鄭惠成

(福建省林業(yè)調(diào)查規(guī)劃院，福建 福州 350003)

油桐鷹尺蠖(Bistonsuppressaria(Guen.))[1]通常被稱為油桐尺蠖、油桐尺蛾，是一種廣食性的林木害蟲，可危害油桐、茶葉、油茶、桉樹等幾十種木本植物[2]，該蟲曾是茶園的重要害蟲之一，但近年來，油桐鷹尺蠖在速生桉樹上嚴(yán)重發(fā)生，福建省桉樹種植區(qū)大多有該蟲的危害，局部呈爆發(fā)趨勢，嚴(yán)重時每株蟲口密度可達(dá)數(shù)百至數(shù)千頭，可將整片林分的樹葉取食殆盡，人走在林下，尺蠖的幼蟲如“下雨”般往下墜，極大影響桉樹的生長，造成直接的經(jīng)濟(jì)損失[3-5]。由于該蟲前期危害不易發(fā)現(xiàn)，待其幼蟲4～5齡時開始防治，往往已經(jīng)造成嚴(yán)重的危害；生產(chǎn)上一般采用應(yīng)急性的化學(xué)防治手段，如采用一些菊酯類、有機(jī)磷類的藥劑，雖可一定程度壓制蟲口密度，但是由于防治時機(jī)不對，造成了“年年防治，年年發(fā)生”的局面[3-4，6]，且化學(xué)藥劑可能造成的環(huán)境污染等問題也備受人們關(guān)注。因此，探尋高效、環(huán)保的防治手段是眾多學(xué)者研究的重要內(nèi)容，如利用尺蠖的病毒進(jìn)行防治可取得良好的效果[7]，但是由于病毒的繁殖需要依賴于活蟲體進(jìn)行擴(kuò)增，這在一定程度上限制了其廣泛應(yīng)用。白僵菌是一種寄主廣泛、應(yīng)用普遍的殺蟲真菌，在我國森林害蟲防治應(yīng)用歷史悠久，效果顯著，應(yīng)用不同劑型防治一些大面積發(fā)生的森林害蟲，如馬尾松毛蟲的防治實踐中發(fā)揮了重要的作用，然而，在利用白僵菌防治尺蠖幼蟲方面的研究還較少。本文在測定比較不同球孢白僵菌菌株的菌落生長速度、產(chǎn)孢量的基礎(chǔ)上，比較6個來源不同的球孢白僵菌菌株對油桐鷹尺蠖幼蟲的致病力，旨在篩選出對該蟲的致病力高、生產(chǎn)性能良好的菌株，為生產(chǎn)上防治提供優(yōu)良的生物防治資源。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

供試6個菌株均為球孢白僵菌(Beauveriabassiana，以下簡稱白僵菌)，由福建省林科院森保所提供，各菌株的信息見表1。將各菌株斜面上孢子在無菌條件下轉(zhuǎn)接到SDAY平板培養(yǎng)基上，置于(25±1) ℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10～15 d，待菌落長滿白色或乳黃色的孢子后，收集孢子用于致病力測定。

表1 供試球孢白僵菌菌株寄主與地理來源

1.2 菌株生長速度及產(chǎn)孢量測定

菌株菌落生長速度和產(chǎn)孢量測定參考蔡守平方法[8]，菌落直徑測定采用十字交叉法，產(chǎn)孢量測定采用打孔器取菌碟法。每個菌株至少做3個重復(fù)，每個重復(fù)產(chǎn)孢量測定時均至少取3個菌碟，計數(shù)方法采用血球計數(shù)板法。

1.3 白僵菌對油桐鷹尺蠖幼蟲的致病力測定

1.3.1 試蟲飼養(yǎng) 用于致病力測定的油桐鷹尺蠖幼蟲于2019年5月12日在漳浦縣長橋鎮(zhèn)桉樹林中采集，采集時蟲齡以3齡幼蟲為主。幼蟲采集后即帶回實驗室，置于養(yǎng)蟲籠中飼養(yǎng)，以新鮮桉樹葉作為飼料，飼養(yǎng)1～2 d后，挑選健康、蟲齡一致的幼蟲放置于昆蟲飼養(yǎng)盒中，每飼養(yǎng)盒放置20頭，用于致病力測定試驗。

