毛躍雄　陸躍堂　胡志姣　趙楊

摘要：【目的】研究貴州省棕櫚資源的遺傳多樣性及遺傳結(jié)構(gòu)，揭示其分布格局與變異趨勢(shì)，為貴州省棕櫚種質(zhì)資源保護(hù)及開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)?！痉椒ā炕赟RAP分子標(biāo)記對(duì)貴州省7個(gè)農(nóng)業(yè)氣候區(qū)的26個(gè)棕櫚種源328份材料進(jìn)行擴(kuò)增，經(jīng)Qsep 100全自動(dòng)核酸蛋白分析儀電泳分析后，利用Popgene 1.32和NTSYS-pc 2.1計(jì)算主要遺傳多樣性參數(shù)及進(jìn)行種源聚類(lèi)分析?！窘Y(jié)果】貴州省棕櫚遺傳多樣性豐富，其種級(jí)水平上的多態(tài)性條帶百分率（PPB）為97.31%，觀測(cè)等位基因數(shù)（Na）為1.9731、有效等位基因數(shù)（Ne）為1.4717、Nei?s基因多樣度（H）為0.2689、Shannon?s信息指數(shù)（I）為0.4212，但在種源水平上遺傳多樣性差異明顯。貴州省26個(gè)棕櫚種源間的遺傳分化系數(shù)（Gst）為0.3305，即種源內(nèi)變異是貴州省棕櫚資源遺傳變異的主要來(lái)源。UPGMA聚類(lèi)分析結(jié)果顯示，在閾值為0.91時(shí)，26個(gè)棕櫚種源可分成四大類(lèi)，其遺傳分化與地理環(huán)境有一定相關(guān)性。Mantel檢驗(yàn)結(jié)果顯示，貴州省棕櫚資源遺傳分化與其地理距離呈正相關(guān)（r=0.2651），但相關(guān)性不顯著（P>0.05）。貴州省7個(gè)農(nóng)業(yè)氣候區(qū)內(nèi)的棕櫚資源基因流（Nm）均大于貴州省棕櫚種源Nm（1.0129），說(shuō)明小區(qū)域內(nèi)的棕櫚資源基因交流頻繁?！窘Y(jié)論】貴州省棕櫚種質(zhì)資源總體遺傳多樣性高，種源間分化較明顯，選擇育種潛力巨大。為更好地開(kāi)發(fā)利用棕櫚資源，應(yīng)結(jié)合其遺傳結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，實(shí)行就地保護(hù)為主及建設(shè)種質(zhì)資源庫(kù)為補(bǔ)充的保護(hù)策略。

關(guān)鍵詞： 棕櫚;SRAP分子標(biāo)志;遺傳多樣性;遺傳分化;空間分布格局;貴州省

中圖分類(lèi)號(hào)： S792.91? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：2095-1191（2020）01-0027-09

Abstract：【Objective】The study on genetic diversity and genetic structure of Trachycarpus fortunei（Hook.） H. Wendl resources in Guizhou， revealed its distribution pattern and variation trend，and provided scientific basis for the protection， development and utilization of T. fortunei germplasm resources in Guizhou. 【Method】Based on SRAP molecular markers， 328 materials from 26 T. fortunei provenances in 7 agroclimatic regions of Guizhou were amplified. After electrophoresis analysis by Qsep 100 automatic nucleic acid protein analyzer， Popgene 1.32 and NTSYS-pc 2.1 were used to calculate the main genetic diversity parameters and perform the provenances clustering analysis. 【Result】The genetic diversity of T. fortunei in Guizhou was rich， the percentage of polymorphic bands（PPB） was 97.31% at species level， the observed alleles（Na） was 1.9731，? effective alleles（Ne） was 1.4717， Neis gene diversity index（H） was 0.2689， and Shannons information index（I） was 0.4212， but there were significant differences in genetic diversity at the provenance level. The genetic diversity（Dst） among the 26 T. fortunei provenances in Guizhou was 0.3305， which revealed that intra-provenance variation was the main source of genetic variation of T. fortunei resources in Guizhou. The UPGMA cluster analysis showed that the 26 T. fortunei provenances could be divided into four categories at the threshold of 0.91， and their genetic differentiation was related to the geographical environment. The Mantel test showed that there was a positive correlation between genetic differentiation and geographical distance（r=0.2651） in Guizhou，but the correlation was not significant（P>0.05）. The gene flow（Nm） of T. fortunei resources in seven agroclimatic regions of Guizhou was larger than that of T. fortunei species in Guizhou（1.0129）， indicated that gene exchange of T. fortunei resources was frequent in small areas. 【Conclusion】 T. fortunei germplasm resources of Guizhou have high genetic diversity， large differentiation between provenances， and huge potential of selection and breeding. In order to exploit and utilize T. fortunei resources better， combi-ning with its genetic structure characteristics， the conservation strategy is put forward， which is mainly in situ conservation and supplemented by the construction of germplasm resource bank.

Key words： Trachycarpus fortunei（Hook.） H. Wendl;SRAP molecular marker; genetic diversity; genetic differentia-tion; spatial distribution pattern; Guizhou

Foundation item： Guizhou Major Scientific and Technological Project（Qiankehezhongdazhuanxiang〔2014〕6024-1）

