葉偉強(qiáng)　梁知銳　徐耀祥

【摘要】 目的探討分析葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）活性與地中海貧血（地貧）之間的關(guān)系。 方法? ?選取行血紅蛋白電泳檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的150例患者作為地貧組， 另選取同期接受血紅蛋白電泳檢測(cè)結(jié)果顯示正常的150例患者作為對(duì)照組。兩組均進(jìn)行血常規(guī)、G6PD活性、血紅蛋白電泳檢測(cè)。比較地貧組與對(duì)照組 G6PD活性， 對(duì)照組不同血常規(guī)MCV值的G6PD活性。結(jié)果? ?地貧組患者根據(jù)檢測(cè)結(jié)果分為血紅蛋白H（HbH）病組（33例）、輕型地貧組（95例）、重型地貧組（22例）。HbH病組、輕型地貧組、重型地貧組的G6PD活性分別為（5207.00±555.75）、（3397.47±686.85）、（5298.60±736.46）， 均高于對(duì)照組的（2567.21±615.76）， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。HbH病組與重型地貧組G6PD活性均高于輕型地貧組， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;但HbH病組與重型地貧組G6PD活性比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。對(duì)照組患者根據(jù)血常規(guī)MCV值分為MCV異常組（50例， 血常規(guī)MCV值小于正常參考值）和MCV正常組（100例， 血常規(guī)MCV值在正常參考值范圍內(nèi)）。MCV異常組患者經(jīng)地中海貧血基因檢測(cè)確診為地中海貧血患者或地中海貧血基因攜帶者。MCV異常組的G6PD活性（2775.57±584.59）高于MCV正常組的（2119.05±227.20）， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論? ?G6PD活性水平可作為輔助診斷地中海貧血及分型的輔助依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 葡萄糖-6-磷酸脫氫酶;血紅蛋白電泳;地中海貧血

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.06.043

地中海貧血又稱珠蛋白生成障礙性貧血， 是一種由基因缺陷導(dǎo)致血紅蛋白中至少一種珠蛋白合成缺乏或者不足， 引起的病理狀態(tài)， 它是一組常染色體不完全顯性遺傳性疾病。地中海貧血多見于我國(guó)長(zhǎng)江以南地區(qū)， 其中廣東、廣西、四川為高發(fā)區(qū)。根據(jù)廣東地中海貧血流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)， 廣東地區(qū)地中海貧血的攜帶率為8.53%， 地中海貧血的攜帶率為2.54%[1]。臨床中， 對(duì)地中海貧血患者的篩查判斷主要采用血常規(guī)檢查聯(lián)合血紅蛋白電泳分型方法進(jìn)行判斷， 并以基因檢測(cè)結(jié)果為臨床最終判斷確診的標(biāo)準(zhǔn)方法。其中， G6PD是紅細(xì)胞內(nèi)葡糖糖代謝三大途徑之一磷酸戊糖代謝途徑上的酶， 它主要存在于機(jī)體紅細(xì)胞內(nèi)， 并參與葡萄糖分解代謝反應(yīng)， 在這一代謝變化過程中會(huì)產(chǎn)生一種叫還原型輔酶Ⅱ的物質(zhì)， 該物質(zhì)對(duì)谷胱甘肽的還原態(tài)具有保持作用， 從而起到保護(hù)紅血球免受氧化物質(zhì)的威脅的效果。當(dāng)前， 臨床對(duì)G6PD檢測(cè)主要用于蠶豆病和藥物性溶血性貧血的診斷， 并且具有較好的作用和效果。但有研究顯示[2]， 在臨床診斷過程中發(fā)現(xiàn)地中海貧血患者G6PD活性明顯高于正常人群， 同時(shí)由于地中海貧血患者的機(jī)體紅細(xì)胞壽命約為正常細(xì)胞的50%， 因此， 其機(jī)體紅細(xì)胞更新速度與正常人群相比明顯較快等有著直接的關(guān)系。因此， 本文以在本院進(jìn)行血紅蛋白電泳檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的150例患者為研究對(duì)象， 對(duì)其G6PD活性進(jìn)行檢測(cè)分析， 以探討G6PD活性與地中海貧血的關(guān)系?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 收集2015年1月～2018年12月在本院進(jìn)行血紅蛋白電泳檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性的150例患者作為地貧組， 年齡2～50歲， 平均年齡（27.9±8.7）歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：血紅蛋白電泳異常、蠶豆病、血液病、缺鐵性貧血及藥物溶血者。另選取同期在本院接受血紅蛋白電泳檢測(cè)結(jié)果顯示正常的150例患者作為對(duì)照組， 年齡2～50歲， 平均年齡（28.1±8.7）歲， 均無(wú)地中海貧血與G6PD缺陷家族病史。

