趙文輝
胃癌起源于胃黏膜上皮惡性腫瘤,在我國惡性腫瘤發(fā)病中居首位[1]。胃癌的發(fā)病有明顯的地域、性別差異,飲食結(jié)構(gòu)不合理、工作壓力增大、幽門螺桿菌感染等使胃癌呈年輕化。胃癌的預(yù)后與胃癌的部位、大小、組織類型、病理分期有關(guān);早期胃癌無明顯病理癥狀,極易被忽視;且目前尚無法精準(zhǔn)預(yù)測(cè)胃癌發(fā)病,因此尋找與胃癌發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后相關(guān)的特異性強(qiáng)的生物標(biāo)志物已成為臨床研究的重點(diǎn)[2]。長鏈非編碼RNA(LncRNA)在胃癌組織中異常表達(dá)可影響癌癥的發(fā)生發(fā)展等過程,但LncRNA在胃癌中的作用機(jī)制尚不明確[3]。長鏈非編碼RNA貓眼綜合征臨界區(qū)基因7(long non-coding RNA cat eye syndrome critical region gene 7,LncRNA CECR7)已被證明在食管癌中高表達(dá)[4],而食管癌和胃癌都屬于消化道腫瘤,早期癥狀都不明顯、確診率低[5],具有類似之處。本研究通過研究LncRNA CECR7在胃癌組織中的表達(dá)情況,探討其與胃癌病理特征及患者生存結(jié)局的關(guān)系,以期為胃癌的臨床治療和預(yù)后評(píng)價(jià)提供參考。
1.1 一般資料 收集2014年7月至2015年12月在我院經(jīng)病理確診的胃癌患者胃癌組織89例,對(duì)應(yīng)癌旁組織89例?;颊呔稀段赴┰\斷標(biāo)準(zhǔn)》中的胃癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]。根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟胃癌腫瘤原發(fā)灶淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(tumor node metastasis,TNM)分期系統(tǒng)第7版[7]分析臨床病理特征。TNM分期按Ⅰ期(腫瘤侵犯固有層、黏膜肌層或黏膜下層 )、Ⅱ期(侵犯漿膜下層)、Ⅲ期(侵犯漿膜)、Ⅳ期(侵犯鄰近結(jié)構(gòu))分期,N分期按N0期(0 枚淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)、N1期(1~6枚淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)、N2期(7~15枚淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)、N3期(>15枚淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)分期,M分期按M0期(遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移不存在)、M1期(遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移存在)分期。
1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) (1)均初次確診為胃癌患者;(2)患者無化療治療;(3)患者無其他胃部相關(guān)疾病;(4)患者均知情并自愿簽署同意書。
1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) (1)其他組織合并癌變患者;(2)經(jīng)過免疫治療者;(3)臨床資料不完整者。
1.4 方法 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)法檢測(cè)組織中LncRNA CECR7的表達(dá)水平。RNA提取試劑盒(購自北京索萊寶科技有限公司)提取細(xì)胞總RNA,cDNA試劑盒(購自北京智杰方遠(yuǎn))將其逆轉(zhuǎn)錄成第一鏈cDNA。引物序列(生工生物工程有限公司合成)為:LncRNA CECR7-F:5’-TCAGTGACAGCCCCATGTAA-3’、LncRNA UCA1-R:5’-CAGCAGGA AGAGGTGCTAGAG-3’,內(nèi)參序列GADPH-F:5’-GAAGGTGAAGGTCGGA-3’、GADPH-R:5’-GAAGATGGTGATGGGAT-3’。qRT-PCR儀(購自賽默飛世爾科技有限公司)擴(kuò)增LncRNA UCA1、GADPH序列,反應(yīng)體系為:2×Mix 10 μl,40 ng/μl總蛋白1 μl,上下游引物(10 μmol/L)各0.5 μl,ddH2O 8 μl。qRT-PCR反應(yīng)條件為95℃、30 s;95℃、15 s,62℃、15 s,共40個(gè)循環(huán)。2-ΔΔCt法計(jì)算相對(duì)表達(dá)水平。
1.5 隨訪 所有治療出院后的患者進(jìn)行復(fù)查或電話隨訪,隨訪時(shí)間為出院后36個(gè)月,末次隨訪時(shí)間截止2018年12月31日,死亡患者以死亡時(shí)間作為隨訪截止期。觀察患者隨訪期間腫瘤復(fù)發(fā)情況、生存情況。
2.1 LncRNA CECR7在胃癌組織及癌旁組織中的表達(dá) 胃癌組織中LncRNA CECR7表達(dá)水平顯著高于癌旁組織(P<0.05)。見表1。
組別LncRNA CECR7/GADPH癌旁組織1.00±0.04胃癌組織5.12±1.16t值33.487P值0.000
2.2 胃癌組織中LncRNA CECR7與臨床病理特征的關(guān)系 胃癌患者中LncRNA CECR7表達(dá)水平與TNM分期、腫瘤直徑、脈管浸潤呈相關(guān)性(P<0.05),與患者年齡、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(Node,N)分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(Metastasis,M)分期、Lauren分型、腫瘤分化病理類型無明顯相關(guān)性(P>0.05)。見表2。