0 引言

【研究意義】棕櫚[Trachycarpus fortunei（Hook.） H. Wendl]是貴州省的常見(jiàn)鄉(xiāng)土樹(shù)種，隸屬于棕櫚科（Palmae）貝葉棕亞科（Coryphoideae）棕櫚屬（Trachycarpus），全樹(shù)均可開(kāi)發(fā)利用，其產(chǎn)品多元、用途廣泛（舒迎瀾，2004;董云發(fā)，2005;衛(wèi)強(qiáng)和王燕紅，2016），且具有淺根性及宜石灰土等特性，是改善石漠化生態(tài)環(huán)境的優(yōu)良經(jīng)濟(jì)樹(shù)種（但新球等，2003）。棕櫚在貴州省分布廣泛，但天然林破壞嚴(yán)重，居群呈零星分布，多為野生或半野生狀態(tài)，利用效率不高。采用分子標(biāo)記技術(shù)研究物種遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)特征，可為其種質(zhì)資源保護(hù)、遺傳改良及開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)（凌士鵬等，2018;馮建燦等，2019），因此，加強(qiáng)貴州省棕櫚種質(zhì)資源遺傳多樣性研究，對(duì)促進(jìn)貴州省棕櫚產(chǎn)業(yè)發(fā)展及石漠化生態(tài)修復(fù)樹(shù)種選擇均具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】至今，已有專(zhuān)家學(xué)者分別使用RAPD、AFLP、SRAP、ISSR和SSR等分子標(biāo)記在多種棕櫚科植物上開(kāi)展了種質(zhì)資源遺傳多樣性分析、遺傳圖譜構(gòu)建及系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系等相關(guān)研究工作（Ohtani et al.，2009;周麗霞和曹紅星，2018），包括油棕（Hayati et al.，2004;丁燦等，2011;肖勇等，2013）、山棕（賈春媛，2009）、董棕（趙春磊，2009）、檳榔（任軍方，2010）、椰子（Rajesh et al.，2015;Geethanjali et al.，2018）、蒲葵（Kondo et al.，2017）等，但針對(duì)棕櫚遺傳多樣性的研究較少。楊華（2005）利用RAPD分子標(biāo)記與表型測(cè)定對(duì)黃藤和單葉省藤天然種群進(jìn)行遺傳多樣性分析，結(jié)果證實(shí)種群內(nèi)變異是其遺傳變異的主要原因。安琪等（2010）采用AFLP分子標(biāo)記對(duì)云南省境內(nèi)的11種棕櫚藤親緣關(guān)系進(jìn)行分析，結(jié)果顯示云南省棕櫚藤遺傳多樣性豐富，各品種間的遺傳分化程度較高，且發(fā)現(xiàn)原始省藤亞屬和省藤亞屬兩個(gè)亞屬物種互相交叉滲透。Rajesh等（2015）采用SCoT分子標(biāo)記評(píng)估全球23個(gè)椰子種質(zhì)遺傳多樣性，進(jìn)一步證實(shí)了SCoT分子標(biāo)記用于物種遺傳多樣性分析的可行性。Kondo等（2017）利用20對(duì)SSR分子標(biāo)記對(duì)日本的6個(gè)蒲葵群體進(jìn)行遺傳多樣性分析，其結(jié)果為揭示蒲葵偏遠(yuǎn)種群的起源提供了依據(jù)。Geethanjali等（2018）以48對(duì)SSR分子標(biāo)記分析世界范圍內(nèi)79種椰子種質(zhì)的遺傳多樣性和種群結(jié)構(gòu)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其遺傳多樣性較高，分層聚類(lèi)為兩大聚類(lèi)，與其地理起源相對(duì)應(yīng)。在棕櫚種質(zhì)資源遺傳多樣性研究方面，李文表（2005）利用ISSR分子標(biāo)記分析了云南、廣西和湖南3個(gè)分布區(qū)的棕櫚遺傳多樣性，胡志姣和趙楊（2018）從形態(tài)學(xué)角度對(duì)貴州省棕櫚種源遺傳多樣性進(jìn)行了研究?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】SRAP分子標(biāo)記具有多態(tài)性高、重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)便及成本較低等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于觀賞植物（盧超等，2014;邱帥等，2018;馬秀花等，2019）、藥用植物（陳大霞等，2018;潘綠昌等，2018）、糧食作物（龐新華等，2019;張明飛等，2019;趙小慶等，2019）等植物種質(zhì)資源鑒定評(píng)價(jià)，但至今未見(jiàn)應(yīng)用于棕櫚種質(zhì)資源研究領(lǐng)域?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】從已發(fā)表的不同植物SRAP分子標(biāo)記引物中篩選出多態(tài)性引物，對(duì)貴州省26個(gè)棕櫚種源328份材料進(jìn)行擴(kuò)增，經(jīng)Qsep 100全自動(dòng)核酸蛋白分析儀電泳分析后，利用Popgene 1.32和NTSYS-pc 2.1計(jì)算主要遺傳多樣性參數(shù)及進(jìn)行種源聚類(lèi)分析，旨在揭示貴州省棕櫚的分布格局與變異趨勢(shì)，為其種質(zhì)資源保護(hù)及開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

從黔東北部（溫暖伏旱區(qū)）、黔東南部（溫暖濕潤(rùn)區(qū)）、黔北部（溫和伏旱區(qū)）、黔中部（溫和濕潤(rùn)區(qū)）、黔西南部（溫和春干夏雨區(qū)）、黔南部（溫?zé)岽焊蓞^(qū)）及黔西部（溫涼春干區(qū)）等7個(gè)農(nóng)業(yè)氣候區(qū)選取26個(gè)棕櫚種源328份材料，所選樣株均為野生資源，樹(shù)齡在20年左右，單株距離在50 m以上。分別采集生長(zhǎng)良好、無(wú)病蟲(chóng)害的當(dāng)年生嫩葉，經(jīng)硅膠干燥、液氮速凍后帶回實(shí)驗(yàn)室，-80 ℃保存?zhèn)溆?。利用GPS定位樣品采集地的地理坐標(biāo)，具體采樣情況及種源地生態(tài)條件如表1所示。主要試劑：新型植物DNA提取試劑盒（DP320）、D2000 DNA Marker（MD114）和2×Taq PCR MasterMix（KT201）均購(gòu)自天根生化科技（北京）有限公司。主要儀器設(shè)備：BioPhotometer Plus核酸蛋白定量檢測(cè)儀（德國(guó)Eppendorf公司），BIO-RAD T100 PCR儀（美國(guó)Bio-Rad公司），Tanon 1600凝膠成像系統(tǒng)（上海天能科技有限公司），Qsep 100全自動(dòng)核酸蛋白分析儀（中國(guó)臺(tái)灣光鼎生物科技股份有限公司）。