1. 2 方法

1. 2. 1 標(biāo)本的采集及處理 地貧組和對(duì)照組研究對(duì)象均于接受檢測(cè)前1晚20：00后禁食并停止服用藥物， 于次日凌晨8：00～10：00抽取靜脈血4 ml于含分離膠和促凝劑的黃頭管及2 ml EDTA-K2抗凝的紫頭管， 黃頭管靜置>30 min， 待血液凝固， 4000 r/min離心10 min， 分離血清進(jìn)行鐵蛋白檢測(cè);紫頭管充分混勻后， 進(jìn)行血常規(guī)、G6PD、血紅蛋白電泳檢測(cè)。

1. 2. 2 儀器與試劑 ①血紅蛋白檢測(cè)：海倫娜spife3000全自動(dòng)電泳儀及其配套試劑， 方法為瓊脂糖凝膠電泳。②血常規(guī)檢測(cè)：希森美康SYSMEX XN-1000全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀及其配套試劑。③鐵蛋白檢測(cè)：新產(chǎn)業(yè)全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀MAGLUMI 2000 Plus及其相關(guān)配套試劑， 用于刷選缺鐵性貧血。④G6PD檢測(cè)：西門子全自動(dòng)生化分析儀ADVIA 1800， 試劑由北京華宇億康生物工程技術(shù)有限公司提供。

1. 3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) 比較地貧組與對(duì)照組 G6PD活性;對(duì)照組不同血常規(guī)MCV值的G6PD活性。①HbH?。貉t蛋白電泳見HbH區(qū)帶， HbH在5%～40%;②輕型地中海貧血：HbA2定量>3.5%;③重型地中海貧血：血紅蛋白電泳HbF>30%;④G6PD參考范圍為1300～3600 U/L;⑤MCV正常參考值為82～100 fl。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn);對(duì)于符合正態(tài)分析的多組資料采用SNK-q檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 地貧組與對(duì)照組 G6PD活性比較 地貧組患者根據(jù)檢測(cè)結(jié)果分為HbH病組（33例）、輕型地貧組（95例）、重型地貧組（22例）。HbH病組、輕型地貧組、重型地貧組的G6PD活性分別為（5207.00±555.75）、（3397.47±686.85）、（5298.60±736.46）， 均高于對(duì)照組的（2567.21±615.76）， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。HbH病組與重型地貧組G6PD活性均高于輕型地貧組， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;但HbH病組與重型地貧組G6PD活性比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

2. 2 對(duì)照組不同血常規(guī)MCV值的G6PD活性比較 對(duì)照組患者根據(jù)血常規(guī)MCV值分為MCV異常組（50例， 血常規(guī)MCV值小于正常參考值）和MCV正常組（100例， 血常規(guī)MCV值在正常參考值范圍內(nèi)）。MCV異常組患者經(jīng)地中海貧血基因檢測(cè)確診為地中海貧血患者或地中海貧血基因攜帶者。MCV異常組的G6PD活性（2775.57±584.59）高于MCV正常組的（2119.05±227.20）， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

