曹亞蘭，羅艷萍，羅錦杰

廣東一方制藥有限公司，廣東 佛山 528244

膏方也叫膏滋，是中醫(yī)重要的治療手段之一[1]，傳統(tǒng)的膏滋一般是由中藥飲片經(jīng)過(guò)浸、煎、榨、化、濾、熬、收七道工序[2]，耗時(shí)24 h以上制備而成，具有占地大、設(shè)備多、高耗能、廢渣廢水排放、周期長(zhǎng)等缺點(diǎn)。隨著科技的發(fā)展和人們生活習(xí)慣的改變，傳統(tǒng)膏滋的制作已不能滿足現(xiàn)代人們快捷簡(jiǎn)便的需求，需要探索新的膏滋制作原料及工藝。以中藥配方顆粒為原料代替飲片制備膏方，僅需熬制、收膏兩道工序，具有占地小、設(shè)備少、耗能低、零廢渣、周期短等優(yōu)點(diǎn)，滿足了方便快捷的需求。

中藥配方顆粒無(wú)法完全取代中藥飲片[4-5]，但中藥配方顆粒與傳統(tǒng)湯劑的藥理作用相等，甚至強(qiáng)于傳統(tǒng)湯劑[6-7]。陳志偉等[8]比較了四物湯配方顆粒與傳統(tǒng)湯劑四物湯對(duì)骨髓抑制小鼠造血功能的影響，發(fā)現(xiàn)配方顆粒組比傳統(tǒng)湯劑組在紅細(xì)胞、血紅蛋白、血小板以及紅系、巨核系等項(xiàng)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，認(rèn)為四物湯配方顆粒組有更顯著的補(bǔ)血作用。李媛等[9]觀察了四物湯傳統(tǒng)飲片湯劑與配方顆粒對(duì)血虛小鼠外周血細(xì)胞的影響，發(fā)現(xiàn)兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，四物湯配方顆粒湯劑與傳統(tǒng)飲片湯劑均具有明顯的補(bǔ)血作用，2種劑型效果基本相當(dāng)。

傳統(tǒng)湯劑與配方顆粒工藝的本質(zhì)區(qū)別在于傳統(tǒng)湯劑并沒(méi)有干燥和制粒工序，因此用配方顆粒制作膏方與傳統(tǒng)飲片膏方存在工藝上的差異，這種差異可能會(huì)引起藥效的差異。本研究以四物膏為例，通過(guò)感官評(píng)價(jià)、薄層色譜法(TLC)、高效液相色譜法(HPLC)、紅外光譜法(IR)等方法比較不同原料制作四物膏的質(zhì)量，探索中藥配方顆粒與傳統(tǒng)飲片制作四物膏質(zhì)量的一致性，為中藥配方顆粒代替飲片制作膏劑提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

Agilent 1200高效液相色譜儀；色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；超聲波處理器(昆山市超聲儀器有限公司)；薄層點(diǎn)樣儀(瑞士卡瑪公司)；Spectrum100紅外光譜儀(鉑金埃爾默)；紫外燈檢測(cè)器(瑞士卡瑪公司)；ME-203型電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)；電熱套(海寧市新華醫(yī)療器械廠)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；膏方機(jī)(深圳奇潤(rùn)醫(yī)藥智能科技有限公司)。

1.2 試藥

芍藥苷對(duì)照品(批號(hào)：110736-201842)、阿魏酸對(duì)照品(批號(hào)：110773-201614)、毛蕊花糖苷對(duì)照品(批號(hào)：111530-201713)均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；硅膠G薄層板(青島海洋化工廠)；甲醇、乙腈為色譜純；水為超純水；其余試劑為分析純。

熟地黃、當(dāng)歸、川芎、白芍飲片經(jīng)廣東一方制藥有限公司魏梅主任中藥師鑒定為正品，均符合《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版一部[10]項(xiàng)下規(guī)定。

當(dāng)歸配方顆粒、熟地配方顆粒、川芎配方顆粒、白芍配方顆粒均由廣東一方制藥有限公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 四物膏樣品制備