1. 2 DNA提取

將采集的材料取出并迅速剪碎，置于盛有液氮的無(wú)菌研缽中研磨至粉末狀，然后按新型植物DNA提取試劑盒說(shuō)明提取棕櫚總DNA，用1.0%瓊脂糖凝膠電泳和BioPhotometer Plus核酸蛋白定量檢測(cè)儀進(jìn)行檢測(cè)，合格的棕櫚總DNA以TE稀釋標(biāo)定至100 ng/μL，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1. 3 SRAP反應(yīng)體系建立

從已發(fā)表的不同植物SRAP分子標(biāo)記引物序列（李曉慧等，2007;李梅等，2009;劉倩，2013;林方養(yǎng)等，2014）中篩選出正向引物17條、反向引物18條，形成306對(duì)SRAP引物組合，委托北京全式金生物技術(shù)有限公司合成。利用4個(gè)種質(zhì)材料對(duì)SRAP引物組合進(jìn)行復(fù)篩，選出擴(kuò)增條帶清晰穩(wěn)定、多態(tài)性豐富、重復(fù)性好的引物組合（表2）。優(yōu)化后的SRAP反應(yīng)體系20.0 ?L：DNA模板2.0 ?L，上、下游引物（10 ?mol/L）各0.5 ?L，2×Taq PCR MasterMix 10.0 ?L，ddH2O 7.0 ?L。參照林方養(yǎng)（2014）的SRAP擴(kuò)增程序：94 ℃預(yù)變性3 min;94 ℃ 30 s，35 ℃ 45 s，72 ℃ 45 s，進(jìn)行5個(gè)循環(huán);94 ℃ 30 s，50 ℃ 45 s，72 ℃ 45 s，進(jìn)行35個(gè)循環(huán);72 ℃延伸10 min，4 ℃保存。

1. 4 擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)與分析

SRAP擴(kuò)增產(chǎn)物直接利用Qsep 100全自動(dòng)核酸蛋白分析儀進(jìn)行分析，全自動(dòng)進(jìn)樣，無(wú)須人工制膠、灌膠、上樣、拍照，免去手工制膠的繁瑣和人工上樣的誤差，產(chǎn)物長(zhǎng)度（bp）可直接讀出并根據(jù)需要選擇呈現(xiàn)信號(hào)峰值圖或模擬電泳圖。根據(jù)模擬電泳結(jié)果，對(duì)不同材料在同一位點(diǎn)的擴(kuò)增片段進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，條帶清晰明亮記為“1”，無(wú)條帶或模糊記為“0”，生成0-1矩陣。轉(zhuǎn)換相應(yīng)的數(shù)據(jù)格式后，用Popgene 1.32計(jì)算多態(tài)性條帶百分率（PPB）、觀測(cè)等位基因數(shù)（Na）、有效等位基因數(shù)（Ne）、Nei?s基因多樣度（H）、Shannon?s信息指數(shù)（I）、遺傳一致度（In）、遺傳距離（D）、總基因多樣性（Ht）、種源內(nèi)基因多樣性（Hs）、種源間的遺傳分化系數(shù)（Gst）及基因流（Nm）等主要遺傳多樣性參數(shù)，并采用NTSYS-pc 2.1按照UPGMA法進(jìn)行種源聚類(lèi)分析。根據(jù)采樣點(diǎn)地理坐標(biāo)信息計(jì)算各樣點(diǎn)間的地理距離，使用TFPGA 1.3對(duì)遺傳距離和地理距離進(jìn)行Mantel檢驗(yàn);利用PASW Statistics v18.0分析遺傳多樣性與種源地生態(tài)條件線性相關(guān)性，探索遺傳多樣性空間分布格局。

2 結(jié)果與分析

2. 1 SRAP多態(tài)性分析結(jié)果

10對(duì)SRAP引物組合共擴(kuò)增得到260條目的條帶，且擴(kuò)增條帶清晰穩(wěn)定（圖1），其中多態(tài)性條帶253條（平均25.3條），PPB為97.31%（表3）。以Me4-Em5引物組合的PPB最低，為88.00%;有7對(duì)SRAP引物組合（Me1-Em2、Me2-Em1、Me3-Em1、Me3-Em4、Me4-Em4、Me5-Em2和Me6-Em5）的PPB達(dá)100.00%。說(shuō)明這10對(duì)SRAP引物組合能穩(wěn)定高效地檢測(cè)棕櫚資源遺傳多樣性，為核心種質(zhì)篩選提供依據(jù)。

2. 2 棕櫚遺傳多樣性評(píng)價(jià)及空間分布格局分析結(jié)果

26個(gè)棕櫚種源的遺傳多樣性參數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果如表4所示。其中，PPB在31.92%（YJ）～79.62%（NY），平均為61.15%;Na在1.3192（YJ）～1.7962（NY），平均為1.6112;Ne在1.1809（SQ）～1.3678（NY），平均為1.2975;H在0.1136（SQ）～0.2292（NY），平均為0.1809;I在0.1741（YJ）～0.3571（NY），平均為0.2790。26個(gè)棕櫚種源間的遺傳多樣性差異明顯，納雍（NY）、貴定（GD）、六枝（LZ）、貴陽(yáng)（GY）和湄潭（MT）等種源的遺傳多樣性較豐富，而印江（YJ）、石阡（SQ）和劍河（JH）等種源的遺傳多樣性較低。貴州省棕櫚種級(jí)水平的PPB為97.31%、Na為1.9731、Ne為1.4717、H為0.2689、I為0.4212，說(shuō)明貴州省棕櫚遺傳多樣性豐富。

