陳艷 劉帆 鞏仔鵬 陳亭亭 陶陶 劉智 王愛(ài)民

摘 要 目的：比較不同粒徑天麻粉中天麻素、巴利森苷A、巴利森苷B、巴利森苷C的腸吸收特征，探討粒徑對(duì)上述成分腸吸收的影響。方法：采用大鼠外翻腸囊模型，以累積吸收量（Q）和吸收速率常數(shù)（Ka）為指標(biāo)，采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定不同劑量（2.5、5、10 g/L）和不同粒徑（細(xì)粉146 μm、極細(xì)粉52 μm、超微粉37 μm）的天麻粉中天麻素、巴利森苷A、巴利森苷B、巴利森苷C在不同腸段（十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸）中的吸收情況。結(jié)果：2.5 g/L天麻極細(xì)粉中天麻素和巴利森苷B的Q、Ka值（全腸段），巴利森苷C的Q值（結(jié)腸）和Ka值（回腸、結(jié)腸）;2.5 g/L天麻超微粉中天麻素的Q、Ka值（全腸段），巴利森苷B的Q、Ka值（十二指腸、空腸、回腸），巴利森苷C的Ka值（結(jié)腸）;5 g/L天麻極細(xì)粉中天麻素的Q值（十二指腸），巴利森苷A和巴利森苷B的Q值（全腸段），巴利森苷C的Q值（十二指腸、空腸）;5 g/L天麻超微粉中天麻素的Q值（十二指腸、空腸、結(jié)腸）和Ka值（全腸段），巴利森苷B的Q值（十二指腸、回腸、結(jié)腸），巴利森苷C的Q值（十二指腸、回腸）;10 g/L天麻極細(xì)粉中巴利森苷B的Q、Ka值（空腸、回腸），巴利森苷C的Q值（空腸、回腸）以及10 g/L天麻超微粉中天麻素的Q值（結(jié)腸）和Ka值（十二指腸），巴利森苷B的Q值（十二指腸、回腸、結(jié)腸）和Ka值（十二指腸、結(jié)腸），巴利森苷C的Q值（十二指腸、回腸）和Ka值（十二指腸）均較同劑量天麻細(xì)粉顯著升高（P<0.05或P<0.01）。2.5 g/L天麻極細(xì)粉中巴利森苷A的Ka值（空腸），巴利森苷C的Q值（十二指腸）;2.5 g/L天麻超微粉中巴利森苷A的Ka值（空腸、回腸），巴利森苷C的Q、Ka值（十二指腸、空腸）;5 g/L天麻極細(xì)粉中天麻素的Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸），巴利森苷A的Ka值（結(jié)腸），巴利森苷B的Ka值（回腸），巴利森苷C的Ka值（空腸、回腸）;5 g/L天麻超微粉中天麻素和巴利森苷C的Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸），巴利森苷A的Q值（空腸、結(jié)腸）和Ka值（結(jié)腸），巴利森苷B的Ka值（空腸、回腸）;10 g/L天麻極細(xì)粉中巴利森苷A的Q、Ka值（回腸）;10 g/L天麻超微粉中巴利森苷A的Q值（十二指腸）和Ka值（空腸），巴利森苷C的Ka值（空腸）均較同劑量天麻細(xì)粉顯著降低（P<0.05或P<0.01）。2.5 g/L天麻細(xì)粉中天麻素的Q值（結(jié)腸），巴利森苷A的Q值（結(jié)腸）和Ka值（回腸、結(jié)腸），巴利森苷B的Q、Ka值（空腸、結(jié)腸），巴利森苷C的Q、Ka值（回腸、結(jié)腸）;2.5 g/L天麻極細(xì)粉中天麻素的Q、Ka值（結(jié)腸），巴利森苷A的Q值（回腸、結(jié)腸）和Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸），巴利森苷C的Ka值（結(jié)腸）;2.5 g/L天麻超微粉中巴利森苷A和巴利森苷C的Q值（結(jié)腸）和Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸），巴利森苷B的Q、Ka值（回腸、結(jié)腸）;5 g/L天麻細(xì)粉中天麻素、巴利森苷A和巴利森苷C的Q、Ka值（結(jié)腸），巴利森苷B的Ka值（結(jié)腸）;5 g/L天麻極細(xì)粉中天麻素和巴利森苷A的Q、Ka值（結(jié)腸），巴利森苷C的Q、Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸）;5 g/L天麻超微粉中天麻素的Q、Ka值（回腸、結(jié)腸），巴利森苷A的Q值（空腸、回腸、結(jié)腸），巴利森苷B的Q、Ka值（空腸、結(jié)腸），巴利森苷C的Q值（空腸、結(jié)腸）和Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸）;10 g/L天麻細(xì)粉中天麻素的Q值（結(jié)腸）以及巴利森苷A、巴利森苷B、巴利森苷C的Q、Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸）;10 g/L天麻極細(xì)粉中天麻素的Q值（結(jié)腸），巴利森苷A和巴利森苷C的Q、Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸），巴利森苷B的Q、Ka值（結(jié)腸）;10 g/L天麻超微粉中天麻素的Q值（結(jié)腸）和Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸），巴利森苷A和巴利森苷C的Q、Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸），巴利森苷B的Q值（空腸、回腸、結(jié)腸）和Ka值（回腸、結(jié)腸）均較同組十二指腸顯著降低（P<0.05）。2.5 g/L天麻極細(xì)粉中天麻素的Q、Ka值（空腸），2.5 g/L天麻超微粉中天麻素的Q值（空腸、回腸）和Ka值（空腸），5 g/L天麻細(xì)粉中天麻素的Q、Ka值（空腸、回腸）;2.5 g/L天麻極細(xì)粉中巴利森苷B的Q值（空腸、回腸）和Ka值（空腸），5 g/L天麻細(xì)粉中巴利森苷B的Ka值（空腸、回腸），10 g/L天麻極細(xì)粉中巴利森苷B的Ka值（回腸）均較同組十二指腸顯著升高（P<0.05）。5 g/L以及10 g/L天麻細(xì)粉、極細(xì)粉、超微粉中天麻素、巴利森苷A、巴利森苷B、巴利森苷C的Q、Ka值（全腸段）均較同腸段同粒徑2.5 g/L天麻粉顯著升高（P<0.05或P<0.01）。結(jié)論：天麻中的4種有效成分在4個(gè)腸段均有吸收，且主要集中于小腸。天麻中的天麻素可能為被動(dòng)吸收，巴利森苷類(lèi)則可能為主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn);粒徑可影響上述4種有效成分的腸吸收特性。

