鄔崇華，熊 婷，陳開(kāi)豐，陳 彪，毛輝榮，劉三鳳

（江西農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，江西 南昌330045）

【研究意義】山麻鴨原產(chǎn)地位于福建省龍巖市，故又稱(chēng)龍巖山麻鴨，是我國(guó)南方飼養(yǎng)量最大的小型蛋鴨品種，具有體型小、早熟、產(chǎn)蛋多、蛋質(zhì)量適中、適應(yīng)性強(qiáng)和飼料報(bào)酬高等特點(diǎn)。由于養(yǎng)殖資源的日益短缺和新《環(huán)境保護(hù)法》的實(shí)施，傳統(tǒng)的散養(yǎng)模式正逐步向集約化籠養(yǎng)模式轉(zhuǎn)變，且取得了不錯(cuò)的進(jìn)展，因此蛋鴨的繁殖方式也由自然交配轉(zhuǎn)為人工授精[1-2]。提高公鴨的繁殖性能可以提高種公鴨的利用率和種蛋受精率，從而減少種公鴨的飼養(yǎng)量，降低生產(chǎn)成本，增加生產(chǎn)效益。本試驗(yàn)所選用的E時(shí)代魚(yú)肝油中含有豐富的維生素A、維生素D、維生素E、飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸。【前人研究進(jìn)展】研究表明，維生素A、維生素E和不飽和脂肪酸對(duì)畜禽的繁殖性能有顯著的改善作用，能夠提高公禽的精液品質(zhì)和母禽的受精率[3-9]。魚(yú)肝油中含有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，可以改善種鴨的繁殖性能?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】在實(shí)際生產(chǎn)中，魚(yú)肝油常用于維生素A、維生素D缺乏癥，強(qiáng)化維生素E，加快畜禽新陳代謝，促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育，強(qiáng)壯體質(zhì)，提高繁殖性能，增加蛋質(zhì)量。目前對(duì)于魚(yú)肝油用來(lái)提高畜禽繁殖性能的文章鮮有報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】本試驗(yàn)以山麻鴨公鴨為研究對(duì)象，通過(guò)在日糧中添加不同量的魚(yú)肝油來(lái)研究其對(duì)公鴨繁殖性能的影響，為實(shí)際生產(chǎn)中魚(yú)肝油應(yīng)用于種公鴨繁殖性能的提升提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)選用實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的已進(jìn)行選擇的64周齡山麻鴨公鴨24只和30周齡山麻鴨母鴨64只。公鴨飼料采用南昌華達(dá)集團(tuán)生產(chǎn)的育成鴨全價(jià)料，母鴨采用同一公司生產(chǎn)的蛋鴨料，每天早晚各飼喂1次。試驗(yàn)鴨飼養(yǎng)于江西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院動(dòng)物房，均采用3層階梯式單籠飼養(yǎng)，光照時(shí)間16 h/d，其他飼養(yǎng)管理嚴(yán)格按照種鴨場(chǎng)要求進(jìn)行。魚(yú)肝油為中鯊動(dòng)物保健品（廈門(mén)）有限公司生產(chǎn)的E時(shí)代魚(yú)肝油。

試驗(yàn)器具和試劑主要包括鴨授精輸精器、光學(xué)顯微鏡、25×16型血細(xì)胞計(jì)數(shù)板、恒溫水浴鍋、恒溫載物臺(tái)、集精杯、電子天平、振蕩機(jī)、1.5 mL EP管、50 mL EP管、生理鹽水、無(wú)水乙醇、體積分?jǐn)?shù)75%酒精、飽和龍膽紫染液、35%甲醛、碳酸氫鈉、高錳酸鉀。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)開(kāi)始前3周為公鴨采精訓(xùn)練，每隔2 d訓(xùn)練1次，淘汰不能采出精液或精液品質(zhì)不良的公鴨，在此基礎(chǔ)上選擇24只公鴨隨機(jī)分成4組，分別為對(duì)照組和試驗(yàn)Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組，每組6只，對(duì)應(yīng)日糧中分別添加0 mL/kg、7.2 mL/kg、10.8 mL/kg和14.4 mL/kg E時(shí)代魚(yú)肝油。另外，隨機(jī)選擇64只33周齡母鴨隨機(jī)分成4組與公鴨對(duì)應(yīng)，每組16只。試驗(yàn)從2018年11月18日開(kāi)始至2018年12月28日，共持續(xù)41 d。試驗(yàn)正式開(kāi)始后第1天對(duì)公鴨進(jìn)行采精，并進(jìn)行精液品質(zhì)檢測(cè)。正式試驗(yàn)開(kāi)始后每隔2 d對(duì)公鴨采精1次，每隔5 d進(jìn)行1次精液品質(zhì)檢測(cè)，即每隔1次采精，進(jìn)行1次精液品質(zhì)檢測(cè)，試驗(yàn)期間共測(cè)定6次精液品質(zhì)。