由表5可知，各農(nóng)業(yè)氣候區(qū)棕櫚居群的遺傳多樣性存在明顯差異，其中，黔中（溫和濕潤(rùn)）農(nóng)業(yè)氣候區(qū)的多態(tài)性條帶最多（250條），PPB高達(dá)96.15%，對(duì)應(yīng)的Na、Ne、H、I分別為1.9615、1.3946、0.2470和0.3895，均較高;黔東北（溫暖伏旱）農(nóng)業(yè)氣候區(qū)的多態(tài)性條帶最少（171條），PPB僅為65.77%，對(duì)應(yīng)的Na、Ne、H、I分別為1.6577、1.2683、0.1697和0.2680，均最低。

棕櫚主要遺傳多樣性參數(shù)與種源地生態(tài)條件的相關(guān)性分析結(jié)果（表6）顯示，PPB、H和I與年均氣溫、無(wú)霜期均呈負(fù)相關(guān)，與年均降水量呈正相關(guān)，但相關(guān)性均不顯著（P>0.05，下同）。PPB與海拔呈正相關(guān)，但相關(guān)性不顯著;I和H與海拔呈顯著正相關(guān)（P<0.05，下同），表明海拔對(duì)貴州省棕櫚的遺傳多樣性分布有顯著影響。

2. 3 棕櫚居群的聚類(lèi)分析結(jié)果

基于遺傳一致性的UPGMA聚類(lèi)分析結(jié)果（圖2）顯示，在閾值為0.91時(shí)，26個(gè)棕櫚種源可分成四大類(lèi)，第Ⅰ類(lèi)只有都勻（DY）1個(gè)種源;第Ⅱ類(lèi)10個(gè)種源，包括貴定（GD）、三都（SD）、湄潭（MT）、鳳岡（FG）、務(wù)川（WC）、道真（DZ1）、納雍（NY）、獨(dú)山（DS）、丹寨（DZ2）和麻江（MJ）;第Ⅲ類(lèi)6個(gè)種源，包括水城（SC）、普定（PD）、織金（ZJ）、六枝（LZ）、羅甸（LD）和望謨（WM）;第Ⅳ類(lèi)9個(gè)種源，包括貴陽(yáng)（GY）、甕安（WA）、劍河（JH）、思南（SN）、福泉（FQ）、余慶（YQ）、正安（ZA）、石阡（SQ）和印江（YJ）?？梢?jiàn)，屬于同一農(nóng)業(yè)氣候區(qū)的棕櫚種源大多數(shù)能聚在同一類(lèi)，即貴州省棕櫚資源的遺傳分化與其地理環(huán)境有一定相關(guān)性。Mantel檢驗(yàn)結(jié)果（圖2）顯示，貴州省棕櫚資源遺傳分化與其地理距離呈正相關(guān)（r=0.2651），但相關(guān)性不顯著，說(shuō)明地理隔離對(duì)棕櫚遺傳分化有一定影響，但并非主要因素。

2. 4 棕櫚居群的遺傳分化情況

由表7可知，貴州省棕櫚資源種級(jí)水平的Ht為0.2702，Hs為0.1809，Gst為0.3305，說(shuō)明貴州省棕櫚資源遺傳變異的66.95%來(lái)自種源內(nèi)，而33.05%來(lái)自種源間，即種源內(nèi)變異是貴州省棕櫚資源遺傳變異的主要來(lái)源。黔東南區(qū)棕櫚種源間的遺傳變異最大，占該區(qū)總遺傳變異的30.19%;黔南區(qū)棕櫚種源間的遺傳變異最小，為7.40%。貴州省棕櫚資源種級(jí)水平的Nm為1.0129，大于1.0000，說(shuō)明貴州省各棕櫚種源間存在較低的基因流。此外，7個(gè)農(nóng)業(yè)氣候區(qū)內(nèi)的棕櫚資源基因流均大于貴州省內(nèi)棕櫚種源基因流，說(shuō)明小區(qū)域內(nèi)的棕櫚資源基因交流頻繁。

3 討論

PPB、H和I 是衡量種群遺傳多樣性的3個(gè)重要參數(shù)。其中，PPB只是一種粗略估計(jì)，尚無(wú)法確定各條帶在頻率上的均勻程度，且受樣本大小、條帶多少及篩選方法的影響（紅雨等，2006）;而H 和I 充分考慮了群體中的基因數(shù)目及其分布均勻度，三者結(jié)合可有效反映遺傳多樣性水平（黃勇，2013）。本研究結(jié)果表明，貴州省棕櫚物種水平上的PPB為97.31%、H為0.2689、I為0.4212，明顯高于蒙古櫟（李文英，2003）、厚樸（鄭志雷，2010）、杏（馬麗娟，2013）、紫椴（王東升，2013）及玉鈴花（王萱，2016）等常見(jiàn)溫帶多年生木本植物，也明顯高于銀杏（葛永奇等，2003）、構(gòu)樹(shù)（廖聲熙等，2013）及杜仲（于靖，2015）等雌雄異株的木本植物，但在棕櫚科植物中略低于喬木形的董棕（趙春磊，2009）、檳榔（任軍方，2010）及叢生灌木形的山棕（賈春媛，2009），高于黃藤和單葉省藤等木質(zhì)藤本（楊華，2005）。說(shuō)明從地理分布、交配系統(tǒng)及生活型等多方面觀察均證實(shí)貴州省棕櫚具有豐富的遺傳多樣性。遺傳多樣性與種源地生態(tài)條件的相關(guān)性分析結(jié)果表明，海拔對(duì)貴州省棕櫚資源遺傳多樣性分布有顯著影響，可能是由于貴州高海拔山區(qū)地勢(shì)復(fù)雜，交通不便，人為破壞少，能保存較高的遺傳多樣性。棕櫚作為棕櫚科植物中最抗寒的一個(gè)種，廣泛的地理分布說(shuō)明其擁有較大的基因庫(kù)及生境異質(zhì)性，多世代重疊有效保留了重組和突變;而嚴(yán)格的雌雄異株異交、風(fēng)媒花保證了高頻的遠(yuǎn)系雜交能力和異交率（朱華晨，2000）。這些特征都可能是棕櫚仍維持較高遺傳多樣的重要原因。