2.3 胃癌組織中LncRNA CECR7與胃癌患者預(yù)后的關(guān)系 胃癌組織中LncRNA CECR7低表達(dá)患者術(shù)后良好比例高于高表達(dá)組(P<0.05),低表達(dá)患者術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)率(無死亡)、死亡率均低于高表達(dá)組(P<0.05)。見表3。
2.4 影響胃癌患者不良預(yù)后的COX回歸分析 單因素分析顯示,LncRNA CECR7表達(dá)、TNM分期、N分期、M分期、腫瘤分化程度、有無脈管浸潤均是影響胃癌患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素(P均<0.05)。多因素分析顯示,LncRNA CECR7表達(dá)、TNM分期、腫瘤分化程度是影響胃癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(HR=1.773,95%CI為1.176~2.673;HR=1.754,95%CI為1.435~2.145;HR=1.633,95%CI為0.842~3.167,P均<0.05)。見表4。
2.5 胃癌組織中LncRNA CECR7表達(dá)與患者3年總存活率的關(guān)系 胃癌組織中LncRNA CECR7低表達(dá)的患者3年總存活率明顯高于高表達(dá)組(F=5.785,P<0.05)。見圖1。
胃癌是臨床上十分常見的惡性腫瘤。胃癌家族遺傳史,長期食用熏烤、鹽腌食品,吸煙,幽門螺桿菌感染等都能增加胃癌發(fā)生幾率[8]。胃癌的癌變是一個(gè)涉及多因素、多步驟、多階段發(fā)展的過程,涉及多種基因表達(dá)異常[9]。胃癌對(duì)人類健康影響嚴(yán)重,然而目前尚沒有相關(guān)的預(yù)測(cè)指標(biāo),臨床主要根據(jù)患者癥狀給予對(duì)應(yīng)治療,存在一定的滯后性。
表2 LncRNA CECR7與胃癌臨床病理特征的關(guān)系 例
表3 LncRNA CECR7與胃癌患者預(yù)后的關(guān)系 例
表4 影響胃癌患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素分析結(jié)果
LncRNA是長度>200個(gè)氨基酸、不編碼蛋白質(zhì)的RNA。LncRNA在多種疾病發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮一定的作用,與肝癌、肺癌、胃癌等多種疾病相關(guān)[10]。胃癌中,LncRNA TRERNA1、LncRNA SMARCC2、LncRNA BC005927在胃癌細(xì)胞中高表達(dá)能促進(jìn)胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲,加快胃癌患者疾病進(jìn)程[11-13]。貓眼綜合征是一種基因過表達(dá)或部分染色體重復(fù)使患者眼部缺損、肛門閉鎖、耳部凹陷、心臟和腎臟缺陷等嚴(yán)重缺陷的疾病[14]。其中CECR7是貓眼綜合征中異常表達(dá)基因,CECR7是位于22號(hào)染色體上、長23 501個(gè)堿基,是一種功能尚未明確LncRNA。LncRNA CECR7在正常肝組織中表達(dá)水平相對(duì)較低,在肝癌組織中高表達(dá),與肝癌患者的存活率顯著相關(guān)[15]。另有研究發(fā)現(xiàn),LncRNA CECR7在胰腺癌、食管癌等腫瘤組織中高表達(dá),可促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖、抑制其凋亡,可能作為致癌基因發(fā)揮作用[4,16]。
圖1 LncRNA CECR7低、高表達(dá)生存曲線
目前鮮少有LncRNA CECR7與胃癌的相關(guān)報(bào)道,因此本研究對(duì)LncRNA CECR7在胃癌中的表達(dá)進(jìn)行研究。結(jié)果顯示LncRNA CECR7在胃癌組織中表達(dá)水平顯著高于癌旁組織,且與胃癌患者TNM分期、腫瘤直徑、脈管浸潤密切相關(guān)。已有研究表明,TNM分期可作為評(píng)估胃癌預(yù)后和提供臨床治療最重要的參考標(biāo)準(zhǔn),腫瘤直徑可在一定程度上反應(yīng)腫瘤大小、脈管浸潤可一定程度上反應(yīng)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移情況[17]。LncRNA CECR7高表達(dá)患者術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)率(無死亡)、死亡明顯升高,患者生存率明顯低于LncRNA CECR7低表達(dá)患者,提示LncRNA CECR7的表達(dá)與胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移、病情嚴(yán)重程度密切相關(guān),且能夠作為患者預(yù)后的預(yù)測(cè)指標(biāo)。胃癌組織中LncRNA CECR7低表達(dá)患者3年總存活率明顯高于高表達(dá)組,提示胃癌組織中LncRNA CECR7表達(dá)水平可在一定程度上反映患者存活時(shí)間長短。進(jìn)一步分析發(fā)向,LncRNA CECR7表達(dá)、TNM分期、N分期、M分期、腫瘤分化程度、有無脈管浸潤均是影響胃癌患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素,LncRNA CECR7表達(dá)、TNM分期、腫瘤分化程度是影響胃癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,提示LncRNA CECR7表達(dá)水平可能作為一項(xiàng)判斷胃癌患者預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo),亦是判定胃癌患者臨床結(jié)局的重要依據(jù)。
綜上所述,LncRNA CECR7在胃癌中高表達(dá),與TNM分期、預(yù)后密切關(guān)系,有望成為患者病情診斷及不良預(yù)后預(yù)測(cè)的潛在生物標(biāo)志物,為胃癌臨床治療提供新的策略,但其具體作用機(jī)制有待深入研究。但本研究中并沒有對(duì)患者飲食等影響胃癌的相關(guān)因素進(jìn)行細(xì)分,存在一定的缺陷。