徐澤曦 陳麗琴 盧偉娜 羅琪琛 莊小玉 黃秋嬋 李淦峰 肖青

摘 要 目的：探究肉桂多酚對(duì)急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用。方法：將54只昆明中小鼠隨機(jī)平均分為6組：正常組、模型組、陽性對(duì)照組（400 mg/kg）和肉桂多酚低、中、高劑量組（150、300、600 mg/kg），試驗(yàn)第14天模型組及各劑量組通過一次灌胃給予50度白酒（14 mg/kg），正常組予以相同劑量蒸餾水建立急性酒精性肝損傷模型，測(cè)定各組小鼠血清中AST、ALT、MDA及SOD含量，計(jì)算肝臟指數(shù)并觀察肝臟組織病理學(xué)變化。結(jié)果：與模型組相比，高、中、低劑量組中血清AST含量降低，SOD活性增強(qiáng)（P<0.05或P<0.01），肝組織病理學(xué)改變減輕；僅高、中劑量組中血清ALT、MDA含量顯著降低（P<0.05或P<0.01）。結(jié)論：肉桂多酚對(duì)急性酒精性肝損傷有保護(hù)作用。

關(guān)鍵詞 肉桂多酚 急性酒精性肝損傷 保護(hù)

中圖分類號(hào)：R965； R595.6 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1006-1533（2020）03-0065-04

Protective effect of cinnamon polyphenols on acute alcoholic liver injury*

XU Zexi1**， CHEN Liqin1， LU Weina1， LUO Qichen1， ZHUANG Xiaoyu1， HUANG Qiuchan1， LI Ganfeng1， XIAO Qing2***

（1. the Second Clinical College， Guangzhou Medical University， Guangzhou 511436， China； 2. College of Pharmacy， Guangzhou Medical University， Guangzhou 511436， China）

ABSTRACT Objective： To investigate the protective effect of cinnamon polyphenol on acute alcoholic liver injury. Methods： Fifty-four Kunming mice were randomly and averagely divided into 6 groups： blank group， model group， positive control group（400 mg/kg）and cinnamon polyphenol low， medium and high dose groups （150， 300， 600 mg/kg， respectively）. Every-dosage group was intragastrically administered with one dose of 50 degrees liquor （14 mg/kg） on the 14th day while the blank group was given the same dose of distilled water so as to establish a model of acute alcoholic liver injury. The serum contents of AST， ALT， MDA and SOD were determined， liver index was calculated and the histopathologic changes of the hepatic tissue were observed in each group. Results： Compared with the model group， the serum contents of AST were decreased and the activity of SOD was increased among high， middle and low dose groups （P<0.05 or P<0.01）， and the pathological changes of liver were alleviated as well. However， only the contents of ALT and MDA in serum were significantly reduced in both high and middle groups （P<0.05 or P<0.01）. Conclusion： Cinnamon polyphenol has protective effect on acute alcoholic liver injury.

KEY WORDS cinnamon polyphenols； acute alcoholic liver injury； protection

酒精性肝?。ˋLD）是由于長(zhǎng)期的大量飲酒導(dǎo)致的常見的肝臟疾病。酒精肝的發(fā)病率與生活水平的提高密切相關(guān)。近年來，隨著我國人民生活水平逐年的提高，酒精肝的發(fā)病率也逐年上升趨勢(shì)[1]。急性酒精性肝損傷是ALD的早期表現(xiàn)，酒精及其代謝產(chǎn)物會(huì)引起脂質(zhì)代謝紊亂、氧化應(yīng)激及細(xì)胞凋亡等，對(duì)肝組織造成損害[2-3]。

肉桂為樟科植物肉桂樹的干樹皮，具有溫中補(bǔ)腎，祛寒止痛的功能。近幾年來國內(nèi)外的藥理研究發(fā)現(xiàn)，肉桂的活化成分有降血糖、抗氧化、抗腫瘤以及神經(jīng)保護(hù)等作用。肉桂多酚是從肉桂皮提取的多酚類物質(zhì)，目前已鑒定出肉桂多酚主要為類黃酮類及其多聚體化合物，有著抗氧化改善肝細(xì)胞的作用[4]。研究表明，黃酮類化合物對(duì)于保護(hù)急性肝損傷有著良好的效果[5]。本實(shí)驗(yàn)主要研究肉桂多酚對(duì)急性酒精肝損傷的保護(hù)功能以及可能的作用機(jī)制，為肉桂多酚解酒護(hù)肝的作用的研究提供一定的理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥物