本研究還發(fā)現(xiàn)，貴州省棕櫚物種水平上的Gst為0.3305，明顯高于木本植物（Gst=0.2100）及傳粉植物（Gst=0.2300）的平均值（Nybom，2004），說(shuō)明貴州省棕櫚各種源間已有一定程度的分化。Mantel檢驗(yàn)結(jié)果顯示，貴州省棕櫚資源的遺傳分化與地理隔離呈較弱正相關(guān)，僅有不到0.1%的遺傳變異可由地理距離解釋?zhuān)f(shuō)明地理隔離不是棕櫚遺傳分化的主要因素。UPGMA聚類(lèi)分析結(jié)果顯示，貴州省棕櫚資源的遺傳分化與地理環(huán)境有一定相關(guān)性，同一農(nóng)業(yè)氣候區(qū)的棕櫚種源大多數(shù)聚在同一類(lèi)，可能是在自然選擇壓力下，具有相同基因型的個(gè)體共同聚集在較適應(yīng)的生境中，從而產(chǎn)生遺傳分化（王玉山等，2011;黃勇，2013;馬少薇等，2017）。這種由生境異質(zhì)性下選擇壓力及遺傳漂移所形成的遺傳分化大于地理距離所帶來(lái)的遺傳分化，但地理環(huán)境影響種源分化的具體進(jìn)程有待進(jìn)一步探究。此外，貴州省棕櫚資源種級(jí)水平的Nm為1.0129，大于1.0000，即貴州省各棕櫚種源間基因流動(dòng)很少，故推測(cè)低水平的基因流動(dòng)是造成遺傳變異以種源內(nèi)變異為主、種源間遺傳分化明顯的主要原因。各農(nóng)業(yè)氣候區(qū)內(nèi)棕櫚資源的Nm大于各棕櫚種源間的Nm，表明棕櫚的基因流動(dòng)受限于小區(qū)域范圍內(nèi)?；ǚ叟c種子傳播是棕櫚主要的基因流動(dòng)形式，二者均受自身特點(diǎn)與環(huán)境條件的影響。棕櫚樹(shù)體高大，花序抽生于樹(shù)頂端、花量巨多、開(kāi)花集中，使得花粉能借助風(fēng)力廣泛傳播，但花期時(shí)貴州境內(nèi)多陰雨天氣，不利于花粉大范圍傳播;棕櫚種子較大，果熟期天氣寒冷，鳥(niǎo)獸活動(dòng)相對(duì)較少，故其種子傳播距離有限。這些因素是導(dǎo)致貴州省棕櫚基因流動(dòng)較低且較窄的主要原因。

棕櫚作為貴州省內(nèi)重要的生態(tài)與經(jīng)濟(jì)樹(shù)種，其豐富的遺傳多樣性與種源變異是遺傳改良的寶貴材料，擁有極高的種質(zhì)資源保育價(jià)值。因此，在今后的種質(zhì)收集與保存工作中，應(yīng)將黔中區(qū)、黔北區(qū)和黔西區(qū)等棕櫚資源遺傳多樣性相對(duì)較豐富的地區(qū)劃為核心種源區(qū)，設(shè)立多個(gè)保護(hù)點(diǎn)，并盡可能收集多個(gè)種群的種子或幼苗，其他地區(qū)則應(yīng)多選擇一些優(yōu)良單株的家系苗。在此基礎(chǔ)上，結(jié)合高通量測(cè)序技術(shù)與生物信息學(xué)分析手段，揭示棕片產(chǎn)量等重要農(nóng)業(yè)性狀的形成機(jī)理，或挖掘與之緊密連鎖的分子標(biāo)記，并綜合篩選出一批特異育種材料，為貴州棕櫚資源的開(kāi)發(fā)利用打下基礎(chǔ)。

4 結(jié)論

貴州省棕櫚種質(zhì)資源總體遺傳多樣性高，種源間分化較明顯，選擇育種潛力巨大。為更好地開(kāi)發(fā)利用棕櫚資源，應(yīng)結(jié)合其遺傳結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，實(shí)行就地保護(hù)為主及建設(shè)種質(zhì)資源庫(kù)為補(bǔ)充的保護(hù)策略。

參考文獻(xiàn)：

安琪，張國(guó)學(xué)，何承忠，王娟，楊宇明. 2010. 省藤屬11種棕櫚藤親緣關(guān)系的AFLP分析[J]. 西北植物學(xué)報(bào)，30（6）：1117-1122. [An Q，Zhang G X，He C Z，Wang J，Yang Y M. 2010. Analysis of phylogenetic relationship on 11 Calamus species（Palmae） by AFLP markers[J]. Acta Botanica Boreali-Occidentalia Sinica，30（6）：1117-1122.]

陳大霞，張雪，王鈺，潘媛，李隆云，易思榮，張澤. 2018. 基于ISSR、SCoT、SRAP標(biāo)記的川續(xù)斷屬藥用植物親緣關(guān)系研究[J]. 中草藥，49（4）：903-909. [Chen D X，Zhang X，Wang Y，Pan Y，Li L Y，Yi S R，Zhang Z. 2018. Analysis on genetic relationship of medicinal species of Dipsacus marked by ISSR，ScoT，and SRAP[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs，49（4）：903-909.]

