王金丹

摘要：大棗中含有多種生物活性物質(zhì)，對(duì)大棗中有效成分含量進(jìn)行測(cè)定具有重要意義。在查閱、收集國(guó)內(nèi)相關(guān)文獻(xiàn)資料基礎(chǔ)上，綜述近幾年大棗有效成分含量測(cè)定的研究進(jìn)展，以期為進(jìn)一步開展大棗研究提供參考。

關(guān)鍵詞：大棗;有效成分;含量測(cè)定;研究進(jìn)展

中圖分類號(hào)：R284.2 ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A ? ?文章編號(hào)：1674-1161（2020）01-0060-03

大棗是鼠李科植物棗樹的成熟果實(shí)，別名紅棗、干棗、棗子等，味甘，性平，具有補(bǔ)中益氣、養(yǎng)血安神功效，既是常用的中藥材，又是一種營(yíng)養(yǎng)極其豐富的食品，即藥食同源。大棗中含有環(huán)磷腺苷、黃酮類、皂苷類、三萜類、生物堿類等多種生物活性物質(zhì)。近年來，針對(duì)大棗中有效成分含量測(cè)定進(jìn)行了大量的研究和應(yīng)用，取得了許多有價(jià)值的研究成果。大棗有效成分含量測(cè)定方法有高效液相色譜法、反相高效液相色譜法、紫外分光光度法、高效液相色譜—蒸發(fā)光散射法、高效毛細(xì)管電泳法、親水色譜—二極管陣列檢測(cè)器—電噴霧四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜法、液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用法、離子色譜法和一測(cè)多評(píng)法等。本課題綜述各種測(cè)定方法的研究進(jìn)展，以期為進(jìn)一步開展大棗研究提供參考。

1 高效液相色譜法

李環(huán)研究?jī)?yōu)化高效液相色譜法測(cè)定大棗中蘆丁含量的效果。該方法測(cè)定時(shí)的標(biāo)準(zhǔn)為：MACHEREY-NAGEL（MN）NUCLEODUR 100-5 C18柱（BATCH2064），流動(dòng)相為乙腈∶0.05%磷酸（0.15∶0.85），流速1.0 mL/min，波長(zhǎng)257 nm，柱溫40 ℃。結(jié)果表明：蘆丁含量的線性范圍為0.050 55～0.404 40 μg，相關(guān)系數(shù)r=0.998 7，加樣回收率為97.06%。上述結(jié)果符合相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)，RSD=1.3%（n=6）。采用優(yōu)化高效液相色譜法測(cè)定大棗中蘆丁含量，效果準(zhǔn)確，且能避免糖類成分對(duì)測(cè)定結(jié)果的干擾。

劉世軍等人研究采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定大棗中齊墩果酸和白樺脂酸的方法。色譜柱為Hyperil BDS C18（4.6 mm×250 mm，5μm），流動(dòng)相為甲醇∶水（85∶15），檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm，柱溫25 ℃。結(jié)果表明：齊墩果酸、白樺脂酸在0.008～0.200 mg/mL時(shí)呈良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率分別為101.25%，101.64%，RSD分別為2.44%，1.25%。該方法操作簡(jiǎn)單，測(cè)定準(zhǔn)確，重復(fù)性好。

侯廣月等人建立大棗中齊墩果酸、熊果酸、環(huán)磷酸腺苷和環(huán)磷酸鳥苷測(cè)定的高效液相色譜法。試樣經(jīng)乙腈—水在60 ℃超聲提取，過濾后選用Waters Symmetry ShieldTMRP18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5μm）分離，流動(dòng)相為乙腈∶0.1%甲酸水，流速為1.0 mL/min，柱溫為30 ℃，二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明：齊墩果酸線性范圍為1.2～90.0 μg/mL，熊果酸線性范圍為1.0～75.0 μg/mL，環(huán)磷酸腺苷和環(huán)磷酸鳥苷線性范圍為1.0～100.0 μg/mL，相關(guān)系數(shù)均>0.999，定量限為1.0～1.2 μg/mL。平均回收率為85%～115%;日內(nèi)和日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均≤5.470%。該方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，適用于大棗中齊墩果酸、熊果酸、環(huán)磷酸腺苷和環(huán)磷酸鳥苷的測(cè)定。

2 紫外分光光度法

李蓮芳等人建立大棗中總黃酮含量的測(cè)定方法。以蘆丁為對(duì)照品，在275 nm波長(zhǎng)下測(cè)定總黃酮在三氯化鋁甲醇溶液中的吸光度，計(jì)算大棗中總黃酮含量。該方法簡(jiǎn)便易行，適用于大棗中總黃酮含量的測(cè)定。

3 液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用法

液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用法（HPLC—MS）能提高大棗中白樺脂酸、齊墩果酸和熊果酸含量分析的選擇性和靈敏度。

張勇等人采用液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定大棗中脂酸、齊墩果酸和熊果酸三萜酸的含量。選用聚合物鍵合的ODS色譜柱Ulti-mate XB-PAH色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）進(jìn)行分離，以乙腈∶水（90∶10）為流動(dòng)相，電噴霧質(zhì)譜負(fù)離子選擇離子模式檢測(cè)。結(jié)果表明：所建立的檢測(cè)方法靈敏度高（50.8～113.9 pg），分離度高（R≥1.7），線性關(guān)系良好（r≥0.999 0），重復(fù)性好（RSD≤3.5%）。聚合物鍵合的ODS固定相可對(duì)三萜酸同分異構(gòu)體進(jìn)行高效分離，且HPLC—MS對(duì)三萜酸含量分析的專屬性和靈敏度較高。