3 討論

地中海貧血是一種遺傳性的溶血性貧血性疾病， 地中海貧血患者的紅細(xì)胞壽命是正常細(xì)胞的50%左右， 紅細(xì)胞更新速度比正常人快[3]， 地中海貧血患者代償產(chǎn)生較多的新生年輕紅細(xì)胞。臨床中， 對(duì)輕型地中海貧血患者進(jìn)行檢查分析顯示， 其臨床癥狀以慢性溶血性貧血表現(xiàn)為主， 對(duì)其進(jìn)行血液學(xué)檢查可顯示存在小細(xì)胞低色素性貧血， 同時(shí)患者的血紅蛋白電泳檢測(cè)顯示存在HbA2改變， 其中， 以α地中海貧血病癥患者的血紅蛋白電泳檢測(cè)結(jié)果降低與β地中海貧血患者的血紅蛋白電泳檢測(cè)結(jié)果升高變化為主要特征， 并且在醫(yī)院的產(chǎn)科門診患者中， 重型地中海貧血患者多表現(xiàn)為Barts水腫胎， 即在患者的妊娠周期達(dá)到20周左右時(shí)會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重缺氧導(dǎo)致的全身水腫以及心臟衰竭導(dǎo)致胎兒娩出前死亡發(fā)生等情況存在， 還會(huì)導(dǎo)致患者出現(xiàn)妊娠期高血壓病癥， 對(duì)其產(chǎn)生較大的危害影響;而β重型患者的嚴(yán)重貧血情況一般會(huì)出現(xiàn)在患者出生后6個(gè)月時(shí)， 需要通過終生定期輸血與排鐵維持治療等， 對(duì)患者的生命安全進(jìn)行維護(hù)性救治， 其中， 骨髓移植是進(jìn)行β重型地中海貧血患者根治治療的主要方法， 并且多數(shù)患兒可能在5歲前出現(xiàn)死亡， 少數(shù)繼續(xù)生存患者的生存質(zhì)量均表現(xiàn)極差， 對(duì)患者本身以及整個(gè)家庭所造成的負(fù)擔(dān)影響均十分大。另一方面， 由于該疾病為遺傳性疾病， 出現(xiàn)新發(fā)突變的幾率幾乎很低， 為減少該疾病對(duì)患者及家庭的不利影響， 對(duì)妊娠期孕婦開展有效的產(chǎn)前檢查， 對(duì)產(chǎn)前檢查顯示存在重型地中海貧血病癥胎兒， 通過終止妊娠方法以避免其危害影響， 從而減少該疾病對(duì)患者家庭及社會(huì)產(chǎn)生的負(fù)擔(dān)和影響， 是當(dāng)前臨床進(jìn)行該疾病控制的有效方法。

本研究結(jié)果顯示， HbH病組、輕型地貧組、重型地貧組的G6PD活性分別為（5207.00±555.75）、（3397.47±686.85）、（5298.60±736.46）， 均高于對(duì)照組的（2567.21±615.76）， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。G6PD是細(xì)胞年齡依賴性酶[4]， 年輕的紅細(xì)胞G6PD的活性高于衰老的紅細(xì)胞， G6PD活性與體內(nèi)年輕紅細(xì)胞增多成正相關(guān)關(guān)系。其中， 地中海貧血患者的G6PD活性水平與正常的健康人員相比明顯增高， 是由于患者機(jī)體反應(yīng)中基因出現(xiàn)點(diǎn)突變或存在較大片段的缺失， 從而造成珠蛋白鏈合成出現(xiàn)減少或缺失變化， 造成機(jī)體紅細(xì)胞中的α與鏈比例分布不平衡， 出現(xiàn)紅細(xì)胞形態(tài)異常且容易發(fā)生溶血等， 故地中海貧血患者G6PD的活性高于健康人群。

國(guó)內(nèi)有些作者認(rèn)為， 重型地中海貧血的G6PD活性高于HbH病[5]。本研究發(fā)現(xiàn)， 但HbH病組與重型地貧組G6PD活性比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與陳炎添等[6]的報(bào)道較一致?？赡苁怯捎诒狙芯恐惺占腍bH病患者中存在HbH-CS和缺失型HbH相比， HbH-CS的G6PD活性水平較缺失型HbH高[7]。HbH病組與重型地貧組G6PD活性均高于輕型地貧組， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）， 是由于重型地中海貧血與HbH病溶血性貧血加重， 導(dǎo)致機(jī)體代償性產(chǎn)生年輕的紅細(xì)胞多于輕型地中海貧血。

陳冬等[8]報(bào)道， 輕型β地中海貧血、重型β地中海貧血、HBH病的G6PD活性分別為對(duì)照組2～3倍。明顯高于本次研究觀察到的G6PD活性， 且三型地中海貧血的G6PD活性升高幅度趨勢(shì)基本一致。導(dǎo)致該現(xiàn)象的原因不明， 可能是由于抽樣方法、檢測(cè)方法的差異， 或是地域不同， 人群的基因分布不同， 需要進(jìn)一步的研究才能明確。