肉桂多酚（含量100%，西安明朗生物科技有限公司）；護(hù)肝片成分為柴胡、菌陳、板藍(lán)根、五味子、豬膽粉和綠豆（批準(zhǔn)文號(hào)為國藥準(zhǔn)字Z20003336，批號(hào)201709040，人體推薦用量是1.4 g，黑龍江葵花藥業(yè)股份有限公司）；50度北京紅星二鍋頭（批號(hào)20180305，北京紅星股份有限公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

普通級(jí)健康雄性昆明種小鼠54只，體質(zhì)量24～35 g，由廣州市白云區(qū)江高文毅實(shí)驗(yàn)養(yǎng)殖場(chǎng)提供，生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（粵）2017-0042，動(dòng)物被放置在室溫 18～22 ℃、相對(duì)濕度65%的環(huán)境中飼養(yǎng)，自然明暗周期。

1.3 試劑

丙二醛（MDA）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒，均購于南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20180727，20180803，20180808，20180809。

1.4 主要儀器

G9206型Carl Zeiss光學(xué)顯微鏡（蔡司光學(xué)儀器國際貿(mào)易有限公司）；HF90型恒溫箱（上海力申科學(xué)儀器有限公司）；5811型臺(tái)式離心機(jī)（德國Eppendorf公司）；DK-8AB型恒溫水浴箱（上海默西科學(xué)儀器有限公司）；TS-1型漩渦混勻器（海門其林貝爾儀器制造有限公司）；WKYⅢ-2微量移液器（上海寶予德科學(xué)儀器有限公司）；Prism R型酶標(biāo)儀（廣州云星科學(xué)儀器有限公司）。

1.5 方法

1.5.1 分組

54只小鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、護(hù)肝片陽性對(duì)照組（400 g/kg）和肉桂多酚低、中、高（150、300、600 mg/kg）劑量組，每組9只。

1.5.2 小鼠急性酒精性肝損傷的制備

造模參考已有文獻(xiàn)[6-8]并根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果做適當(dāng)調(diào)整。各組小鼠均灌胃給藥，正常組和模型組給予等體積蒸餾水。給藥體積均為5 mg/kg，每日2次，每天上午11時(shí)和下午5時(shí)30分給藥，各組灌胃前均禁食不禁水5 h，連續(xù)灌胃14 d。第14 d最后一次給藥1 h后，正常組給予等量蒸餾水灌胃，其他各組小鼠給予50度紅星二鍋頭白酒（14 mg/kg）灌胃制備急性酒精性肝損傷模型。

1.6 樣品制備與測(cè)定

1.6.1 血清學(xué)生化指標(biāo)的測(cè)定

第14 d給酒后禁食不禁水16 h，眼球取血1.5 ml置于離心管內(nèi)，37 ℃恒溫30 min后，離心（3 500 r/min）10 min，小心吸取血清，嚴(yán)格按試劑盒說明檢測(cè)ALT、AST、MDA及SOD的含量。

1.6.2 肝臟指數(shù)的測(cè)定

頸椎脫臼處死小鼠后，取出肝臟，用4 ℃生理鹽水洗凈，濾紙吸干，稱重，計(jì)算肝臟指數(shù)（LI）（LI=肝臟質(zhì)量/體質(zhì)量×100%）。

1.6.3 肝組織病理形態(tài)學(xué)檢測(cè)

取小鼠肝臟左葉中部，大小不超過1 cm3，置于4%多聚甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，切片后HE染色，觀察肝組織病理學(xué)變化。

1.6.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 16.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果均以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示（n為樣本量，組間比較采用單因素方差分析，各指標(biāo)間比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義）。

2 結(jié)果

2.1 小鼠急性肝損傷后肝臟指數(shù)的變化

與空白組相比，模型組的肝臟指數(shù)明顯增加（P<0.01）。與模型組相比，肉桂多酚高劑量組肝臟指數(shù)降低，但其差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，肉桂多酚中、低劑量組肝臟指數(shù)降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，表1）。

2.2 小鼠急性肝損傷后血清轉(zhuǎn)氨酶的變化

與空白組相比，模型組的ALT、AST 活性顯著升高，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P<0.05 ）。肉桂多酚各劑量組，護(hù)肝片陽性對(duì)照組與模型組相比，ALT、AST水平均降低，其中護(hù)肝片陽性對(duì)照組和肉桂多酚高、中劑量組均明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01，表2）。