另外，在第22天采完精液后，分別將每組的各公鴨的精液混合，用于對(duì)各組的試驗(yàn)?zāi)给喌娜斯ぽ斁以诘?3天繼續(xù)采精輸精，即第1次授精需要連續(xù)輸2 d。人工輸精的間隔為5 d，這樣正好每次采集到的精液將分別逐次用于精液品質(zhì)檢測(cè)和人工輸精。從第24天開(kāi)始收集種蛋，種蛋每收集3 d入孵1次，直到試驗(yàn)結(jié)束。在每次入孵后的第7天進(jìn)行照蛋，撿出無(wú)精蛋和死胚蛋，并記錄，計(jì)算種蛋受精率。試驗(yàn)期間共輸精4次，輸精間隔為5 d，計(jì)算每次輸精后第3天起連續(xù)3 d和連續(xù)6 d的種蛋的受精率。

試驗(yàn)期間記錄每天每組的采食量。在試驗(yàn)開(kāi)始前和結(jié)束后對(duì)公鴨進(jìn)行稱(chēng)質(zhì)量。

1.3 采精和輸精方法

人工采精采用背腹式按摩法，輸精采用輸卵管口外翻法，輸精時(shí)間為08:00—11:30。

1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.4.1 精液品質(zhì)及種蛋受精率 測(cè)定精液量（mL）、精子活力、精子密度（億/mL）和精子畸形率（%）。

精子活力：在顯微鏡中觀察，采用0～1.0的十級(jí)評(píng)分法[10]。取20 μL生理鹽水（0.9%，39℃預(yù)熱）于載玻片上，然后加入20 μL新鮮精液，涂片，蓋上蓋玻片，然后立刻鏡檢。按以下標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分：精子呈螺旋翻滾狀態(tài)可評(píng)0.8～10，代表精子活力很高；多數(shù)精子呈直線前進(jìn)，運(yùn)動(dòng)速度快，可評(píng)為0.5～0.8，代表精子活力高；多數(shù)精子呈圓周運(yùn)動(dòng)，運(yùn)動(dòng)緩慢可評(píng)0.3～0.5，代表精子活力低；多數(shù)精子擺動(dòng)或漂浮可評(píng)為0.1～0.3，代表精子活力很差或死亡。

精子密度：運(yùn)用血細(xì)胞計(jì)數(shù)法。為了準(zhǔn)確統(tǒng)計(jì)精子數(shù)量，在數(shù)精子數(shù)時(shí)先將精液按1∶1 000的倍數(shù)稀釋。鏡檢所采用的精液稀釋液成分參考辛清武等[11]使用的鴨精液稀釋液。精液稀釋液的配制：NaHCO310 g，35%的甲醛2 mL，飽和龍膽紫溶液1 mL，無(wú)水酒精1 mL，加生理鹽水至200 mL。稀釋液中的NaHCO3可溶解精液中的粘液，35%的甲醛及無(wú)水酒精有殺死和抑制精子活動(dòng)的作用，龍膽紫可提高鏡檢時(shí)的清晰度。稀釋方法采用分步稀釋法。精液和稀釋液的混合液用振蕩機(jī)混合均勻，減小誤差。精液稀釋完后用移液槍分別吸取10 μL稀釋液混合液于上下2個(gè)計(jì)數(shù)室中，靜置1 min左右，分別讀取上下2個(gè)計(jì)數(shù)室的精子數(shù)，取平均值。

