化。病魚肝臟中可見明顯的細(xì)胞腫脹, 血管內(nèi)出現(xiàn)輕微溶血, 肝細(xì)胞界限模糊, 細(xì)胞間質(zhì)增寬, 細(xì)胞核濃縮或崩解消失(圖版Ⅰ-1); 脾臟組織細(xì)胞壞死, 大量紅細(xì)胞浸潤, 出現(xiàn)嚴(yán)重瘀血, 在紅髓和白髓區(qū)均可見散在的壞死灶, 壞死灶內(nèi)實(shí)質(zhì)細(xì)胞界限模糊不清, 有淋巴細(xì)胞浸潤(圖版Ⅰ-2); 鰓絲末端膨大, 鰓絲毛細(xì)血管擴(kuò)張, 鰓小片腫脹、排列不規(guī)則呈波狀扭曲, 嚴(yán)重的鰓小片上皮細(xì)胞與毛細(xì)血管分離, 淋巴細(xì)胞浸潤(圖版Ⅰ-3); 病魚腎組織壞死、大量淋巴細(xì)胞浸潤, 腎小管管腔狹窄, 部分腎小管閉塞, 失去原有結(jié)構(gòu), 上皮細(xì)胞腫脹界限模糊不清晰、細(xì)胞核空泡化; 腎小球腫大, 嚴(yán)重的崩解, 囊腔變窄, 細(xì)胞空泡化(圖版Ⅰ-4); 頭腎出現(xiàn)大面積組織壞死和崩解并形成壞死灶, 部分壞死組織淀粉樣變性, 血竇擴(kuò)張, 瘀血(圖版Ⅰ-5); 病魚心肌纖維結(jié)構(gòu)松散、紊亂, 心肌退化變性, 胞質(zhì)液化呈均質(zhì)玻璃樣病變,部分心肌細(xì)胞壞死(圖版Ⅰ-6)。

圖2 白色結(jié)節(jié)壓片革蘭氏染色Fig. 2 White nodule tablet with gram-stained

表1 分離菌生理生化鑒定結(jié)果Tab. 1 Physiological and biochemical identification results of isolated bacteria

表2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果Tab. 2 Results of drug sensitivity test

圖3 根據(jù)分離菌16S rDNA基因序列構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹Fig. 3 Phylogenetic tree based on 16S rDNA gene sequence of isolated bacteria

表3 美洲黑石斑腹腔注射感染試驗(yàn)結(jié)果Tab. 3 Mortality of black seabass infected by intraperitoneal injection

圖4 人工感染實(shí)驗(yàn)魚解剖圖Fig. 4 Anatomical map of artificial infection experimental fish

2.8 超微病理

內(nèi)臟組織超薄切片電鏡觀察結(jié)果顯示, 心、肝、腎等組織在電鏡下未觀察到細(xì)菌, 但病魚脾臟和頭腎組織有大量細(xì)菌侵染, 細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重。病魚脾臟和頭腎組織中有大量桿狀細(xì)菌積聚, 與壞死細(xì)胞形成結(jié)節(jié), 細(xì)胞結(jié)構(gòu)遭到嚴(yán)重破壞(圖版Ⅱ-1、2); 細(xì)胞間有大量不同切面的細(xì)菌菌體, 菌體的細(xì)胞壁電子密度較高(圖版Ⅱ-3), 細(xì)菌正在以出芽的方式生長發(fā)育, 并有大量的芽孢出現(xiàn)(圖版Ⅱ-4)。

3 討論

3.1 內(nèi)臟白點(diǎn)病病原

細(xì)菌病是影響海水魚類養(yǎng)殖的主要病害之一,內(nèi)臟白點(diǎn)病是近年海水魚類養(yǎng)殖中比較常見的疾病。目前, 引起海水魚類內(nèi)臟白點(diǎn)病的病原種類很多, 邱楊玉[15]在患內(nèi)臟白點(diǎn)病大黃魚(Larimichthys crocea)內(nèi)臟中分離鑒定到一株病原菌, 經(jīng)生理生化和分子生物學(xué)方法確定為惡臭假單胞菌(Pseudo-monas putida); 羅霞等[16]從患內(nèi)臟白點(diǎn)病的斑鱧(Channa maculata)的肝、脾、腎組織中分離一株致病菌GC1, 得到1502 bp的16S rRNA基因序列, 與舒氏氣單胞菌(Aeromonas schubertii)同源性達(dá)到99%; 張靜等[17]對(duì)導(dǎo)致網(wǎng)箱養(yǎng)殖鱸魚(Lateolabrax japonicus)內(nèi)臟白點(diǎn)病的致病菌進(jìn)行了16S rRNA和HSP60基因序列分析, 結(jié)果鑒定致病菌株為哈維氏弧菌(Vibrio harveyi)。在本實(shí)驗(yàn)中患病美洲黑石斑脾、腎內(nèi)臟組織有明顯白色結(jié)節(jié), 從發(fā)病魚中分離到一株優(yōu)勢(shì)菌株ZS201807, 人工感染試驗(yàn)結(jié)果顯示, 菌株ZS201807在健康美洲黑石斑上復(fù)制出相同的臨床癥狀, 說明本實(shí)驗(yàn)分離到的菌株ZS201807是引起此次美洲黑石斑發(fā)病死亡的病原菌。該菌株革蘭氏染色后為陰性、短桿狀菌, 采用通用引物擴(kuò)增了該菌的16S rDNA序列, 并對(duì)擴(kuò)增片段進(jìn)行了序列測(cè)定與系統(tǒng)發(fā)育分析, 結(jié)果表明該菌株16S rDNA基因與遲緩愛德華氏菌的同源性最高, 達(dá)99%, 從而在分子生物學(xué)水平上將菌株ZS201807鑒定為遲緩愛德華氏菌。