2.3 小鼠急性肝損傷后血清SOD、MDA的變化

與空白組相比，模型組血清中的MDA含量明顯升高，SOD活力下降，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或P<0.01）。與模型組相比，肉桂多酚高、中劑量組和護(hù)肝片陽性對(duì)照組血清中MDA水平降低，SOD含量增加，具有顯著差異性（表3）。

2.4 小鼠急性肝損傷后肝組織病理形態(tài)學(xué)的變化

肉眼觀察空白組肝臟表面呈紅褐色，富有光澤。模型組與空白組相比，體積增大，邊緣圓鈍，部分肝臟色黃且有油膩感。護(hù)肝片和肉桂多酚各劑量組介于正常組與模型組之間，肝臟被膜較光滑，顏色較正常，切面無油膩感。經(jīng)過HE染色后，可見空白組肝細(xì)胞以中央靜脈為中心放射狀排列，條索排列規(guī)整，肝細(xì)胞胞核淺藍(lán)色且較大，胞質(zhì)呈粉紅色，小葉結(jié)構(gòu)正常。酒精性肝損傷模型組肝細(xì)胞明顯腫脹，胞內(nèi)可見氣球樣變，胞質(zhì)疏松化，肝索排列紊亂，同時(shí)可見炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。肉桂多酚高、中劑量組肝細(xì)胞輕度腫脹，肝索排列較整齊，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)減輕，低劑量組出現(xiàn)明顯的變性壞死。護(hù)肝片陽性對(duì)照組肝細(xì)胞形態(tài)與空白組類似，未見變性，壞死等情況（圖1）。

3 討論

白酒灌胃法為誘導(dǎo)小鼠急性酒精性肝損傷的一種常用方法，它具有死亡率低、符合人類飲酒習(xí)慣等優(yōu)點(diǎn)。酒精攝入后造成肝損害，其明顯特征是細(xì)胞酶外漏至血漿[9]。本實(shí)驗(yàn)采取一次大劑量白酒灌胃法誘導(dǎo)出小鼠急性酒精性肝損傷模型，禁食16 h，取血，血清的轉(zhuǎn)氨酶ALT、AST活力及MDA含量顯著升高，且SOD活力顯著降低。病理組織學(xué)檢查提示，肝細(xì)胞呈現(xiàn)不同類型和不同程度的變性改變并伴有炎癥，表明本實(shí)驗(yàn)成功制備了小鼠急性酒精性肝損傷模型。

酒精性肝損傷的致病機(jī)制與氧化應(yīng)激關(guān)系緊密，而多酚具有較強(qiáng)的還原性，可清除生物體內(nèi)的超氧自由基，其清除自由基能力和總酚含量呈線性正相關(guān)，并通過抑制脂質(zhì)過氧化而保護(hù)肝腎，動(dòng)物和人體實(shí)驗(yàn)證明肉桂多酚具有抗氧化的作用[10]。肉桂多酚顯著降低血清中氧化應(yīng)激標(biāo)記物水平，同時(shí)，還顯著降低NF-kB轉(zhuǎn)錄因子的活力進(jìn)而抑制一氧化氮合成酶iNOS基因的表達(dá)[8]。

本實(shí)驗(yàn)將肉桂多酚用于酒精性肝損傷的防治，結(jié)果顯示低、中、高劑量的肉桂多酚對(duì)急性酒精肝損傷都有保護(hù)作用，但中、高劑量的保護(hù)作用顯著優(yōu)于低劑量組。其中高劑量組肝臟指數(shù)降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，推測(cè)可能與高劑量的肉桂多酚可導(dǎo)致中毒反應(yīng)有關(guān)。因此，肉桂多酚對(duì)急酒精性肝損傷的保護(hù)作用存在一定的量效關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)有效的劑量范圍為300～600 mg/kg，但由于實(shí)驗(yàn)樣本有限，尚不能得出最適劑量。

綜上所述，肉桂多酚能有效提高肝組織抗氧化能力，減少乙醇代謝過程中產(chǎn)生的自由基，有效穩(wěn)定氧化與抗氧化的動(dòng)態(tài)平衡，進(jìn)而減輕氧化應(yīng)激對(duì)肝組織產(chǎn)生的脂質(zhì)過氧化損傷，保護(hù)肝細(xì)胞膜正常的通透性，降低血清轉(zhuǎn)氨酶的活性，減輕肝損傷過程中的病理改變，維持正常的肝功能。其確切的作用機(jī)制，如是否降低NF-kB轉(zhuǎn)錄因子的活力等還有待進(jìn)一步深入研究。

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