精子畸形率：取精液稀釋液20 μL于載玻片上，進(jìn)行抹片，并用蓋玻片蓋上。靜置幾小時(shí)，待自然干燥后，將制好的抹片置于顯微鏡下，觀察蓋玻片上、下、左、右4個(gè)區(qū)域不同視野的精子，共200個(gè)，數(shù)出畸形精子數(shù)，求出畸形率?；尉又饕幸韵聨追N：尾部盤(pán)繞、斷尾、無(wú)尾、盤(pán)繞頭、鉤狀頭、破裂頭、膨脹頭等。

1.4.2 公鴨采精時(shí)的反應(yīng)強(qiáng)度評(píng)分及精清量評(píng)分 公鴨進(jìn)行采精時(shí)，對(duì)每羽公鴨的反應(yīng)強(qiáng)度和精清量進(jìn)行評(píng)分。反應(yīng)強(qiáng)度分3個(gè)層次：很強(qiáng)烈、強(qiáng)烈和一般，分別對(duì)應(yīng)3個(gè)評(píng)分：3、2、1。反應(yīng)強(qiáng)度評(píng)分可以很好地反映公鴨對(duì)于人工采精時(shí)按摩的反射程度，使采精人員對(duì)公鴨按摩后的反應(yīng)程度有一個(gè)預(yù)判，可以預(yù)測(cè)到公鴨是否能采出精液，并可以避免公鴨反應(yīng)過(guò)于強(qiáng)烈而收集不到精液的情況。

精清量評(píng)分是觀察采集的精液中精清所占的比例，也是分3個(gè)等級(jí)：大量、中等量和少量，評(píng)分：3、2、1。精清偏少的話(huà)為少量，精清大約占一半為中等量精清，精清占一半以上為大量。精清量評(píng)分可以幫助精液檢測(cè)人員更好地預(yù)測(cè)精液密度，從而據(jù)此選擇更合適的稀釋比例。因?yàn)榫褐芯辶吭蕉啵用芏染驮叫　?/p>

1.4.3 公鴨每日耗料量、公鴨試驗(yàn)前后體質(zhì)量變化 試驗(yàn)期間每天記錄每組公鴨的耗料量。在試驗(yàn)開(kāi)始前對(duì)所有公鴨進(jìn)行體質(zhì)量的測(cè)定，并在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)再次稱(chēng)量，統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)前后體質(zhì)量的變化情況。

1.5 統(tǒng)計(jì)與分析

運(yùn)用Excel 2013軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)初步整理后，采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，多重比較方法采用LSD法，結(jié)果以（平均值±標(biāo)準(zhǔn)差）表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 魚(yú)肝油對(duì)山麻鴨精液品質(zhì)的影響

對(duì)6次精液品質(zhì)測(cè)定的結(jié)果分次進(jìn)行組間差異性分析，得出不同魚(yú)肝油添加量對(duì)籠養(yǎng)山麻鴨精液品質(zhì)的影響，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 各組精液品質(zhì)測(cè)定及公鴨采精時(shí)反應(yīng)強(qiáng)度評(píng)分結(jié)果Tab.1 Semen quality test results of each group

續(xù)表1

由表1可知，6次精液品質(zhì)的測(cè)定結(jié)果中，在第4次和第6次精液品質(zhì)檢測(cè)時(shí)，第Ⅱ、Ⅲ組的精液量和精子密度與對(duì)照組出現(xiàn)顯著差異（P＜0.05）。第2次精液品質(zhì)測(cè)定中，第Ⅲ組的精子活力顯著高于第Ⅰ組，在第4次精液品質(zhì)檢測(cè)時(shí)第Ⅱ、Ⅲ組的精子活力均顯著高于對(duì)照組，且在第6次精液品質(zhì)檢測(cè)中，各試驗(yàn)組精子活力均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），其余幾次測(cè)定結(jié)果各組差異均不顯著（P＞0.05）。此外，各組在精子畸形率、有效精子數(shù)、公鴨采精反應(yīng)強(qiáng)度評(píng)分、精清量評(píng)分等指標(biāo)上均無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