1.3.2 致病力測定 致病力測定方法參考何學(xué)友等[9]方法，將各白僵菌菌株配制成濃度為107孢子·mL-1的孢子懸浮液，使用浸漬法進(jìn)行接種，即將尺蠖幼蟲在孢子懸浮液中浸漬5 s，對照浸漬無菌水。每個菌株處理20頭為1個重復(fù)，共接種3個重復(fù)，即每菌株處理60頭試蟲。處理完畢置于滅菌濾紙上，待蟲體稍干后，以新鮮桉樹葉進(jìn)行飼養(yǎng)。接種后每天觀察試蟲的死亡情況，每2 d更換一次桉樹葉，死亡后的試蟲及時移出養(yǎng)蟲盒，置于培養(yǎng)皿中(內(nèi)放置濕潤的棉球)進(jìn)行保濕培養(yǎng)，觀察蟲體是否有菌絲長出及產(chǎn)孢，確定是否被白僵菌感染。分別統(tǒng)計接種后15 d的試蟲死亡率和感染率。

1.4 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析使用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)軟件處理。致病力分析采用DPS自帶的死亡率-時間機(jī)率值法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，即以時間(d)的對數(shù)值為x，將死亡率轉(zhuǎn)換為機(jī)率值，并以機(jī)率值為y，模擬出致病力回歸方程，計算致死中時(LT50)，不同菌株之間的致死中時差異采用致死中時比例測定方法來檢驗[10]。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同菌株的菌落生長速度及產(chǎn)孢量比較

供試球孢白僵菌的菌落生長速度及產(chǎn)孢量見表2。不同菌株的菌落生長速度和產(chǎn)孢量間存在顯著差異，通過回歸分析，菌落大小與產(chǎn)孢量呈正相關(guān)(y=0.3087x-0.5296，R2=0.9634)。其中菌落直徑最大的為BbFZ-58、BbAX-07菌株，分別為6.0、6.3 cm；其次為BbFZ-51菌株；而BbMQ-02、BbMQ-08菌株的菌落直徑較小，15 d時不足5 cm。從產(chǎn)孢量來看，產(chǎn)孢量最大的依然是BbFZ-58、BbAX-07菌株，分別為1.41×108孢子·cm-2、1.35×108孢子·cm-2；最低的也依然是BbMQ-02、BbMQ-08菌株，均不足1×108孢子·cm-2。

*：表中數(shù)據(jù)為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差；數(shù)據(jù)后不同字母為P=0.05時Duncan′s新復(fù)極差顯著性檢驗，同列中有相同字母為差異不顯著。下同。

2.2 油桐鷹尺蠖接種白僵菌后的死亡情況

接種不同球孢白僵菌菌株后油桐鷹尺蠖幼蟲累計死亡率曲線見圖1。從圖1可以看出，所有菌株對油桐鷹尺蠖均有一定的致病力，累計死亡率均呈現(xiàn)出隨時間的增加而逐漸提高；但致死速度上，不同菌株間的差異顯著。接種后1～2 d，大部分幼蟲并沒有明顯感病癥狀，少數(shù)菌株如BbFZ-58、BbAX-07菌株在這個階段出現(xiàn)少量幼蟲死亡。3～4 d后，部分幼蟲因受到白僵菌感染而出現(xiàn)活動能力減弱、取食減少的情況，死亡速度加快，出現(xiàn)死亡高峰，超過60%的幼蟲在這個階段死亡。接種BbFZ-58和BbAX-07菌株的幼蟲死亡速度較快，死亡高峰在4～8 d，而接種其他菌株的死亡高峰出現(xiàn)在5～11 d。死亡高峰期后，幼蟲死亡速度明顯趨緩。部分幼蟲死亡后蟲體逐漸變僵硬，在保濕培養(yǎng)1～2 d后體表長出白色菌絲，慢慢布滿蟲體，最終整個蟲體均布滿粉末狀、白色至乳黃色孢子(圖2)，但也有部分試蟲死亡后出現(xiàn)蟲體變軟、液化，逐漸發(fā)臭、腐爛。從累計死亡率上來看，接種BbFZ-58和BbAX-07菌株幼蟲累計死亡率較高，接種這2個菌株8 d后，幼蟲死亡率就達(dá)到或超過80%；10 d后，累計死亡率超過90%，遠(yuǎn)比其他菌株高。對照組15 d時幼蟲累計死亡率為8.3%。

