甘紹印 王忠民 陳志軍 朱德奇李賓趙冬 李云霞 臧丹 尚杰

·臨床論著·

JAM-A和b1-integrin在食管癌中的表達(dá)及臨床意義#

甘紹印*1王忠民△1陳志軍1朱德奇1李賓1趙冬2李云霞2臧丹3尚杰3

（1. 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院胸外科一病區(qū)，河南 新鄉(xiāng) 453000；2. 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科二病區(qū)，河南 新鄉(xiāng) 453000；3. 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院病理科，河南 新鄉(xiāng) 453000）

：探討JAM-A和b1-integrin在食管癌中表達(dá)及其臨床意義。選取本院自2012年2月至2013年4月確診的120例食管癌患者，以免疫組化法檢測腫瘤組織及癌旁組織中JAM-A和b1-integrin的表達(dá)，進(jìn)一步隨訪患者術(shù)后無疾病生存期，應(yīng)用Cox模型多因素分析兩種蛋白對食管鱗癌的預(yù)后意義。JAM-A和b1-integrin蛋白在食管癌組織中高表達(dá)，與癌旁組織對比其表達(dá)存在顯著性差異（P＜0.05），相關(guān)性分析顯示：JAM-A蛋白與b1-integrin蛋白表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.476，P＜0.05）。Cox模型風(fēng)險分析顯示JAM-A與b1-integrin蛋白高表達(dá)可能提示食管鱗癌預(yù)后較差（P＜0.05），且JAM-A是其獨立危險因素。JAM-A與b1-integrin的高表達(dá)可能與食管癌不良預(yù)后存在密切關(guān)系。

食管鱗癌；JAM-A；b1-integrin

管管癌是一種全世界范圍的消化道惡性腫瘤，尤其在我國河南地區(qū)、廣州潮汕地區(qū)及福建等地為高發(fā)區(qū)[1]，其患病率及致死率一直在惡性腫瘤中居高。目前治療食管癌的主要方法包括手術(shù)治療、放化療。研究表明，即使同一分期的食管癌患者，其臨床預(yù)后仍存在較大的差異[2]。因此，除了臨床病理分期外，我們目前仍急需一些其他指標(biāo)來評估食管癌預(yù)后及放化療方案。

連接粘附分子A（Junctional adhesion molecule A，JAM-A）作為細(xì)胞免疫球蛋白家族中一員，是一種不依賴鈣離子的細(xì)胞粘附分子[3]，在惡性腫瘤發(fā)生、侵襲及轉(zhuǎn)移方面具有重要意義。研究表明，JAM-A通過抑制Akt信號通路降低b-catenin表達(dá)，從而抑制腫瘤細(xì)胞增殖；同時又可通過調(diào)節(jié)b1-integrin和GTP Rap1活性促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移。本文擬應(yīng)用免疫組化方法研究JAM-A與b1-integrin在食管鱗癌中的表達(dá)，分析上述蛋白與臨床病理分期、術(shù)后轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院自2012年2月至2013年4月進(jìn)行食管癌切除術(shù)，經(jīng)術(shù)后病理標(biāo)本確診為食管癌的120例臨床資料，進(jìn)行回顧性分析。其中食管鱗癌98例，腺癌22例，男性76例（63.3%），女性44例（36.7%），年齡35~79歲（平均年齡59.35歲），同時選取癌旁組織（距離腫瘤邊緣3 cm）作為對照組。術(shù)后隨訪進(jìn)展105例，無進(jìn)展15例，無疾病生存期（Disease free survival, DFS）為4.8~61.30 m，中位DFS為30.26 m。

1.2 方法

1.2.1 隨訪方法

以手術(shù)當(dāng)日為起點，采用電話隨訪2月1次，截止日期為2018年6月25日。

1.2.2 實驗方法

將手術(shù)切除標(biāo)本固定，石蠟包埋后常規(guī)切片及并染色。采用鼠抗人JAM-A蛋白單克隆抗體試劑盒（購自北京博爾邁生物技術(shù)有限公司），及鼠抗人b1-integrin單克隆抗體（上海艾博生物科技有限公司）。免疫組化步驟：常規(guī)抗原修復(fù)、封閉，二抗孵育，PBS沖洗3次后顯色。設(shè)置一抗為陰性對照，已知陽性食管癌組織切片為陽性對照。

1.3 結(jié)果判定

JAM-A、b1-integrin均表達(dá)于細(xì)胞膜，以膜染色呈黃色或棕黃色為陽性表達(dá)，采用雙盲法由2名病理醫(yī)師共同評價，評分標(biāo)準(zhǔn)為高倍鏡下隨機(jī)選取5個視野，陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)表達(dá)≥50%為陽性表達(dá)，≤50%為陰性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計方法

采用SPSS20.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，其中計數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)（率）表示，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。兩種蛋白表達(dá)情況的差異采用X檢驗；相關(guān)性分析采用Sperman檢驗；蛋白與臨床病理特征的關(guān)系采用X檢驗，而其與食管癌術(shù)后DFS關(guān)系采用多因素Cox回歸分析，以上檢驗采用雙側(cè)檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 食管癌中JAM-A和b1-integrin表達(dá)情況