關(guān)鍵詞 天麻;粒徑;外翻腸囊模型;吸收特性;天麻素;巴利森苷類(lèi)

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To compare the absorption characteristics of gastrodin， parishin A， parishin B and parishin C of Gastrodia elata powder， and to explore the effect of particle size on intestinal absorption of above components. METHODS： Based on everted intestinal sac model， using accumulative absorption amount （Q） and absorption rate constant （Ka） as indexes， UPLC-MS/MS method was used to determine the absorption of gastrodin， parishin A， parishin B and parishin C from different doses （2.5， 5， 10 g/L） of G. elata powder with different particle sizes （fine powder 146 μm，superfine powder 52 μm， ultrafine powder 37 μm） in different segments （duodenum， jejunum， ileum and colon）. RESULTS： Q and Ka of gastrodin and parishin B （intestinal segment）， Q （colon） and Ka （ileum and colon） of parishin C in 2.5 g/L G. elata superfine powder; Q and Ka of gastrodin （intestinal segment）， Q and Ka of parishin B （duodenum， jejunum， ileum） and Ka of parishin C （colon） in 2.5 g/L G. elata ultrafine powder; Q of gastrodin （duodenum）， Q of parishin A and parishin B （intestinal segment） and Q of parishin C （duodenum， jejunum） in 5 g/L G. elata superfine powder; Q （duodenum jejunum， colon） and Ka （intestinal segment） of gastrodin， Q of parishin B （duodenum， ileum and colon） and Q of parishin C （duodenum， ileum） in 5 g/L G. elata ultrafine powder; Q and Ka of parishin B （jejunum， ileum）， Q of parishin C （jejunum， ileum） in 10 g/L G. elata superfine powder as well as Q （colon） and Ka （duodenum） of gastrodin， Q （duodenum， ileum， colon） and Ka （duodenum， colon） of parishin B， Q （duodenum， ileum） and Ka （duodenum） of parishin C in 10 g/L G. elata ultrafine powder were all increased significantly， compared with the same dose of G. elata fine powder （P<0.05 or P<0.01）. Ka of parishin A （jejunum） and Q of parishin C （duodenum） in 2.5 g/L G. elata superfine powder; Ka of parishin A （jejunum， ileum）， Q and Ka of parishin C （duodenum， jejunum） in 2.5 g/L G. elata ultrafine powder; Ka of gastrodin （jejunum， ileum and colon）， Ka of parishin A （colon）， Ka of parishin B （ileum） and Ka of parishin C （jejunum， ileum） in 5 g/L G. elata superfine powder; Ka of gastrodin and parishin C （jejunum， ileum and colon）， Q （jejunum， colon） and Ka （colon） of parishin A， Ka of parishin B（jejunum， ileum） in? 5 g/L G. elata ultrafine powder; Q and Ka of parishin A （ileum） in 10 g/L G. elata superfine powder; Q （duodenum） and Ka （jejunum） of parishin A， Ka of parishin C （jejunum） in 10 g/L G. elata ultrafine powder were decreased significantly， compared with? the same dose of G. elata fine powder （P<0.05 or P<0.01）. Q of gastrodin （colon）， Q （colon） and Ka （ileum， colon） of parishin A， Q and Ka of parishin B （jejunum， colon）， Q and Ka of parishin C （ileum， colon） in 2.5 g/L G. elata fine powder; Q and Ka of gastrodin （colon）， Q （ileum， colon） and Ka （jejunum， ileum， colon） of parishin A， Ka of parishin C （colon） in 2.5 g/L G. elata superfine powder; Q（colon） and Ka （jejunum， ileum， colon） of parishin A and C， Q and Ka （ileum， colon） of parishin B in 2.5 g/L G. elata ultrafine powder; Q and Ka of gastrodin， parishin A and C （colon）， Ka of parishin B （colon） in 5 g/L G. elata fine powder; Q and Ka of gastrodin and parishin A （colon）， Q and Ka of parishin C （jejunum， ileum， colon） in 5 g/L G. elata superfine powder; Q and Ka of gastrodin （ileum， colon）， Q of parishin A （jejunum， ileum， colon）， Q and Ka of parishin B （jejunum， colon）， Q （jejunum， colon） and Ka （jejunum， ileum， colon） of parishin C in 5 g/L G. elata ultrafine powder; Q of gastrodin （colon）， Q and Ka of parishin A， B and C （jejunum， ileum， colon） in 10 g/L G. elata fine powder; Q of gastrodin （colon）， Q and Ka of parishin A and C （jejunum， ileum， colon）， Q and Ka of parishin B （colon） in 10 g/L G. elata superfine powder; Q （colon） and Ka （jejunum， ileum， colon） of gastrodin， Q and Ka of parishin A and C （jejunum， ileum， colon）， Q （jejunum， ileum， colon） and Ka （ileum， colon） of parishin B in 10 g/L G. elata ultrafine powder were decreased significantly， compared with duodeum of the same group （P<0.05）. Q and Ka of gastrodin （jejunum） in 2.5 g/L G. elata superfine powder， Q （jejunum， ileum） and Ka （jejunum） of gastrodin in 2.5 g/L G. elata ultrafine powder， Q and Ka of gastrodin （jejunum， ileum） in 5 g/L G. elata fine powder; Q （jejunum， ileum） and Ka （jejunum） of parishin B in 2.5 g/L G. elata superfine powder， Ka of parishin B （jejunum， ileum） in 5 g/L G. elata superfine powder， Ka of parishin B （ileum） in 10 g/L G. elata superfine powder were increased significantly， compared with duodenum of the same group （P<0.05）. Q and Ka of gastrodin， parishin A， B and C （intestinal segment） in 5 and 10 g/L G. elata fine， superfine and ultrafine powder were increased significantly， compared with 2.5 g/L G. elata powder with same particle size in same intestinal segment （P<0.05 or P<0.01）. CONCLUSIONS： The four active components of G. elata are absorbed in four intestinal segments and mainly concentrate in the small intestine. The gastrodin of G. elata may be absorbed passively， while the balisensides may be transported actively. The particle size can affect the intestinal absorption characteristics of the four active components.