4 高效液相色譜—蒸發(fā)光散射法

曲楓等人采用高效液相色譜—蒸發(fā)光散射法（HPLC—ELSD）同時(shí)測(cè)定大棗多糖酸性條件下水解產(chǎn)物中阿拉伯糖和D-半乳糖含量。結(jié)果表明：樣品中阿拉伯糖和D-半乳糖分離良好，分別在2.00～10.00 μg（r2=0.995 7）和2.08～10.40 μg（r2=0.990 3）范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均加樣回收率分別為103.87%（r2=5.42%，n=9）和93.04%（RSD=4.90%，n=9）。

5 親水色譜—二極管陣列檢測(cè)器—電噴霧四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜法

親水色譜法采用極性材料作為固定相，適合極性化合物的保留和分離;電噴霧四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜能夠提供化合物母離子和子離子的精確分子量，從而推斷分子式。多種檢測(cè)方法聯(lián)合應(yīng)用，具有較好的分離度、靈敏度，可實(shí)現(xiàn)大棗中環(huán)磷腺苷的準(zhǔn)確、快速鑒別和定量測(cè)定。

趙恒強(qiáng)等人研究建立超聲輔助提取—親水色譜—二極管陣列檢測(cè)器—電噴霧四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜法（UAE—HILIC—DAD—ESI—Q—TOF/MS）定量測(cè)定大棗環(huán)磷酸腺苷（cAMP）的方法。采用超聲輔助提取，選用Waters Xbridge Amide（250 mm×4.6 mm，3.5 μm）親水色譜柱進(jìn)行分離，以乙腈和20 mmol/L CH3COONH4+0.2% CH3COOH為流動(dòng)相，流速為0.8 mL/min，柱溫為室溫。結(jié)果表明：在優(yōu)化的親水色譜條件下，大棗水提物中cAMP與其他化合物分離良好。根據(jù)母離子和子離子的精確分子量信息，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的保留時(shí)間和UV信息可對(duì)其進(jìn)行準(zhǔn)確鑒別。cAMP在0.01～50.00 μg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

6 高效毛細(xì)管電泳法

高效毛細(xì)管電泳法具有靈敏度高、準(zhǔn)確度高、簡(jiǎn)便、快速等特點(diǎn)。

高瑞斌等人采用高效毛細(xì)管電泳法同時(shí)測(cè)定大棗中環(huán)磷酸腺苷、芹菜素及槲皮素，研究緩沖液濃度、pH值、β-環(huán)糊精濃度、檢測(cè)波長(zhǎng)、分離電壓對(duì)分離結(jié)果的影響。結(jié)果表明：在最佳分離測(cè)定條件下，環(huán)磷酸腺苷、芹菜素及槲皮素快速分離，分別在16.5～529.4 mg/L，5.5～176.4 mg/L，8.8～282.4 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r值分別為0.999 8，0.999 8，0.999 7，加樣回收率分別為97.31%，95.62%，94.88%。

7 離子色譜法

莊紅艷等人建立一種檢測(cè)枸杞子和大棗中甜菜堿含量的直接離子色譜法。選用Thermofisher Ion Pac CS19（250 mm×4 mm）陽離子交換色譜柱和CG19（50 mm×4 mm）陽離子保護(hù)柱，以甲基磺酸（MSA）為流動(dòng)相等度洗脫，流速為1.0 mL/min。結(jié)果表明：枸杞子和大棗中的甜菜堿在10 min內(nèi)完成分離檢測(cè)，甜菜堿質(zhì)量濃度在10～500 mg/L內(nèi)具有良好的線性關(guān)系（r2=0.999 7），最低檢出限為1.8 mg/L，保留時(shí)間和峰面積的RSD（n=6）分別為0.15%和1.70%。該方法測(cè)定甜菜堿含量靈敏度高、重現(xiàn)性好、檢測(cè)過程簡(jiǎn)便，具有較高的實(shí)用和推廣價(jià)值。

8 一測(cè)多評(píng)法

近年來，基于只測(cè)定1個(gè)成分而實(shí)現(xiàn)對(duì)多個(gè)目標(biāo)成分進(jìn)行同步監(jiān)控的一測(cè)多評(píng)法（QAMS）已廣泛應(yīng)用于中藥材的含量測(cè)定。

郭盛等人采用HPLC—ELSD技術(shù)，以白樺脂酸對(duì)照品為內(nèi)參物，測(cè)定其與齊墩果酸、熊果酸、樺木酮酸、齊墩果酮酸、熊果酮酸的相對(duì)校正因子，利用相對(duì)校正因子計(jì)算三萜酸類化學(xué)成分的量;同時(shí)比較外標(biāo)法所測(cè)得的大棗藥材中這6種化學(xué)成分的實(shí)際值與經(jīng)QAMS所得的計(jì)算值之間的差異，以驗(yàn)證QAMS的適用性、可行性和重復(fù)性。結(jié)果表明：相對(duì)校正因子的重現(xiàn)性較好，15批大棗藥材樣品中6種三萜酸類化學(xué)成分的QAMS計(jì)算值與外標(biāo)法實(shí)測(cè)值之間無顯著性差異。該方法操作簡(jiǎn)便，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確。

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Abstract： Jujube contains a variety of bioactive substances， and the determination of active components in jujube is of great significance. On the basis of consulting and collecting relevant domestic literature， this paper summarizes the research progress of the determination of active ingredients of jujube in recent years， in order to provide reference for further research on jujube.

Key words： jujube; active ingredients; content determination; research progress