2.2 魚(yú)肝油對(duì)種蛋受精率的影響

各組以每天收集的種蛋的受精率為變量，分別統(tǒng)計(jì)分析4次人工輸精后3 d和6 d（以輸精日為第1天，輸精后第3天為收集種蛋的第1天）的種蛋的受精率，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 各組受精率統(tǒng)計(jì)Tab.2 Fertilization rate and hatching rate of each group

從表2可以看出，籠養(yǎng)山麻鴨采用人工授精方法可以獲得較好的受精率，特別是前3 d，各組受精率均為90%以上。后3 d的受精率在各組表現(xiàn)不一，對(duì)照組和試驗(yàn)Ⅲ組水平較高，Ⅰ組和Ⅱ組出現(xiàn)了受精率快速下降的情況，導(dǎo)致其6 d的平均數(shù)較低，但各組之間沒(méi)有顯著性差異。

2.3 魚(yú)肝油對(duì)公鴨采食量和體質(zhì)量的影響

各組采食量與試驗(yàn)前后體質(zhì)量變化如表3所示。由表3可知，第Ⅲ組的采食量最高，第Ⅰ組的采食量最低，但是各組的采食量差異不顯著（P＞0.05）。試驗(yàn)結(jié)束后，各組公鴨的體質(zhì)量均有上升，但是體質(zhì)量變化差異不顯著（P＞0.05）。

表3 各組采食量與試驗(yàn)前后體質(zhì)量變化Tab.3 Fertilization rate of each group and weight change before and after the test

3 討論與結(jié)論

3.1 魚(yú)肝油對(duì)山麻鴨精液品質(zhì)的影響

試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)E時(shí)代魚(yú)肝油可以顯著提高山麻鴨公鴨的精液量和精子活力，但同時(shí)降低了精子密度。試驗(yàn)第Ⅱ組和Ⅲ組中的10.8 mL/kg和14.4 mL/kg的E時(shí)代魚(yú)肝油添加量對(duì)公鴨的精液量提升顯著。精液是由精清和精子組成，試驗(yàn)中各試驗(yàn)組的精液量提升，精子密度降低，且各組有效精子數(shù)在每次測(cè)定結(jié)果中都無(wú)顯著差異，說(shuō)明E時(shí)代魚(yú)肝油能增加精液的精清量，而精清主要來(lái)自睪丸精細(xì)管、附睪和輸精管，說(shuō)明E時(shí)代魚(yú)肝油可能主要作用于上述幾個(gè)器官來(lái)影響公鴨的精液量。

從試驗(yàn)結(jié)果可以看出，公鴨個(gè)體間精液品質(zhì)差異很大，有部分個(gè)體穩(wěn)定性差。在第2次精液品質(zhì)檢測(cè)結(jié)果中，試驗(yàn)Ⅰ組的精子活力無(wú)征兆性的顯著低于試驗(yàn)Ⅲ組，并與其他各組間無(wú)顯著差異。且試驗(yàn)處于寒冷的冬季，溫度的降低，對(duì)精子活力產(chǎn)生了不同程度的影響。對(duì)照組公鴨的精子密度一直是最高的，主要是因?yàn)槠渲?只公鴨的精子密度出奇的高，將對(duì)照組整體的精子密度水平拉高了。在第5次精液品質(zhì)檢測(cè)結(jié)果中，對(duì)照組公鴨的精液量無(wú)故增加了50%以上，縮小了與各試驗(yàn)組的差距，直接和間接導(dǎo)致各組之間精液量和精子密度差異不顯著。這是因?yàn)樵诰浩焚|(zhì)檢測(cè)的試驗(yàn)過(guò)程中，供試公鴨中有個(gè)別出現(xiàn)精液品質(zhì)突然變化非常大，帶動(dòng)了其試驗(yàn)組整體的數(shù)據(jù)變化。除以上討論的精液品質(zhì)指標(biāo)外，試驗(yàn)各組其他精液品質(zhì)均差異不顯著（P＞0.05）。