KEYWORDS? ?Gastrodia elata; Particle size; Everted intestinal sac model; Absorption characteristics; Gastrodin; Balisensides

天麻為蘭科植物天麻（Gastrodia elata Bl.）的干燥塊莖[1]，在《神農(nóng)本草經(jīng)》中被列為草本上品，是我國(guó)傳統(tǒng)名貴中藥材。天麻藥用歷史悠久，主產(chǎn)于我國(guó)貴州、云南、湖北等地，是中醫(yī)治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病的常用藥材，主要用于頭痛眩暈、肢體麻木、癲癇等癥的臨床治療[2-3]。

超微粉[粒徑范圍是1～75 μm，粒度分布中心（D50）為10～15 μm]是經(jīng)超微粉碎技術(shù)將原料藥加工所得的微米甚至納米級(jí)微粉[4]。超微粉碎技術(shù)是近年不斷發(fā)展的一項(xiàng)新興技術(shù)，因具有原材料用量少、藥物溶出度高等優(yōu)點(diǎn)，其在中藥領(lǐng)域具有特有的優(yōu)勢(shì)和廣闊的應(yīng)用前景[5]。藥用有效成分主要存在于細(xì)胞內(nèi)，完整的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜對(duì)藥材有效成分的釋放會(huì)造成阻礙，而應(yīng)用超微粉碎技術(shù)將細(xì)胞打破，可使細(xì)胞壁/膜與胞內(nèi)成分分離，從而使得有效成分可直接接觸溶媒而溶出，進(jìn)而達(dá)到用藥劑量更小、生物利用度更高、藥物作用發(fā)揮更迅速、藥效更強(qiáng)的目的[6-7]。本課題組建立了同時(shí)測(cè)定天麻中天麻素、巴利森苷A、巴利森苷B、巴利森苷C、對(duì)羥基苯甲醛、對(duì)羥基苯甲醇等多指標(biāo)含量的高效液相色譜法[8-10]，并對(duì)天麻普通粉及超微粉進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示，天麻超微粉對(duì)腦缺血再灌注損傷模型大鼠的保護(hù)作用較普通粉（100目，粒徑：150 μm）更加明顯[11]。天麻在腦疾病的治療中具有獨(dú)特且顯著的療效[12-15]，目前研究者普遍關(guān)注的是天麻素及其相關(guān)制劑[16]，而有關(guān)天麻中多種活性成分的體內(nèi)外腸吸收特征研究則相對(duì)薄弱。鑒于此，本研究在前期實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，建立了測(cè)定天麻素、巴利森苷A、巴利森苷B、巴利森苷C等4種指標(biāo)性成分質(zhì)量濃度的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS），并利用離體外翻腸囊模型考察了不同粒徑天麻粉中上述4種成分的體外腸吸收特征，初步探討了粒徑對(duì)天麻成分腸吸收的影響，以期為超微粉碎技術(shù)在天麻制劑研發(fā)中的應(yīng)用以及相關(guān)新制劑的開(kāi)發(fā)提供參考。

1 材料

1.1 儀器

Ultimate 3000型超高效液相色譜-TSQ Quantum型三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜，配有電噴霧離子源（ESI）、LC Qua 4.0.27.42數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司）;EL204型電子天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司];DK-92-ⅡA型恒溫水浴鍋（天津市泰斯特儀器有限公司）;VX-Ⅲ型渦旋振蕩器[藤錦（北京）醫(yī)藥科技有限公司];SC082767型超純水機(jī)（四川沃特爾水處理設(shè)備有限公司）;KQ-250E型超聲機(jī)（昆山市超聲儀器有限公司）;NA-5L型氮?dú)饪諝庖惑w機(jī)（北京中興匯利科技發(fā)展有限公司）。

1.2 藥材與試劑

天麻細(xì)粉（100目，粒徑：146 μm，D50：54.33 μm，批號(hào)：2017030601）、天麻極細(xì)粉（200目，粒徑：52 μm，D50：18.44 μm，批號(hào)：2017030602）、天麻超微粉（400目，粒徑：37 μm，D50：13.44 μm，批號(hào)：2017030604）均購(gòu)自貴州廣濟(jì)堂藥業(yè)有限公司，經(jīng)貴州醫(yī)科大學(xué)生藥教研室龍德慶副教授鑒定為真品。