120例食管癌組織JAM-A陽性表達(dá)74例（61.7%），而癌旁組織陽性表達(dá)56例（46.7%），兩者差異明顯（P＜0.05）。癌組織中b1-integrin陽性表達(dá)72例（60%），明顯高于癌旁組織陽性表達(dá)56例（52.1%）（P＜0.05），見表1和圖1。

2.2 食管癌中JAM-A、b1-integrin表達(dá)與病理特征的關(guān)系

食管癌組織中JAM-A陽性表達(dá)在患者性別、年齡、位置等病理特征中無顯著差異（P＞0.05），而在浸潤程度（T分期）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（N分期）、臨床病理分期（TNM）及腫瘤的分化程度等病理特征中存在顯著性差異（P＜0.05）。b1-integrin蛋白的表達(dá)與JAM-A存在一致性，其表達(dá)與臨床特征的關(guān)系見表2。

2.3 食管癌中JAM-A、b1-integrin的相關(guān)性分析

經(jīng)Sperman檢驗，JAM-A蛋白表達(dá)同b1-integrin蛋白呈正相關(guān)（r=0.0.476，P＜0.05）。

表1 JAM-A和b1-integrin在食管癌及癌旁組織中的表達(dá)情況（例，n=120）

圖1 JAM-A、b-catenin免疫組化圖片（×200）

（注：A. JAM-A陽性示意；B. JAM-A陰性示意圖；C.b1-integrin陽性示意圖；D.b1-integrin陰性示意圖。）

2.4 JAM-A、b1-integrin表達(dá)與食管癌預(yù)后的關(guān)系

應(yīng)用多因素Cox比例風(fēng)險模型分析兩種蛋白及上述臨床病理參數(shù)同食管癌預(yù)后關(guān)系。分析表明，食管癌的浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)、細(xì)胞分化程度及JAM-A、β1-integrin的表達(dá)均與食管的不良預(yù)后存在密切關(guān)系，而與患者性別、年齡、腫瘤位置無明顯相關(guān)，見表3。

3 討論

目前對于食管癌術(shù)后預(yù)后評價，仍舊以TNM分期及腫瘤標(biāo)志物為主要參考，需一種能夠早期、有效評價食管癌術(shù)后預(yù)后的方法。JAM在細(xì)胞信息傳遞及細(xì)胞緊密連接中有重要意義。JAM-A是連接粘附分子蛋白家族的一員，研究表明，JAM-A對不同腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移有不同表現(xiàn)，甚至截然相反。例如，Kurose等發(fā)現(xiàn)JAM-A的表達(dá)水平與子宮內(nèi)膜癌的侵襲性呈反比[5]。

表2 食管癌組織中JAM-A、b1-integrin表達(dá)情況與臨床參數(shù)的關(guān)系

表3 食管癌術(shù)后Cox模型多因素分析結(jié)果

Gotte等發(fā)現(xiàn)乳腺腫瘤細(xì)胞的侵襲性與JAM-A的表達(dá)水平呈正比例關(guān)系[6]。目前關(guān)于食管癌中JAM-A的表達(dá)水平尚未有明確。本研究結(jié)果顯示，食管癌中JAM-A表達(dá)水平明顯高于癌旁組織，進(jìn)一步的Cox比例風(fēng)險模型表明，食管癌中JAM-A的的表達(dá)水平對其預(yù)后存在明顯的不良影響。根據(jù)Tian等對鼻咽癌預(yù)后研究表明，其機(jī)制可能是通過Akt信號通路促進(jìn)上皮細(xì)胞間充質(zhì)化，并可影響一些其他細(xì)胞因子表達(dá)，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤細(xì)胞分化[7]。

b1-整合素（b1-integrin）是跨膜蛋白整合素家族的一員，能夠?qū)⒓?xì)胞外力學(xué)狀態(tài)及化學(xué)環(huán)境變化轉(zhuǎn)導(dǎo)至細(xì)胞內(nèi)，引起細(xì)胞骨架改變，導(dǎo)致細(xì)胞極性改變或腫瘤細(xì)胞遷移。Mandell等研究發(fā)現(xiàn)JAM-A突變體中其細(xì)胞增殖明顯較高，并伴有b1-integrin過表達(dá)[8]。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，JAM-A能夠通過活化GTP Rap1酶活性來上調(diào)b1-integrin表達(dá)[9]。因此我們同時檢測了食管腫瘤細(xì)胞及癌旁組織中b1-integrin表達(dá)水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)癌組織中b1-integrin蛋白表達(dá)水平也明顯升高，且進(jìn)一步統(tǒng)計相關(guān)性分析二者存在正相關(guān)性。在生存分析Cox模型中b1-integrin蛋白同JAM-A一樣影響食管癌的預(yù)后，因此，食管癌中JAM-A高表達(dá)可能通過調(diào)高b1-integrin表達(dá)存進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移。

綜上，食管癌組織中JAM-A與b1-integrin蛋白高表達(dá)對食管癌的預(yù)后有著重要意義，其作用機(jī)制可能與上調(diào)b1-integrin蛋白表達(dá)促進(jìn)食管癌細(xì)胞間充質(zhì)化相關(guān)。

1 左婷婷, 鄭榮壽, 曾紅梅, 等. 中國食管癌發(fā)病狀況與趨勢分析[J]. 中華腫瘤雜志, 2016, 38(9): 703-708.