由于血紅蛋白電泳方法學(xué)在地中海貧血檢測(cè)中存在局限性， 對(duì)靜止型地中海貧血、標(biāo)準(zhǔn)型地中海貧血無(wú)法檢出， 檢測(cè)中血紅蛋白電泳多表現(xiàn)為正?；蛘逪bA2降低， 而當(dāng)?shù)刂泻Ｘ氀獜?fù)合地中海貧血患者HbA2水平可在正常范圍內(nèi)， 因此單從血紅蛋白電泳檢測(cè)結(jié)果上看， 容易導(dǎo)致地中海貧血復(fù)合地中海貧血患者漏診[7]。表2中對(duì)50例血紅蛋白電泳正常而血常規(guī)異常人群進(jìn)行地中海貧血基因檢測(cè)， 確診為地中海貧血患者， 表明基因檢測(cè)是標(biāo)準(zhǔn)型地中海貧血或地中海貧血復(fù)合地中海貧血診斷的有效方法。結(jié)果顯示血常規(guī)異常組G6PD活性高于血常規(guī)正常組， 說明對(duì)于血紅蛋白電泳不能檢測(cè)出的地中海貧血類型， 可通過血常規(guī)和G6PD活性聯(lián)合檢測(cè)， 對(duì)地中海貧血患者診斷準(zhǔn)確率有提升作用。血紅蛋白電泳聯(lián)合血常規(guī)和G6PD活性斷方法對(duì)缺乏地中海貧血基因檢測(cè)的基層醫(yī)院而言， 對(duì)地中海貧血患者進(jìn)行初步篩查具有有效性與可行性。由于靜止型地中海貧血緩和平常無(wú)癥狀， 且血象無(wú)特殊表現(xiàn)， 因此本文沒有對(duì)靜止型地中海貧血G6PD的活性與正常人G6PD的活性進(jìn)行對(duì)比研究。

綜上所述， G6PD 活性的升高可以提示地中海貧血， G6PD可作為地中海貧血的輔助診斷指標(biāo)， 對(duì)地中海貧血高發(fā)區(qū)人群進(jìn)行該指標(biāo)檢測(cè)， 可以有效的預(yù)防地中海貧血的發(fā)生， 對(duì)于優(yōu)生優(yōu)育有重要的意義。

參考文獻(xiàn)

[1] 鞠愛萍， 林鏗， 許碧秋， 等. 廣州市花都區(qū)育齡人群地中海貧血基因檢測(cè)結(jié)果分析. 中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志， 2018， 26（12）：22-25.

[2] 馬占忠， 范舒舒， 徐靜， 等. 熒光PCR熔解曲線技術(shù)在地中海貧血產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用. 中國(guó)產(chǎn)前診斷雜志（電子版）， 2018， 10（4）：1-4.

[3] 黃霜， 朱文彪， 陳秋霞. G6PD活性與地中海貧血的關(guān)系. 中華全科醫(yī)學(xué)， 2012， 10（7）：1140-1141.

[4] 陳冬， 陳和平， 李翠娥. 臍血HbA定量檢查在篩查β地中海貧血中的意義. 中國(guó)優(yōu)生優(yōu)育， 2000， 11（2）：69-71.

[5] 張春榮， 黃翠波， 吳斯， 等. 地中海貧血患者的G6PD活性檢測(cè). 中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志2010， 18（3）：145， 161.

[6] 陳炎添， 蘇雪棠. 珠蛋白生成障礙性貧血患者中葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性的調(diào)查. 國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志， 2012， 33（11）：1323-1324.

[7] 覃薇. 葡萄糖六磷酸脫氫酶活性對(duì)地中海貧血的輔助診斷價(jià)值探討. //中國(guó)優(yōu)生優(yōu)育協(xié)會(huì)科研學(xué)術(shù)交流委員會(huì)、中國(guó)優(yōu)生優(yōu)育基因科學(xué)專家指導(dǎo)中心. 中國(guó)優(yōu)生優(yōu)育協(xié)會(huì)第四屆全國(guó)學(xué)術(shù)論文報(bào)告會(huì)暨基因科學(xué)高峰論壇論文專輯. 中國(guó)優(yōu)生優(yōu)育協(xié)會(huì)科研學(xué)術(shù)交流委員會(huì)、中國(guó)優(yōu)生優(yōu)育基因科學(xué)專家指導(dǎo)中心：中國(guó)優(yōu)生優(yōu)育協(xié)會(huì)科研學(xué)術(shù)交流委員會(huì)， 2008：8.

[8] 陳冬， 陳和平， 梁玲， 等. G6PD活性檢測(cè)在地中海貧血診斷中的意義. 中國(guó)優(yōu)生與遺傳雜志， 2007（1）：27-28.

[9] 周道平. G6PD升高與地中海貧血的關(guān)系. 中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)藥雜志， 2011， 13（3）：57-58.