但新球，喻甦，吳協(xié)保，寧小斌. 2003. 我國(guó)石漠化區(qū)域劃分及造林樹(shù)種選擇探討[J]. 中南林業(yè)調(diào)查規(guī)劃，22（4）：20-23. [Dan X Q，Yu S，Wu X B，Ning X B. 2003. Discussion on the regional division of rocky desertification and the selection of afforestation tree species in China[J]. Central South Forest Inventory and Planning，22（4）：20-23.]

丁燦，郎南軍，林位夫. 2011. 中國(guó)油棕種質(zhì)材料的遺傳多樣性研究[J]. 中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，27（21）：131-137. [Ding C，Lang N J，Lin W F. 2011. Study on genetic diversity of oil palm germplasm in China[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin，27（21）：131-137.]

董云發(fā). 2005. 棕櫚的綜合利用和開(kāi)發(fā)[J]. 中國(guó)野生植物資源，24（1）：25-27. [Dong Y F. 2005. The many uses and exploitation of Trachycarpus fortunei[J]. Chinese Wild Plant Resources，24（1）：25-27.]

馮建燦，張夢(mèng)洋，李敏，程鈞，方偉超，牛良，鄭先波，葉霞，譚彬. 2019. 桃果皮茸毛性狀I(lǐng)ndelG標(biāo)記基因分型與應(yīng)用[J]. 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，53（1）：64-72. [Feng J C，Zhang M Y，Li M，Cheng J，F(xiàn)ang W C，Niu L，Zheng X B，Ye X，Tan B. 2019. Analysis and application of genotypes on peel fuzz trait in peach resources with IndelG molecular marker[J]. Journal of Henan Agricultural University，53（1）：64-72.]

葛永奇，邱英雄，丁炳揚(yáng)，傅承新. 2003. 孑遺植物銀杏群體遺傳多樣性的ISSR分析[J]. 生物多樣性，11（4）：276-287. [Ge Y Q，Qiu Y X，Ding B Y，F(xiàn)u C X. 2003. An ISSR analysis on population genetic diversity of the relict plant Ginkgo biloba[J]. Biodiversity Science，11（4）：276-287.]

紅雨，王林和，梁小榮. 2006. 不同生境臭柏種群的遺傳多樣性分析及其與環(huán)境因子的相關(guān)性[J]. 干旱區(qū)資源與環(huán)境，20（3）：184-187. [Hong Y，Wang L H，Liang X R. 2006. Analysis on the genetic diversity of Sabina vulgaris at different habitats and the influence of the environmental factors[J]. Journal of Arid Land Resources and Environment，20（3）：184-187.]

胡志姣，趙楊. 2018. 貴州省棕櫚種源地理變異研究[J]. 西部林業(yè)科學(xué)，47（2）：7-14. [Hu Z J，Zhao Y. 2018. Geographic variation of Trachycarpus fortunei in Guizhou Province[J]. Journal of West China Forestry Science，47（2）：7-14.]

黃勇. 2013. 基于SRAP分子標(biāo)記的小果油茶遺傳多樣性分析[J]. 林業(yè)科學(xué)，49（3）：43-50. [Huang Y. 2013. Analysis of Camellia meiocarpa genetic diversity based on SRAP markers[J]. Scientia Silvae Sinicae，49（3）：43-50.]

賈春媛. 2009. 中國(guó)原生香棕（Arenga engleri Becc.）種群的遺傳多樣性研究[D]. 廈門(mén)：廈門(mén)大學(xué). [Jia C Y. 2009. Study on genetic diversity of native Arenga engleri Becc. populations in China[D]. Xiamen：Xiamen University.]

李梅，侯喜林，郝日明. 2009. 基于SRAP分子標(biāo)記的桂花品種親緣關(guān)系研究[J]. 園藝學(xué)報(bào)，36（11）：1667-1675. [Li M，Hou X L，Hao R M. 2009. Analysis of genetic relationships of Osmanthus fragrans based on SRAP markers[J]. Acta Horticulturae Sinica，36（11）：1667-1675.]

李文表. 2005. 棕櫚（Trachycarpus fortunei）的遺傳多樣性研究[D]. 廣州：華南師范大學(xué). [Li W B. 2005. Study on genetic diversity of Trachycarpus fortunei[D]. Guangzhou：South China Normal University.]

李文英. 2003. 蒙古櫟天然群體遺傳多樣性研究[D]. 北京：北京林業(yè)大學(xué). [Li W Y. 2003. Study on genetic diversity of natural population in Quercus mongolica[D]. Beijing：Beijing Forestry University.]

李曉慧，田朝陽(yáng)，王從彥. 2007. SRAP分子標(biāo)記分析西瓜遺傳多態(tài)性[J]. 生物技術(shù)，17（3）：23-26. [Li X H，Tian C Y，Wang C Y. 2007. Genetic polymorphism analysis by sequence-related amplified polymorphism markers in Citrullus lanatus[J]. Biotechnology，17（3）：23-26.]

廖聲熙，崔凱，周敏，何承忠，楊文云，李昆. 2013. 云南河谷構(gòu)樹(shù)的遺傳多樣性研究[J]. 林業(yè)科學(xué)研究，26（5）：588-592. [Liao S X，Cui K，Zhou M，He C Z，Yang W Y，Li K. 2013. Analysis on genetic diversity of Broussonetia papyrifera distributed in river basin of Yunnan Province[J]. Forest Research，26（5）：588-592.]

林方養(yǎng)，楊耀東，萬(wàn)婕，唐嘉，馬子龍，吳翼. 2014. 棕櫚科植物DNA的提取及SRAP引物篩選[J]. 江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，26（7）：115-117. [Lin F Y，Yang Y D，Wan J，Tang J，Ma Z L，Wu J. 2014. Extraction of genomic DNA from Palm plants and screening of SRAP primers[J]. Acta Agriculturae Jiangxi，26（7）：115-117.]