該試驗(yàn)試驗(yàn)期間共對(duì)各組山麻鴨公鴨采精15次，精液品質(zhì)檢測(cè)共6次，發(fā)現(xiàn)山麻鴨公鴨的平均精液量為（0.30±0.11）mL，精子密度為（28.80±13.79）億/mL，精子畸形率為（8.50±3.03）%，精子活力為0.83±0.11。試驗(yàn)中對(duì)照組所收集到的精液量與郭海寧等對(duì)山麻鴨進(jìn)行人工采精時(shí)的收集到的精液量0.20～0.25 mL相近，說(shuō)明該試驗(yàn)數(shù)據(jù)可靠，而添加魚(yú)肝油的各試驗(yàn)組采集的精液量明顯高于對(duì)照組，表明了E時(shí)代魚(yú)肝油具有增加山麻鴨精液量的作用。山麻鴨的精液量要遠(yuǎn)低于番鴨，但是精子密度山麻鴨更大[12-14]。另外該試驗(yàn)所采出的山麻鴨的精液量遠(yuǎn)高于蘇郵1號(hào)成年公鴨的（0.17±0.05）mL，山麻鴨的精子畸形率明顯低于蘇郵1號(hào)的12.96%，2個(gè)品種的蛋鴨的精子活力和精子密度差異不大[15]。山麻鴨的精液量和精子密度都遠(yuǎn)大于斑嘴鴨[16]。對(duì)于同為水禽的鵝來(lái)說(shuō)，山麻鴨的精液品質(zhì)更高，但是山麻鴨的精液量和正常精子比例要低于雞[17-19]。E時(shí)代魚(yú)肝油中含有豐富的維生素A、維生素E、飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸，這些營(yíng)養(yǎng)成分都能顯著改善畜禽的繁殖性能[3-9，20-22]。

3.2 魚(yú)肝油對(duì)種蛋受精率的影響

影響種鴨精液品質(zhì)的因素頗多，包括品種、遺傳、個(gè)體差異、營(yíng)養(yǎng)與飼養(yǎng)環(huán)境、采精頻率等[2]。鴨的人工授精是近代種禽繁殖業(yè)中普遍采用的技術(shù)措施之一[23]。本試驗(yàn)輸精方式為人工輸精，影響人工授精中種蛋受精率的因素除了人工輸精的水平外有很多，包括公鴨的精液品質(zhì)，輸精間隔，精液稀釋倍數(shù)，母鴨的蛋殼質(zhì)量等等[24]。馬銘龍等[25]提出公鵝精液品質(zhì)對(duì)繁殖性能有直接影響，選擇精液品質(zhì)好的公鵝有利于提高獅頭鵝的受精率和產(chǎn)雛數(shù)。該試驗(yàn)中各試驗(yàn)組與對(duì)照組相比種蛋受精率的差異不顯著（P＞0.05），說(shuō)明E時(shí)代魚(yú)肝油對(duì)于種蛋的受精率影響不顯著。雖然目前鴨人工輸精技術(shù)的成熟度不高，效果不穩(wěn)定[26]，但是本試驗(yàn)還是取得比較良好的受精率。本試驗(yàn)中的種蛋平均受精率為（86.75±12.60）%，與田河等的結(jié)果類(lèi)似，高于陳巖峰等[4，27]的（76.38±2.32）%。

3.3 魚(yú)肝油對(duì)公鴨采食量和體質(zhì)量的影響

從試驗(yàn)結(jié)果可以看出，雖然各組的采食量與體質(zhì)量差異不顯著，但是隨著E時(shí)代魚(yú)肝油添加量的增加，各試驗(yàn)組公鴨的采食量有上升的趨勢(shì)，其中第Ⅲ組的公鴨耗料量和體質(zhì)量的增加量均為最高，說(shuō)明E時(shí)代魚(yú)肝油可能對(duì)飼料的風(fēng)味有影響，從而影響公鴨的采食量，進(jìn)而影響其體質(zhì)量變化。

通過(guò)本試驗(yàn)可以看出，10.8 mL/kg和14.4 mL/kg的魚(yú)肝油可以明顯提高山麻鴨種公鴨的精液量和精子活力，但是精子密度有所降低，對(duì)受精率無(wú)顯著影響。