2.3 不同菌株對油桐鷹尺蠖幼蟲的致病力比較

不同菌株對油桐鷹尺蠖幼蟲的致病力分析結(jié)果見表3。通過接種后的死亡機(jī)率值-時間回歸分析，建立各菌株的致病力回歸方程，經(jīng)檢驗，各回歸方程的擬合度均達(dá)到了顯著水平，表明時間與累計死亡率顯著相關(guān)。不同菌株對油桐鷹尺蠖幼蟲的致病力差異顯著，接種BbFZ-58、BbAX-07菌株15 d后，尺蠖幼蟲校正死亡率分別達(dá)到96.4%、90.9%，僵蟲率分別為73.3%、71.7%，均顯著比其它菌株高，同時，通過所建立的致病力回歸方程，可以計算出不同菌株對油桐鷹尺蠖幼蟲的致死中時(LT50)，BbFZ-58、BbAX-07菌株的LT50顯著比其它菌株短，分別為4.45、4.72 d，這2個菌株之間差異不顯著；其它菌株的致死中時(LT50)均超過6 d，最長的是BbMQ-08，為7.53 d。

表3 不同球孢白僵菌菌株對油桐鷹尺蠖幼蟲的致病力比較

*：不同字母為P=0.05時，不同處理的差異性，不同行中含有相同字母的為差異不顯著，反之則差異顯著。

3 結(jié)論與討論

國內(nèi)外學(xué)者在利用真菌殺蟲劑防治害蟲中十分重視高致病力菌株篩選，因為這是防治害蟲的基礎(chǔ)，也是至關(guān)重要的一項前期工作[11-13]。本研究表明不同來源球孢白僵菌菌株對害蟲的致病力存在顯著差異，白僵菌以其寄主譜廣、易于培養(yǎng)、可形成流行病等眾多優(yōu)點，在害蟲生物防治中發(fā)揮了重要的作用。在對尺蠖的防治方面，相關(guān)研究并不多，Sibani Sankar等[14]在研究球孢白僵菌對茶園中油桐尺蛾的生物效力發(fā)現(xiàn)球孢白僵菌的殺蟲活性與高劑量的滅多蟲和氯氰菊酯相當(dāng)，噴施白僵菌3 d后，Kamalpur和Hunterpara茶園中油桐尺蛾種群個體數(shù)分別降低了88.0%和84.0%。白僵菌對春尺蠖(ApocheimacinerariusErsochoff)幼蟲也具有顯著的致病力，但是不同菌株之間的致病力差異也十分顯著[15]。白僵菌原粉對春尺蠖田間藥效試驗中，施菌9 d后校正死亡率可達(dá)93.3%[16]。本研究中篩選出的BbFZ-58和BbAX-07兩個優(yōu)良菌株對油桐鷹尺蠖幼蟲的致病力強(qiáng)，校正死亡率超過90%，LT50不到5 d，且具備良好的生產(chǎn)性狀，所以這2個菌株可以作為優(yōu)良菌株來生產(chǎn)相關(guān)制劑，并用于防治油桐鷹尺蠖幼蟲。但是，林間環(huán)境復(fù)雜，且白僵菌等生物制劑發(fā)揮作用對環(huán)境濕度要求較高，所以有關(guān)林間應(yīng)用技術(shù)還有待進(jìn)一步的深入研究。

白僵菌可以在土壤中宿存并對土壤害蟲有較好的控制作用，油桐鷹尺蠖有在地表淺層土壤化蛹的習(xí)性，若在此階段使用白僵菌相關(guān)制劑進(jìn)行防治，可起到降低下一代害蟲的發(fā)生量的作用，從而達(dá)到持續(xù)控制的目標(biāo)。姚紅青等[17]研究發(fā)現(xiàn)白僵菌對楊尺蠖(又名春尺蠖)初期蛹和中期蛹具有較強(qiáng)的致病力，可達(dá)70%以上，LT50低于5 d，說明其在楊尺蠖蛹期控制中具有巨大的潛力。白僵菌對油桐鷹尺蠖幼蟲的致病力較強(qiáng)，對其蛹也有較好的感染效果，因此，白僵菌在油桐鷹尺蠖的持續(xù)控制中具有明顯的潛力，應(yīng)進(jìn)一步深入研究。