凌士鵬，孫萍，林賢銳，沈建生. 2018. 基于SSR標(biāo)記的桃種質(zhì)資源遺傳多樣性研究[J]. 江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，30（11）：14-18. [Ling S P，Sun P，Lin X R，Shen J S. 2018. A study on genetic diversity of peach germplasm resources based on SSR markers[J]. Acta Agriculturae Jiangxi，30（11）：14-18.]

劉倩. 2013. 應(yīng)用SRAP分子標(biāo)記構(gòu)建紅麻種質(zhì)資源分子身份證[D]. 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院. [Liu Q. 2013. Establishment of molecular identity for kenaf germplasm using SRAP markers[D]. Beijing：Chinese Academy of Agricultural Sciences.]

盧超，張美德，何銀生，劉海華，艾倫強(qiáng). 2014. SRAP技術(shù)在植物遺傳育種中的應(yīng)用[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，（16）：18-19. [Lu C，Zhang M D，He Y S，Liu H H，Ai L Q. 2014. Application of SRAP technology in plant genetics and breeding[J]. Modern Agricultural Science and Technology，（16）：18-19.]

馬麗娟. 2013. 東北野生杏居群遺傳多樣性及遺傳結(jié)構(gòu)分析[D]. 長(zhǎng)春：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué). [Ma L J. 2013. Genetic diversity and genetic structure analysis of wild apricot populations in Northeast China[D]. Changchun：Jilin Agricultural University.]

馬少薇，董建芳，劉果厚. 2017. 內(nèi)蒙古地區(qū)黃柳遺傳多樣性的RAPD分析[J]. 干旱區(qū)資源與環(huán)境，31（8）：175-180. [Ma S W，Dong J F，Liu G H. 2017. RAPD analysis of genetic diversity of Salix gordejevii in Inner Mongolia[J]. Journal of Arid Land Resources and Environment，31（8）：175-180.]

馬秀花，唐道城，唐楠. 2019. 萬(wàn)壽菊育性相關(guān)基因SRAP分子標(biāo)記開(kāi)發(fā)[J]. 分子植物育種，17（20）：6718-6723. [Ma X H，Tang D C，Tang N. 2019. Development of SRAP molecular marker for fertility related genes of marigold[J]. Molecular Plant Breeding，17（20）：6718-6723. ]

潘綠昌，趙致，何云，李園園，劉紅昌，俸婷婷，周英. 2018. 基于SRAP分子標(biāo)記的貴州5種忍冬屬藥用植物遺傳多樣性分析[J]. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，49（12）：2349-2355. [Pan L C，Zhao Z，He Y，Li Y Y，Liu H C，F(xiàn)eng T T，Zhou Y. 2018. Genetic diversity among five species of medicinal plants of Lonicera L. in Guizhou Province by SRAP molecular markers analysis[J]. Journal of Southern Agriculture，49（12）：2349-2355.]

龐新華，檀小輝，韋麗君，梁芳，張繼，呂平，程琴，黃秋偉，周全光. 2019. 35份甘蔗種質(zhì)的遺傳多樣性分析及DNA指紋圖譜構(gòu)建[J]. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，50（6）：1157-1164. [Pang X H，Tan X H，Wei L J，Liang F，Zhang J，Lü P，Cheng Q，Huang Q W，Zhou Q G. 2019. Genetic diversity analysis for 35 sugarcane germanium resources and construction of DNA fingerprint[J]. Journal of Southern Agriculture，50（6）：1157-1164.]

邱帥，沈柏春，李婷婷，郭娟，王霽，孫麗娜，陳徐平，胡紹慶. 2018. 基于隨機(jī)森林算法和SRAP分子標(biāo)記的桂花品種鑒定方法[J]. 林業(yè)科學(xué)，54（1）：32-45. [Qiu S，Shen B C，Li T T，Guo J，Wang J，Sun L N，Chen X P，Hu S Q. 2018. A method of Osmanthus fragrans cultivars identification based on random forest algorithms and SRAP molecular markers[J]. Scientia Silvae Sinicae，54（1）：32-45.]

任軍方. 2010. 利用ISSR標(biāo)記對(duì)海南保亭檳榔遺傳多樣性的研究[D]. ?？冢汉Ｄ洗髮W(xué). [Ren J F. 2010. Genetic diversity of Areca catechu L. from Baoting of Hainan Pro-vince detected with ISSR markers[D]. Haikou：Hainan University.]

舒迎瀾. 2004. 古代棕櫚及其利用[J]. 園林，（7）：44-45. [Shu Y L. 2004. Ancient palms and their utilization[J]. Gardens，（7）：44-45.]

王東升. 2013. 山東省紫椴和野核桃AFLP遺傳多樣性研究[D]. 泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué). [Wang D S. 2013. Genetic diversity study of Tilia amurensis ruprecht and Juglans cathayensis dode from Shandong Province by AFLP mar-kers[D]. Tai?an：Shandong Agricultural University.]

王萱. 2016. 玉鈴花遺傳多樣性的AFLP分析[D]. 泰安：山東農(nóng)業(yè)大學(xué). [Wang X. 2016. Genetic diversity of Styrax obassia Sieb. et Zucc based on AFLP markers[D].? Taian：Shandong Agricultural University.]

王玉山，邢世巖，唐海霞，馮殿齊. 2011. 側(cè)柏種源遺傳多樣性分析[J]. 林業(yè)科學(xué)，47（7）：91-96. [Wang Y S，Xing S Y，Tang H X，F(xiàn)eng D Q. 2011. Genetic diversity of Platycladus orientalis provenances[J]. Scientia Silvae Sinicae，47（7）：91-96.]