2.1.1傳統(tǒng)飲片制備四物膏 參照《中醫(yī)養(yǎng)生保健技術(shù)操作規(guī)范(Ⅱ)膏方》傳統(tǒng)工藝制備。按四物湯處方量取飲片，加適量水冷浸12 h，加水至超過(guò)藥面10 cm，煎煮3次，第一次1 h，第二、三次各1.5 h，濾過(guò)，合并濾液，再將藥渣充分壓榨，壓榨出的藥汁并入上述濾液，置于中轉(zhuǎn)容器放置冷庫(kù)沉淀12 h，用350目篩濾過(guò)，濾液濃縮至含水量約為20%時(shí)，收膏，分裝，即得。

2.1.2中藥配方顆粒制備四物膏 按四物湯處方比例，將當(dāng)歸配方顆粒、熟地配方顆粒、川芎配方顆粒、白芍配方顆粒置膏方機(jī)中，加水加熱使溶解，濃縮至含水量約為20%時(shí)，收膏，分裝，即得(傳統(tǒng)飲片四物膏所用中藥飲片均為生產(chǎn)配方顆粒的同一批飲片)。

2.2 感官評(píng)價(jià)

取傳統(tǒng)飲片四物膏與中藥配方顆粒四物膏樣品各20 g，分別置白色瓷盤中，觀察性狀外觀，并鼻聞口嘗氣味和滋味。結(jié)果見(jiàn)圖1，中藥配方顆粒四物膏相對(duì)于傳統(tǒng)飲片四物膏，苦、辛味略微減弱，并有回甘味，更易被患者接受，在顏色、光澤度、稠度、細(xì)膩、組織狀態(tài)等方面兩者均一致，即色黑如漆，光亮如鏡的濃稠膏狀，口感細(xì)膩，味苦、微辛。

圖1 2種不同工藝制備的四物膏感官評(píng)價(jià)雷達(dá)對(duì)比圖

2.3 薄層色譜鑒別

2.3.1當(dāng)歸薄層色譜鑒別 取傳統(tǒng)飲片四物膏與中藥配方顆粒四物膏樣品各10 g，分別加20 mL水飽和正丁醇振搖提取，分取正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取阿魏酸對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.24 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(4∶1∶0.1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵和2%鐵氰化鉀(1∶1)的混合液，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)色斑點(diǎn)，見(jiàn)圖2。

注：1.阿魏酸對(duì)照品；2.傳統(tǒng)飲片四物膏；3.中藥配方顆粒四物膏。圖2 2種不同工藝制備的四物膏中阿魏酸的薄層色譜圖

2.3.2白芍薄層色譜鑒別 取2.3.1項(xiàng)下供試品溶液。另取芍藥苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.48 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)紫色斑點(diǎn)，見(jiàn)圖3。

注：1.芍藥苷對(duì)照品；2.傳統(tǒng)飲片四物膏；3.中藥配方顆粒四物膏。圖3 2種不同工藝制備的四物膏中芍藥苷的薄層色譜圖

2.3.3熟地黃薄層色譜鑒別 取2.3.1項(xiàng)下供試品溶液。另取毛蕊花糖苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL 含0.27 mg的溶液。吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(18∶2∶1.5∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈254 nm下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，見(jiàn)圖4。

注：1.毛蕊花糖對(duì)照品；2.傳統(tǒng)飲片四物膏；3.中藥配方顆粒四物膏。圖4 2種不同工藝制備的四物膏的毛蕊花糖苷薄層色譜圖

2.4 紅外光譜分析

取適量傳統(tǒng)飲片四物膏與中藥配方顆粒四物膏樣品置真空冷凍干燥機(jī)中凍干，分別取1～2 mg樣品與200 mg溴化鉀碎晶置研缽中，研磨均勻，轉(zhuǎn)移至模具中。將模具放到壓片機(jī)上將樣品壓成薄片，將薄片置紅外光譜儀上，采集紅外光譜圖[11]。傳統(tǒng)飲片四物膏和中藥配方顆粒四物膏紅外光譜圖的r為0.989 9，見(jiàn)圖5。

圖5 2種不同工藝制備的四物膏紅外光譜對(duì)比圖

2.5 含量測(cè)定

2.5.1對(duì)照品溶液的制備 取芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每l mL含0.1 mg的溶液，作為芍藥苷對(duì)照品溶液。另取阿魏酸對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每l mL含20 μg的溶液，作為阿魏酸對(duì)照品溶液。