天麻素對(duì)照品（北京百靈威化學(xué)技術(shù)有限公司，批號(hào)：62499-27-8，純度：100%）;巴利森苷A對(duì)照品（批號(hào)：62499-28-9，純度：98%）、巴利森苷B對(duì)照品（批號(hào)：174972-79-3，純度：98%）、巴利森苷C對(duì)照品（批號(hào)：174972-80-6，純度：96%）均購(gòu)自成都明睿科技有限公司;葛根素對(duì)照品（內(nèi)標(biāo)，四川維克奇生物科技有限公司，批號(hào)：wkq17110604，純度：98%）;乙腈為色譜純，正丁醇等其余試劑均為分析純，水為蒸餾水。

1.3 動(dòng)物

SPF級(jí)健康SD大鼠，雄性，體質(zhì)量220～250 g，購(gòu)自長(zhǎng)沙市天勤生物技術(shù)有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)合格證號(hào)：SCXK（湘）2014-0011。本研究經(jīng)貴州醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)與同意（批準(zhǔn)號(hào)：1702077）。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 Tyrode緩沖液 稱(chēng)取氯化鈉8.0 g、碳酸氫鈉1.0 g、氯化鉀0.2 g、氯化鎂0.1 g、磷酸二氫鈉0.05 g、氯化鈣0.2 g、葡萄糖1.0 g，加少量水使其溶解（其中氯化鈣需單獨(dú)溶解后再逐滴加入，葡萄糖需臨用前加入），然后用水定容至1 L，即得pH為7.4的Tyrode緩沖液，備用。

2.1.2 不同粒徑天麻粉供試液 分別稱(chēng)取天麻細(xì)粉、極細(xì)粉、超微粉適量，加入Tyrode緩沖液超聲（功率：250 W，頻率：80 Hz，下同）處理30 min，使其均勻分散以形成混懸液，即得質(zhì)量濃度均分別為2.5、5、10 g/L（以生藥量計(jì)，下同）的不同粒徑天麻粉供試液，備用。

2.1.3 混合對(duì)照品溶液 分別精密稱(chēng)取天麻素、巴利森苷A、巴利森苷B、巴利森苷C對(duì)照品適量，加甲醇溶解制得天麻素（1.052 g/L）、巴利森苷A（1.001 g/L）、巴利森苷B（0.994 g/L）、巴利森苷C（0.804 g/L）單一貯備液。分別精密量取上述單一貯備液各適量，置于同一量瓶，于37 ℃下以氮?dú)饬鞔蹈?，殘?jiān)肨yrode緩沖液溶解并稀釋至所需濃度，即得系列混合對(duì)照品溶液。上述溶液均置于-20 ℃冰箱保存，備用。

2.1.4 內(nèi)標(biāo)溶液 精密稱(chēng)取葛根素對(duì)照品適量，用甲醇溶解并定容至10 mL量瓶中，得質(zhì)量濃度為1.054 g/L的內(nèi)標(biāo)貯備液。取上述內(nèi)標(biāo)貯備液適量至50 mL量瓶中，用甲醇定容，即得質(zhì)量濃度為20 μg/mL的內(nèi)標(biāo)溶液，置于-20 ℃冰箱保存，備用。

按如下公式計(jì)算藥物累積吸收量（Q，?g）和吸收速率常數(shù)[Ka，?g/（h·cm2）][24-26]：Q=0.2cn×[V平衡V取樣] +0.2×[∑][i=1][n-1][n-1]ci式中，cn指第n個(gè)時(shí)間點(diǎn)取樣樣品液的實(shí)測(cè)質(zhì)量濃度，ci指第i次取樣測(cè)得的腸內(nèi)藥物濃度，V平衡指平衡前腸管中加入Tyrode緩沖液的體積，V取樣指每次取樣的體積。將Q與t進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得相應(yīng)的斜率（L），斜率除以A即得Ka。采用SPSS 22.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料均以x±s表示，組間比較采用單因素方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見(jiàn)表5～表8。

由表5可見(jiàn)，與同劑量天麻細(xì)粉比較，2.5 g/L天麻極細(xì)粉和超微粉中天麻素的Q、Ka值（全腸段），5 g/L天麻極細(xì)粉的Q值（十二指腸），5 g/L天麻超微粉的Q值（十二指腸、空腸、結(jié)腸）和Ka值（全腸段），10 g/L天麻超微粉的Q值（結(jié)腸）和Ka值（十二指腸）均顯著升高;而5 g/L天麻極細(xì)粉和超微粉的Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸）均顯著降低（P<0.05或P<0.01）。與同組十二指腸比較，2.5 g/L天麻細(xì)粉的Q值（結(jié)腸），2.5 g/L天麻極細(xì)粉的Q、Ka值（結(jié)腸），5 g/L天麻細(xì)粉、極細(xì)粉的Q、Ka值（結(jié)腸），5 g/L天麻超微粉的Q、Ka值（結(jié)腸、回腸），10 g/L天麻細(xì)粉、極細(xì)粉和超微粉的Q值（結(jié)腸），10 g/L天麻超微粉的Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸）均顯著降低;而2.5 g/L天麻極細(xì)粉和超微粉的Q、Ka值（空腸），2.5 g/L天麻超微粉的Q值（回腸），5 g/L天麻細(xì)粉的Q、Ka值（空腸、回腸）均顯著升高（P<0.05）。與同腸段同粒徑2.5 g/L天麻粉比較，5 g/L以及10 g/L天麻細(xì)粉、天麻極細(xì)粉、天麻超微粉的Q、Ka值（全腸段）均顯著升高（P<0.05或P<0.01）。