2 楊瓊. Ⅲ期食管癌根治術(shù)后的療效及復(fù)發(fā)模式[D]. 2015.

3 Tuncay H, Brinkmann BF, Steinbacher T, et al. JAM-A regulates cortical dynein localization through Cdc42 to control planar spindle orientation during mitosis[J]. Nat Commun, 2015, 6: 8128.

4 Goetsch L, Haeuw JF, Beau-Larvor C, et al. A novel role for junctional adhesion molecule-A in tumor proliferation: Modulation by an anti-JAM-A monoclonal antibody[J]. Int J Cancer, 2013, 132(6): 1463-1474.

5 Kurose M, Kakuki T, Takano K, et al. Junctional adhesion molecule-A in head and neck squamous cell carcinoma [J]. Adv Otorhinolaryngol, 2016, 77(10): 92-97.

6 Gotte M, Mohro C, Koo CY, et al. miR-145-dependent targeting of junctional adhesion molecule A and modulation of fascin expression are asssociated with reduced breast cancer cell motility and invasiveness [J]. Oncogene, 2010, 29(50): 6569-6580.

7 Tian Y, Tian Y, Zhang W, et al. Junctional adhesion molecule-A, an epithelial-mesenchymal transition inducer, corrolates with metastasis and poor prognosis in human nasopharyngeal cancer [J]. Carcinogenesis, 2015, 36(1): 41-48.

8 Mandell KJ, Brian AB, Nusrat A. Junctional adhesion molecule 1 regulates epithelial cell morphology through effects onb1-integrin and Rap 1 activity[J]. Biol Chem, 2005, 280(12): 11665-11674.

9 Streuli CH, Akhtar N. Signal cooperation between integrins and other receptor systems[J]. Biochem, 2009, 418(3): 491-506.

Expression and significance of JAM-A,b1-integrin in esophageal squamous cell carcinoma#

Gan Shao-yin*1, Wang Zhong-min△1, Chen Zhi-jun1, Cao Ke-xin1, Li Bin1, Zhao Dong2, Li Yun-xia2, Zang Dan3, Shang Jie3

(1. Department of Thoracic Surgery, The First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical College, Xinxiang 453000, Henan; 2. Department of Respiratory Medicine, The First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical College, Xinxiang 453000, Henan; 3. Department of Pathology, The First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical College, Xinxiang 453000, Henan)

To investigate the expression and clinical significance of JAM-A andb1-integrin in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC).A total of 120 patients with ESCC diagnosed from February 2012 to April 2013 were enrolled in this study. The expression of JAM-A andb1-integrin in tumor tissues and adjacent tissues was detected by immunohistochemistry. The prognostic significance of the two proteins for ESCC was analyzed by the Cox model.The expression of JAM-A andb1-integrin proteins were significantly higher in tumor tissues than that in adjacent tissues (P<0.05). The expression of JAM-A protein was positively correlated with the expression ofb1-integrin protein (r=0.476, P< 0.05). Risk analysis of Cox model showed that high expression of JAM-A andb1-integrin protein may indicate poor prognosis of ESCC (P<0.05). JAM-A was an independent risk factor of ESCC.The high expression of JAM-A andb1-integrin may be closely related to the poor prognosis of ESCC.

Esophageal squamous cell carcinoma; JAM-A;b1-integrin

The promise and challenge of therapeutic genome editing

Doudna JA

Genome editing, which involves the precise manipulation of cellular DNA sequences to alter cell fates and organism traits, has the potential to both improve our understanding of human genetics and cure genetic disease. Here I discuss the scientific, technical and ethical aspects of using CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats) technology for therapeutic applications in humans, focusing on specific examples that highlight both opportunities and challenges. Genome editing is-or will soon be-in the clinic for several diseases, with more applications under development. The rapid pace of the field demands active efforts to ensure that this breakthrough technology is used responsibly to treat, cure and prevent genetic disease.

(From Nature, 2020, 578(7794): 229-236.)

（2019-8-20）

河南省醫(yī)學(xué)科技攻關(guān)計劃聯(lián)合共建項目（編號：2018020366）

甘紹印，男，主治醫(yī)師，主要從事食管癌及肺癌基礎(chǔ)研究，Email：635416612@qq. com；

王忠民, ，男，主任醫(yī)師，主要從事胸心外科臨床及基礎(chǔ)研究，Email：shenyuane94@163. com。