2.5.2供試品溶液的制備 分別取傳統(tǒng)飲片四物膏與中藥配方顆粒四物膏樣品各1 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.5.3色譜條件 色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈(A)-0.1%醋酸溶液(B)，梯度洗脫(0～30 min，10%～25%A；30～50 min，25%～45%A)；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；柱溫：30 ℃，流速：1.0 mL·min-1，進(jìn)樣量：10 μL[12]。此條件下，芍藥苷、阿魏酸峰與其他雜質(zhì)峰實(shí)現(xiàn)基線分離，見(jiàn)圖6。

注：A.傳統(tǒng)飲片膏方；B.中藥配方顆粒膏方；1.芍藥苷；2.阿魏酸。圖6 2種不同工藝制備的四物膏的HPLC圖

2.5.4含量測(cè)定結(jié)果 分別精密吸取對(duì)照品和供試品溶液各10 μL，交叉進(jìn)樣，依法測(cè)定，以峰面積外標(biāo)法計(jì)算樣品中芍藥苷、阿魏酸的含量，結(jié)果見(jiàn)表1。傳統(tǒng)飲片四物膏與配方顆粒四物膏的芍藥苷含量與阿魏酸含量均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

表1 2種不同工藝制備的四物膏中芍藥苷和阿魏酸含量測(cè)定結(jié)果 mg·g-1

注：同列不同小寫(xiě)字母表示P<0.05。

3 討論

感官對(duì)比實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，中藥配方顆粒四物膏相對(duì)于傳統(tǒng)飲片四物膏，苦、辛味略微減弱，并有回甘味，更易被患者接受，在顏色、光澤度、稠度、細(xì)膩、組織狀態(tài)方面均一致，即色黑如漆、光亮如鏡的濃稠膏狀，口感細(xì)膩，味苦、微辛、回甘。

薄層色譜鑒別實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，2種工藝的四物膏樣品均可以檢出芍藥苷、阿魏酸及毛蕊花糖苷3個(gè)特征性成分，供試品薄層色譜圖中，除了有與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)外，其他位置的斑點(diǎn)數(shù)量和大小也基本相同。含量測(cè)定結(jié)果顯示，2種工藝的四物膏樣品的高效液相色譜圖中的各個(gè)峰位置及大小相似度非常高，芍藥苷和阿魏酸含量基本相同。紅外吸收光譜圖結(jié)果顯示，2種工藝的四物膏樣品的圖譜特征吸收基本相同，r為0.989 9，說(shuō)明兩者的物質(zhì)基礎(chǔ)是一致的。陳志偉等[8]實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，四物湯配方顆粒組有更顯著的補(bǔ)血作用，其機(jī)理可能與藥物的質(zhì)量有關(guān)，因?yàn)樵搶?shí)驗(yàn)采用的中藥飲片與中藥配方顆粒的原料并不是同一批次，飲片批次間質(zhì)量的不一致可能會(huì)影響藥效的不一致。李媛等[9]實(shí)驗(yàn)結(jié)果為四物湯配方顆粒湯劑與傳統(tǒng)飲片湯劑補(bǔ)血效果基本相當(dāng)，因?yàn)樵搶?shí)驗(yàn)2種劑型的化學(xué)成分基本一致，所以藥效結(jié)果基本一致。

中藥配方顆粒是按照藥品顆粒劑標(biāo)準(zhǔn)在GMP車間生產(chǎn)，產(chǎn)品不會(huì)出現(xiàn)生蟲(chóng)、跑油、發(fā)霉等現(xiàn)象，質(zhì)量比中藥飲片更穩(wěn)定、更易于貯存。用中藥配方顆粒制備膏方具有省時(shí)省力、方便衛(wèi)生等特點(diǎn)。

4 結(jié)論

文獻(xiàn)資料顯示，中藥配方顆粒與傳統(tǒng)飲片湯劑的化學(xué)成分和藥效基本一致[7，9，13]，上述結(jié)果表明，用中藥配方顆粒制備四物膏與傳統(tǒng)飲片制備四物膏的質(zhì)量基本一致，說(shuō)明用中藥配方顆粒制備膏滋工藝可行，值得推廣和應(yīng)用。隨著配方顆粒四物膏的應(yīng)用，筆者將在后續(xù)的研究中進(jìn)行相關(guān)的藥理藥效學(xué)研究。