由表6可見(jiàn)，與同劑量天麻細(xì)粉比較，2.5 g/L天麻極細(xì)粉中巴利森苷A的Ka值（空腸），2.5 g/L天麻超微粉的Ka值（空腸、回腸），5 g/L天麻極細(xì)粉的Ka值（結(jié)腸），5 g/L天麻超微粉的Q值（空腸、結(jié)腸）和Ka值（結(jié)腸），10 g/L天麻極細(xì)粉的Q、Ka值（回腸），10 g/L天麻超微粉的Q值（十二指腸）和Ka值（空腸）均顯著降低（P<0.05）;而5 g/L天麻極細(xì)粉的Q值（全腸段）均顯著升高（P<0.05）。與同組十二指腸比較，2.5 g/L天麻細(xì)粉的Q值（結(jié)腸）和Ka值（回腸、結(jié)腸），2.5 g/L天麻極細(xì)粉的Q值（回腸、結(jié)腸）和Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸），2.5 g/L天麻超微粉的Q值（結(jié)腸）和Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸），5 g/L天麻細(xì)粉、極細(xì)粉的Q、Ka值（結(jié)腸），5 g/L天麻超微粉的Q值（空腸、回腸、結(jié)腸），10 g/L天麻細(xì)粉、極細(xì)粉和超微粉的Q、Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸）均顯著降低（P<0.05）。與同腸段同粒徑2.5 g/L天麻粉比較，5 g/L以及10 g/L天麻細(xì)粉、天麻極細(xì)粉、天麻超微粉的Q、Ka值（全腸段）均顯著升高（P<0.05或P<0.01）。

由表7可見(jiàn)，與同劑量天麻細(xì)粉比較，2.5 g/L天麻極細(xì)粉中巴利森苷B的Q、Ka值（全腸段），2.5 g/L天麻超微粉的Q、Ka值（十二指腸、空腸、回腸），5 g/L天麻極細(xì)粉的Q值（全腸段），5 g/L天麻超微粉的Q值（十二指腸、回腸、結(jié)腸），10 g/L天麻極細(xì)粉的Q、Ka值（空腸、回腸），10 g/L天麻超微粉的Q值（十二指腸、回腸、結(jié)腸）和Ka值（十二指腸、結(jié)腸）均顯著升高（P<0.05）;而5 g/L天麻極細(xì)粉的Ka值（回腸）以及5 g/L天麻超微粉Ka值（空腸、回腸）均顯著降低（P<0.05或P<0.01）。與同組十二指腸比較，2.5 g/L天麻細(xì)粉的Q、Ka值（空腸、結(jié)腸），2.5 g/L天麻超微粉的Q、Ka值（回腸、結(jié)腸），5 g/L天麻細(xì)粉的Ka值（結(jié)腸），5 g/L天麻超微粉的Q、Ka值（空腸、結(jié)腸），10 g/L天麻細(xì)粉的Q、Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸）、10 g/L天麻極細(xì)粉的Q、Ka值（結(jié)腸），10 g/L天麻超微粉的Q值（空腸、回腸、結(jié)腸）和Ka值（回腸、結(jié)腸）均顯著降低（P<0.05）;而2.5 g/L天麻極細(xì)粉的Q值（空腸、回腸）和Ka值（空腸），5 g/L天麻細(xì)粉的Ka值（空腸、回腸），10 g/L天麻極細(xì)粉的Ka值（回腸）均顯著升高（P<0.05）。與同腸段同粒徑2.5 g/L天麻粉比較，5 g/L以及10 g/L天麻細(xì)粉、天麻極細(xì)粉、天麻超微粉的Q、Ka值（全腸段）均顯著升高（P<0.05或P<0.01）。

由表8可見(jiàn)，與同劑量天麻細(xì)粉比較，2.5 g/L天麻極細(xì)粉中巴利森苷C的Q值（結(jié)腸）和Ka值（回腸、結(jié)腸），2.5 g/L天麻超微粉的Ka值（結(jié)腸），5 g/L天麻極細(xì)粉的Q值（十二指腸、空腸），5 g/L天麻超微粉的Q值（十二指腸、回腸），10 g/L天麻極細(xì)粉的Q值（空腸、回腸），10 g/L天麻超微粉的Q值（十二指腸、回腸）和Ka值（十二指腸）均顯著升高（P<0.05）;而2.5 g/L天麻極細(xì)粉的Q值（十二指腸），2.5 g/L天麻超微粉的Q、Ka值（十二指腸、空腸），5 g/L天麻極細(xì)粉的Ka值（空腸、回腸），5 g/L天麻超微粉的Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸），10 g/L天麻超微粉的Ka值（空腸）均顯著降低（P<0.05）。與同組十二指腸比較，2.5 g/L天麻細(xì)粉的Q、Ka值（回腸、結(jié)腸），2.5 g/L天麻極細(xì)粉的Ka值（結(jié)腸），2.5 g/L天麻超微粉Q值（結(jié)腸）和Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸），5 g/L天麻細(xì)粉的Q、Ka值（結(jié)腸），5 g/L天麻極細(xì)粉的Q、Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸）、5 g/L天麻超微粉的Q值（空腸、結(jié)腸）和Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸），10 g/L天麻細(xì)粉、極細(xì)粉和超微粉的Q、Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸）均顯著降低（P<0.05）。與同腸段同粒徑2.5 g/L天麻粉比較，5 g/L以及10 g/L天麻細(xì)粉、天麻極細(xì)粉、天麻超微粉的Q、Ka值（全腸段）均顯著升高（P<0.05或P<0.01）。

3 討論

隨著時(shí)代的進(jìn)步和社會(huì)的發(fā)展，人們對(duì)健康的關(guān)注度越來(lái)越高，對(duì)中藥應(yīng)用及其質(zhì)量要求也越來(lái)越嚴(yán)格，傳統(tǒng)的中藥加工方法已不能滿(mǎn)足現(xiàn)代民眾的用藥需求[27]。近年來(lái)新興的中藥超微粉碎技術(shù)可將藥材微粉化，加快有效成分的溶出，從而提高中藥材的利用率和生物利用度，以保證藥效的充分發(fā)揮，并有助于藥材資源的節(jié)約。該技術(shù)不僅對(duì)中藥資源保護(hù)具有重要意義，而且在制劑改良及新給藥途徑開(kāi)發(fā)等方面也具有廣闊的應(yīng)用前景[28-29]。