衛(wèi)強(qiáng)，王燕紅. 2016. 棕櫚花、葉、莖揮發(fā)油成分及抑菌活性研究[J]. 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，28（5）：875-884. [Wei Q，Wang Y H. 2016. Study on chemical components of the essential oils in flower，leaf and stem of Trachycarpus fortunei （Hook） H. Wendl and their antimicrobial activities[J]. Acta Agriculturae Zhejiangensis，28（5）：875-884.]

肖勇，楊耀東，夏薇，沈雁，雷新濤，馬子龍. 2013. 25個(gè)油棕SSR標(biāo)記的開(kāi)發(fā)及應(yīng)用這些標(biāo)記評(píng)估油棕資源的遺傳多樣性[J]. 江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，25（12）：27-31. [Xiao Y，Yang Y D，Xia W，Shen Y，Lei X T，Ma Z L. 2013. Development of 25 SSR markers and their uses in evaluating genetic diversity of oil palm germplasm resources[J]. Acta Agriculturae Jiangxi， 25（12）：27-31.]

楊華. 2005. 黃藤和單葉省藤遺傳多樣性與早期性別鑒定的研究[D]. 北京：中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院. [Yang H. 2005. Study on genetic diversity and sex identification of Daemonorops margaritae & Calamus simplificifolius[D]. Beijing：Chinese Academy of Forestry.]

于靖. 2015. 杜仲種質(zhì)資源及其果實(shí)質(zhì)量評(píng)價(jià)[D]. 楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué). [Yu J. 2015. Germplasm resource of Eucommia ulmoides oliver and fruits quality evaluation[D]. Yangling：Northwest? Agriculture and Forestry University.]

張明飛，于卓，于肖夏，李景偉，馬艷紅，吳國(guó)芳，王穎. 2019. 四倍體馬鈴薯SRAP分子遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建[J]. 草業(yè)學(xué)報(bào)，28（8）：190-199. [Zhang M F，Yu Z，Yu X X，Li J W，Ma Y H，Wu G F，Wang Y. 2019. Construction of a genetic linkage map for tetraploid potato based on SRAP markers[J]. Acta Prataculturae Sinica，28（8）：190-199.]

趙春磊. 2009. 利用ISSR分析中國(guó)原生董棕植物遺傳多樣性[D]. 廈門(mén)：廈門(mén)大學(xué). [Zhao C L. 2009. Analyzed the Chinese primary Caryota urens Linn heredity multiplicity using ISSR[D]. Xiamen：Xiamen University.]

趙小慶，史功賦，張向前，方靜，葉君，王建國(guó)，伊六喜，路戰(zhàn)遠(yuǎn). 2019. 內(nèi)蒙古地區(qū)典型春小麥親緣關(guān)系的SRAP分析[J/OL]. 分子植物育種. http：//kns.cnki.net/kcms/detail/46.1068.s.20190424.1511.018.html. [Zhao X Q，Shi G F，Zhang X Q，F(xiàn)ang J，Ye J，Wang J G，Yi L X，Lu Z Y. 2019. Genetic relations of spring wheat varieties in Inner Mongolia region by SRAP markers[J/OL]. Molecular Plant Breeding. http：//kns.cnki.net/kcms/detail/46.1068.s.2019 0424.1511.018.html.]

鄭志雷. 2010. 厚樸遺傳多樣性研究及指紋圖譜的構(gòu)建[D]. 福州：福建農(nóng)林大學(xué). [Zheng Z L. 2010. Studies on genetic diversity and construction of fingerprinting of Magnolia officinalis[D]. Fuzhou：Fujian Agriculture and Fo-restry University.]

周麗霞，曹紅星. 2018. 椰子種質(zhì)資源遺傳多樣性的SSR分析[J]. 南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，49（9）：1683-1690. [Zhou L X，Cao H X. 2018. SSR analysis on genetic diversity in coconut germplasm resource[J]. Journal of Southern Agriculture，49（9）：1683-1690.]

朱華晨. 2000. 高等植物單性花的性別決定[J]. 中山大學(xué)研究生學(xué)刊（自然科學(xué)版），21（2）：42-46. [Zhu H C. 2000. The sex determination in the higher plants unisexual flowers[J]. Journal of the Graduates Sun Yat-Sen University（Na-tural Sciences），21（2）：42-46.]

Geethanjali S，Anitha Rukmani J，Rajakumar D， Kadirvel P. 2018. Genetic diversity，population structure and association analysis in coconut（Cocos nucifera L.） germplasm using SSR markers[J]. Plant Genetic Resources，16（2）：156-168.

Hayati A，Wickneswari R，Maizura I，Rajanaidu N. 2004. Genetic diversity of oil palm（Elaeis guineensis Jacq.） germplasm collections from Africa：Implications for improvement and conservation of genetic resources[J]. Theoretical and Applied Genetics，108（7）：1274-1284.

Kondo T，Kajita R，Yamada T. 2017. Development and characterization of 20 polymorphic microsatellite markers for Livistona chinensis R. Br. var. subglobosa Becc.，a fan palm in the Ryukyu Archipelago，Japan[J]. Plant Species Biology，32（4）：477-481.

Nybom H. 2004. Comparison of different nuclear DNA mar-kers for estimating intraspecific genetic diversity in plants[J]. Molecular ecology，13（5）：1143-1155.

Ohtani M，Tani N，Yoshimaru H. 2009. Isolation of polymorphic microsatellite loci in Livistona chinensis（Jacq.） R. Br. ex Mart. var. boninensis Becc.，an endemic palm species of the oceanic Bonin Islands，Japan[J]. Conservation Genetics，10（4）：997-999.

Rajesh M K，Sabana A A，Rachana K E，Rahman S，Jerard B A，Karun A. 2015. Genetic relationship and diversity among coconut（Cocos nucifera L.） accessions revealed through SCoT analysis[J]. 3 Biotech，5（6）：999-1006.

（責(zé)任編輯 蘭宗寶）