3.2 感染遲緩愛德華氏菌癥狀及致病性

遲緩愛德華氏菌(E.tarda)屬腸桿菌科(Enterobacteriaceae), 愛德華氏菌屬(Edwardsiella), 最早在蛇中被發(fā)現(xiàn), 1962年日本學(xué)者Hoshina首次報(bào)道在患病鰻鱺(Anguilla japonica)中發(fā)現(xiàn)遲緩愛德華氏菌。該菌分布范圍廣泛, 易感物種包括兩棲類、哺乳類、爬行類、魚類等多種動(dòng)物以及人類,可引起人類的腸胃炎、流行性腹瀉和敗血癥等疾病。目前該菌在20多種魚類中引起病害, 遲緩愛德華氏菌作為病原菌的研究在牙鲆(Paralichthys olivaceus)、黃顙魚(Pelteobagrus fulvidraco)、大菱鲆(Scophthalmus maximus)等魚種中均有報(bào)道[20—22]。不同的魚類感染遲緩愛德華氏菌后所表現(xiàn)出的癥狀也不同, 患病鱖魚(Siniperca chuatsi)癥狀為腹部發(fā)紅、肛門紅腫, 肝臟、腸壁充血, 腹腔有血樣腹水[23]; 自然發(fā)病羅非魚(Tilapia nilotica)同樣出現(xiàn)腹部發(fā)紅、肛門紅腫突出, 不同的是腹腔內(nèi)充滿氣體,有臭味, 膽囊高度充盈[24]; 本研究發(fā)病美洲黑石斑臨床癥狀未出現(xiàn)體表異常, 但鰓絲有明顯白點(diǎn)且黏液較多, 同時(shí)解剖病魚脾和頭腎等內(nèi)臟組織有大量的白點(diǎn)結(jié)節(jié), 但沒有出現(xiàn)文獻(xiàn)報(bào)道的眼球突出和渾濁、皮膚壞死和肌肉潰爛、肛門突出等臨床癥狀。劉春等[25]對(duì)斑馬魚(Danio rerio)進(jìn)行了遲緩愛德華氏菌的致病性試驗(yàn), 當(dāng)菌濃度達(dá)到1×107CFU/mL, 可以使試驗(yàn)感染魚全部發(fā)病死亡, 與本文的人工感染實(shí)驗(yàn)中實(shí)驗(yàn)組美洲黑石斑全部發(fā)病死亡時(shí)菌液濃度一致。許曉蕓等[13]研究遲緩愛德華氏菌人工感染美洲鰻鱺(Anguilla rostrata)后, 組織病理類型表現(xiàn)為肝腎混合型, 而超微病理表現(xiàn)為腎臟型。本研究中美洲黑石斑組織病理主要集中在脾臟和腎臟組織, 但超微電鏡切片只在脾臟和頭腎組織中觀察到遲緩愛德華氏菌, 可能與不同魚種機(jī)體免疫機(jī)制差異有關(guān)。遲緩愛德華氏菌病在水產(chǎn)養(yǎng)殖中屬于常見的傳染病, 對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來的經(jīng)濟(jì)損失非常大。目前關(guān)于遲緩愛德華氏菌病的傳播途徑還沒有研究清楚, 有學(xué)者提出許多動(dòng)物腸道攜帶遲緩愛德華氏菌以及水體里存在大量該菌, 可能會(huì)造成遲緩愛德華氏菌病的傳播[19]。

圖版 I 病魚肝臟、脾臟、鰓絲、腎臟、頭腎、心臟組織病理切片Plate I Pathological slices of liver, spleen, gill wire, kidney, head kidney and heart of diseased fish

圖版 Ⅱ 病魚脾、頭腎超微病理切片Plate Ⅱ Ultrastructural pathological section of spleen and head kidney of diseased fish

3.3 不同源遲緩愛德華氏菌抗藥性

目前治療遲緩愛德華氏菌病的主要手段是使用抗生素, 但不同源的分離菌株對(duì)抗生素的敏感程度也不一樣, 鱖分離到的遲緩愛德華氏菌對(duì)諾氟沙星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星等抗生素高度敏感[23]; 患病澳洲寶石魚(Scortum barcoo)分離的遲緩愛德華氏菌對(duì)環(huán)丙沙星、紅霉素、氯霉素、萬古霉素等抗生素較為敏感, 對(duì)其他藥物中度或不敏感[26]; 大菱鲆分離到的遲緩愛德華氏菌株對(duì)先鋒霉素V、慶大霉素、氟哌酸、痢特靈等抗生素敏感[27]。在本研究中, 分離獲得的美洲黑石斑源遲緩愛德華氏菌對(duì)環(huán)丙沙星、四環(huán)素、恩諾沙星等14種藥物敏感;對(duì)青霉素、阿奇霉素、丁胺卡那等13種藥物耐受。所以在抗生素的使用上, 應(yīng)該根據(jù)實(shí)際情況合理選擇, 其中一些禁藥應(yīng)該嚴(yán)格排除。