本研究首先建立了同時(shí)測(cè)定天麻素、巴利森苷A、巴利森苷B、巴利森苷C含量的UPLC-MS/MS法。在色譜條件優(yōu)化過(guò)程中，本研究考察了流動(dòng)相中不同濃度甲酸對(duì)待測(cè)成分定量分析的影響。結(jié)果顯示，在水相和有機(jī)相中加入0.1%甲酸后，各待測(cè)成分峰形對(duì)稱(chēng)、分離度良好，故最終確定了“2.2”項(xiàng)的色譜流動(dòng)相。在定量離子對(duì)及其質(zhì)譜條件的優(yōu)化過(guò)程中，本研究選擇了4種待測(cè)成分的母離子和子離子，并對(duì)其碰撞電壓和射頻電壓進(jìn)行了逐一優(yōu)化，最終確立了“2.3”項(xiàng)的質(zhì)譜條件。方法學(xué)考察結(jié)果顯示，所建立的UPLC-MS/MS法操作簡(jiǎn)便、快速，準(zhǔn)確度、靈敏度高。

中藥化學(xué)成分復(fù)雜，口服給藥是目前最常見(jiàn)的給藥途徑之一，且絕大多數(shù)藥物口服后在小腸部位吸收[30]。通過(guò)對(duì)藥物的腸道吸收特性進(jìn)行研究，可以獲得其有效吸收部位、吸收影響因素等信息[31]。外翻腸囊法是一種在體外模擬腸道環(huán)境并檢測(cè)藥物吸收情況的常見(jiàn)方法，該法不僅具有操作簡(jiǎn)單、快速、成本低的特點(diǎn)，同時(shí)還能用以比較藥物在不同腸段的吸收情況，并獲知其轉(zhuǎn)運(yùn)特征[32-33]。本研究通過(guò)預(yù)試驗(yàn)確定不同粒徑天麻粉供試液的劑量，以體現(xiàn)天麻素等成分在有效、安全的劑量下的腸吸收情況;此外，本研究將腸循環(huán)時(shí)間控制在120 min，以確保體外腸囊的正常生理活性。

腸吸收情況檢測(cè)結(jié)果顯示，2.5 g/L天麻極細(xì)粉中天麻素和巴利森苷B的Q、Ka值（全腸段），巴利森苷C的Q值（結(jié)腸）和Ka值（回腸、結(jié)腸）;2.5 g/L天麻超微粉中天麻素的Q、Ka值（全腸段），巴利森苷B的Q、Ka值（十二指腸、空腸、回腸），巴利森苷C的Ka值（結(jié)腸）;5 g/L天麻極細(xì)粉中天麻素的Q值（十二指腸），巴利森苷A和巴利森苷B的Q值（全腸段），巴利森苷C的Q值（十二指腸、空腸）;5 g/L天麻超微粉中天麻素的Q值（十二指腸、空腸、結(jié)腸）和Ka值（全腸段），巴利森苷B的Q值（十二指腸、回腸、結(jié)腸），巴利森苷C的Q值（十二指腸、回腸）;10 g/L天麻極細(xì)粉中巴利森苷B的Q、Ka值（空腸、回腸），巴利森苷C的Q值（空腸、回腸）以及10 g/L天麻超微粉中天麻素的Q值（結(jié)腸）和Ka值（十二指腸），巴利森苷B的Q值（十二指腸、回腸、結(jié)腸）和Ka值（十二指腸、結(jié)腸），巴利森苷C的Q值（十二指腸、回腸）和Ka值（十二指腸）均較同劑量天麻細(xì)粉顯著升高（P<0.05或P<0.01）。2.5 g/L天麻極細(xì)粉中巴利森苷A的Ka值（空腸），巴利森苷C的Q值（十二指腸）;2.5 g/L天麻超微粉中巴利森苷A的Ka值（空腸、回腸），巴利森苷C的Q、Ka值（十二指腸、空腸）;5 g/L天麻極細(xì)粉中天麻素的Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸），巴利森苷A的Ka值（結(jié)腸），巴利森苷B的Ka值（回腸），巴利森苷C的Ka值（空腸、回腸）;5 g/L天麻超微粉中天麻素和巴利森苷C的Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸），巴利森苷A的Q值（空腸、結(jié)腸）和Ka值（結(jié)腸），巴利森苷B的Ka值（空腸、回腸）;10 g/L天麻極細(xì)粉中巴利森苷A的Q、Ka值（回腸）;10 g/L天麻超微粉中巴利森苷A的Q值（十二指腸）和Ka值（空腸），巴利森苷C的Ka值（空腸）均較同劑量天麻細(xì)粉顯著降低（P<0.05或P<0.01）。2.5 g/L天麻細(xì)粉中天麻素的Q值（結(jié)腸），巴利森苷A的Q值（結(jié)腸）和Ka值（回腸、結(jié)腸），巴利森苷B的Q、Ka值（空腸、結(jié)腸），巴利森苷C的Q、Ka值（回腸、結(jié)腸）;2.5 g/L天麻極細(xì)粉中天麻素的Q、Ka值（結(jié)腸），巴利森苷A的Q值（回腸、結(jié)腸）和Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸），巴利森苷C的Ka值（結(jié)腸）;2.5 g/L天麻超微粉中巴利森苷A和巴利森苷C的Q值（結(jié)腸）和Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸），巴利森苷B的Q、Ka值（回腸、結(jié)腸）;5 g/L天麻細(xì)粉中天麻素、巴利森苷A和巴利森苷C的Q、Ka值（結(jié)腸），巴利森苷B的Ka值（結(jié)腸）;5 g/L天麻極細(xì)粉中天麻素和巴利森苷A的Q、Ka值（結(jié)腸），巴利森苷C的Q、Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸）;5 g/L天麻超微粉中天麻素的Q、Ka值（回腸、結(jié)腸），巴利森苷A的Q值（空腸、回腸、結(jié)腸），巴利森苷B的Q、Ka值（空腸、結(jié)腸），巴利森苷C的Q值（空腸、結(jié)腸）和Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸）;10 g/L天麻細(xì)粉中天麻素的Q值（結(jié)腸）以及巴利森苷A、巴利森苷B、巴利森苷C的Q、Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸）;10 g/L天麻極細(xì)粉中天麻素的Q值（結(jié)腸），巴利森苷A和巴利森苷C的Q、Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸），巴利森苷B的Q、Ka值（結(jié)腸）;10 g/L天麻超微粉中天麻素的Q值（結(jié)腸）和Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸），巴利森苷A和巴利森苷C的Q、Ka值（空腸、回腸、結(jié)腸），巴利森苷B的Q值（空腸、回腸、結(jié)腸）和Ka值（回腸、結(jié)腸）均較同組十二指腸顯著降低（P<0.05）。2.5 g/L天麻極細(xì)粉中天麻素的Q、Ka值（空腸），2.5 g/L天麻超微粉中天麻素的Q值（空腸、回腸）和Ka值（空腸），5 g/L天麻細(xì)粉中天麻素的Q、Ka值（空腸、回腸）以及2.5 g/L天麻極細(xì)粉中巴利森苷B的Q值（空腸、回腸）和Ka值（空腸），5 g/L天麻細(xì)粉中巴利森苷B的Ka值（空腸、回腸），10 g/L天麻極細(xì)粉中巴利森苷B的Ka值（回腸）均較同組十二指腸顯著升高（P<0.05）。5 g/L以及10 g/L天麻細(xì)粉、極細(xì)粉、超微粉中天麻素、巴利森苷A、巴利森苷B、巴利森苷C的Q、Ka值（全腸段）均較同腸段同粒徑2.5 g/L天麻粉顯著升高（P<0.05或P<0.01）。

由上述結(jié)果可見(jiàn)，天麻素在各腸段的Ka值有隨劑量增加而升高的趨勢(shì)，且同粒徑不同劑量組別之間的差異較大，提示該化合物在腸道中的吸收可能為被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)[20]，主要吸收部位為小腸，而結(jié)腸吸收最少。巴利森苷類(lèi)化合物在不同腸段的吸收亦存在差異，其在空腸、回腸中的Ka值雖有隨劑量的增加而升高的趨勢(shì)，但5、10 g/L劑量組之間的差異不大，提示該類(lèi)化合物在空腸、回腸可能為主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)[25]。同時(shí)，在不同劑量下，小腸對(duì)天麻超微粉中天麻素的吸收普遍多于天麻細(xì)粉和極細(xì)粉，而超微粉中巴利森苷類(lèi)化合物在空腸段的吸收卻有高有低，提示超微粉碎技術(shù)雖可促進(jìn)中藥材中某些成分的吸收，但并非針對(duì)所有成分，這可能由腸道中酶系和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白對(duì)代謝物的影響存在差異所致[34]。

綜上所述，本研究建立了同時(shí)測(cè)定腸液樣品中4個(gè)活性成分含量的UPLC-MS/MS法，該法專(zhuān)屬性強(qiáng)、靈敏度及分析效率高、操作簡(jiǎn)便快速，可用于大量生物樣品的定量分析。天麻中的4種有效成分在4個(gè)腸段均有吸收，且主要集中于小腸。天麻中的天麻素可能為被動(dòng)吸收，巴利森苷類(lèi)可能為主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)，天麻粉碎粒徑可影響上述4種有效成分的腸吸收特性。本研究初步探討了不同粒徑天麻粉中4種活性成分在離體腸道中的吸收特性及差異，但外翻腸囊模型屬體外模型，無(wú)法真實(shí)模擬體內(nèi)環(huán)境以及腸液、膽汁等因素對(duì)藥物吸收的影響，且隨著試驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng)，腸段活性也會(huì)逐漸降低[27]。因此在后續(xù)研究中，本課題組將會(huì)繼續(xù)開(kāi)展不同粒徑超微粉的腸灌流以及體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究，以進(jìn)一步探討粒徑對(duì)天麻有效成分體內(nèi)吸收特性的影響。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] WU J，WU B，TANG C，et al. Analytical techniques and pharmacokinetics of gastrodia elata Blume and its constituents[J]. Molecules，2017，22（7）：1137-1149.

[ 2 ] ZHAN HD，ZHOU HY，SHI YP，et al. The rhizome of Ga- strodia elata Blume：an ethnopharmacological review[J]. J Ethnopharmacol，2016，189（11）：361-385.

[ 3 ] LI Z，WANG Y，OUYANG H，et al. A novel dereplication strategy for the identification of two new trace compounds in the extract of Gastrodia elata using UHPLC/Q-TOF- MS/MS[J]. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci，2015. DOI：10.1016/j.jchromb.2015.02.020.

[ 4 ] 羅剛，陳立庭，周晶.超微粉碎技術(shù)在中藥研究中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代藥物與臨床，2011，26（2）：108-112.

[ 5 ] 孫強(qiáng)，何應(yīng).當(dāng)歸超微粉的藥劑學(xué)研究[J].中國(guó)藥房，2007，18（15）：1141-1143.

[ 6 ] 吳艷萍，李渠籌，劉強(qiáng).延胡索細(xì)粉與超微粉溶出度比較[J].中國(guó)藥房，2010，21（19）：1795-1797.

[ 7 ] 張福君，瞿晶田，王強(qiáng).超微粉碎技術(shù)對(duì)靈芝中三萜類(lèi)成分溶出的影響[J].中國(guó)藥房，2018，29（5）：599-602.

[ 8 ] 劉智，王愛(ài)民，許祖超，等.全天麻膠囊特征指紋圖譜研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（15）：86-88.

[ 9 ] 劉智，王愛(ài)民，許祖超，等.一測(cè)多評(píng)技術(shù)在天麻藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)中的應(yīng)用[J].中國(guó)藥房，2012，23（47）：4469-4471.

[10] 劉帆，陳亭亭，陳艷，等.不同粒徑天麻粉中有效成分的體外溶出度比較[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2019，25（9）：124-129.

[11] 陳亭亭，劉帆，陳艷，等.不同粒徑天麻超微粉對(duì)腦缺血再灌注腦損傷大鼠的保護(hù)作用[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2019，25（8）：71-76.

[12] 劉順金，李娟娟.天麻素在腦損傷治療中的研究進(jìn)展[J].神經(jīng)解剖學(xué)雜志，2016，32（6）：781-784.

[13] 陳國(guó)寧，陳學(xué)武，蘇乙花，等.天麻素對(duì)腦轉(zhuǎn)移瘤患者頭痛頭暈癥狀的效果[J].廣東醫(yī)學(xué)，2017，38（17）：2713- 2714、2717.

[14] 周曉楠，宋雪蘭，李艷，等.對(duì)羥基苯甲醛對(duì)腦缺血/再灌注損傷的保護(hù)作用研究[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2017，33（12）：1729-1735.

[15] 張亭，李偉超.天麻素膠囊聯(lián)合洛美利嗪治療血管神經(jīng)性偏頭痛的臨床研究[J].現(xiàn)代藥物與臨床，2019，34（2）：327-331.

[16] 李諾利，龐邦斌，銀勝高，等.天麻中成藥制劑臨床研究概況[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2015，21（19）：226-229.

[17] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：四部[S]. 2015年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：363-368.

[18] ZHAI L，SHI J，WU X，et al. Ex vivo and in situ evaluation of ‘dispelling-wind Chinese medicine herb：drugs on intestinal absorption of chlorogenic acid[J]. Phytother Res，2015，29（12）：1974-1981.

[19] HE R，XU Y，PENG J，et al. The effects of 18β-glycyrrhetinic acid and glycyrrhizin on intestinal lesorption of paeoniflorin using the everted rat gut sac model[J]. J Nat Med，2017，71（1）：198-207.

[20] 譚建玲，邢翔飛，陳進(jìn)兵，等.外翻腸囊法研究燈盞花素小腸吸收的影響因素[J].中國(guó)藥房，2015，26（13）：1763- 1766.

[21] 趙國(guó)巍，陳緒龍，梁新麗，等.三七皂苷長(zhǎng)循環(huán)納米粒的腸吸收及藥動(dòng)學(xué)研究[J].中國(guó)藥房，2014，25（43）：4052- 4055.

[22] 黃慧輝，張小燕，沈娟，等.菝葜抗炎有效部位群在大鼠腸外翻試驗(yàn)中的吸收特性考察[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2016，22（8）：96-99.

[23] 秦海蛟，柳夢(mèng)婷，唐力英，等.腸外翻囊法研究淫羊藿腸吸收成分及其吸收特征[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2015，21（22）：163-168.

[24] 侯靖宇.羊耳菊活性部位在腸道的吸收與代謝特征研究[D].貴陽(yáng)：貴州醫(yī)科大學(xué)，2017.

[25] 鞏仔鵬，李梅，侯靖宇，等.外翻腸囊法研究羊耳菊提取物在大鼠腸內(nèi)的吸收[J].中國(guó)中藥雜志，2018，43（3）：609- 617.

[26] 董莉，程鵬程，唐麗，等.離體外翻腸囊法研究葒草花提取物中9個(gè)成分的腸吸收特性[J].中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2014，45（9）：858-862.

[27] 錢(qián)珊珊，桂雙英，楊滿(mǎn)琴，等.中藥超微粉碎技術(shù)的研究進(jìn)展[J].陜西中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2019，42（3）：136-140.

[28] 楊紅葉.超微粉碎技術(shù)的研究應(yīng)用現(xiàn)狀[J].食品安全導(dǎo)刊，2019（12）：149.

[29] 李婧琳，王媚，史亞軍，等.超微粉碎技術(shù)在中藥制劑中的應(yīng)用分析[J].現(xiàn)代中醫(yī)藥，2018，38（5）：121-123、130.

[30] 何帥，藺明煊，姜亦南，等.中藥成分腸吸收模型研究進(jìn)展與思考[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2018，46（3）：121-124.

[31] VOLPE DA. Application of method suitability for drug permeability classification[J]. AAPS J，2010，12（4）：670- 678.

[32] YUE C，WANG W，TIAN WL，et al. Lipopolysaccharide-induced failure of the gut barrier is sitespecic and inhibitable by growth hormone[J]. Inflamm Res，2013，62（4）：407-415.

[33] 沈蕓，徐蓓蕾，楊新宇，等.三種研究藥物腸道吸收機(jī)制的方法[J].哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2016，32（1）：11-13、17.

[34] 鞏仔鵬，陳穎，張瑞杰，等.疾病狀態(tài)下的中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究進(jìn)展[J].中國(guó)中藥雜志，2015，40（2）：169-173.

（收稿日期：2019-07-01 修回日期：2019-12-12）

（編輯：張?jiān)拢?/p>