王淑靜 婁玉鈐

【摘 要】目的：研究制馬錢子分別配伍不同劑量的白芍桂枝湯、赤芍桂枝湯、赤白芍桂枝湯后對其毒性的影響，為制馬錢子與桂枝湯的配伍提供藥理學實驗依據，更為臨床安全有效地應用制馬錢子提供實驗依據。方法：通過急性毒性實驗，用加權概率單位法（Bliss氏法）計算出制馬錢子及其與不同比例的白芍桂枝湯、赤芍桂枝湯、赤白芍桂枝湯配伍后的半數致死量（LD50），并計算出解毒率。

結果：制馬錢子的LD50為258.00 mg·kg-1;制馬錢子配伍白芍桂枝湯的高、低2個劑量組的LD50分別為1642.59 mg·kg-1、8218.21 mg·kg-1;制馬錢子配伍赤芍桂枝湯的高、中、低3個劑量組的LD50分別為2064.06 mg·kg-1、3485.07 mg·kg-1、9335.06 mg·kg-1;制馬錢子配伍赤白芍桂枝湯的高、中、低3個劑量組的LD50分別為1792.80 mg·kg-1、2972.45 mg·kg-1、8228.82 mg·kg-1。結論：制馬錢子與不同劑量組的桂枝湯配伍，其減毒率不同，為臨床安全有效地運用制馬錢子提供了實驗依據。

【關鍵詞】 制馬錢子;桂枝湯加減;配伍;毒性;小鼠;實驗研究

《本草綱目》記載馬錢子“味苦，寒，無毒。主治傷寒熱病，咽喉痹痛，消痞塊。并含之咽汁，或磨水噙咽?！睂τ谄錈o毒，后世醫(yī)家產生了質疑，《本草匯言》認為其“有毒”，《本草原始》載其“味苦、寒，有大毒”。2015版《中華人民共和國藥典》認為馬錢子味苦、微溫，有大毒，歸肝脾經;可通絡止痛，散結消腫;臨床用于跌打損傷，骨折腫痛，風濕頑痹，麻木癱瘓，癰疽瘡毒，咽喉腫痛。炮制后入丸散，每服0.3～0.6 g。全國名老中醫(yī)婁多峰臨床善于運用制馬錢子治療風濕病，并發(fā)現配伍桂枝湯能提高臨床療效并降低不良反應[1-3]?；诖罅颗R床用藥經驗，本研究選擇桂枝湯加減配伍制馬錢子，觀察配伍前后對制馬錢子毒性的影響，為臨床更加安全有效地使用制馬錢子提供實驗依據[4-5]。

1 實驗材料

1.1 實驗藥物

1.1.1 制馬錢子粉 生產批號20120125，按照2015版《中華人民共和國藥典》規(guī)定的砂燙法將馬錢子粉碎10 min，過200目篩，炮制成制馬錢子，用高效液相色譜儀測得士的寧含量為14.43 mg·g-1，馬錢子堿含量為4.79 mg·g-1。

1.1.2 白芍桂枝湯浸膏粉末 生產批號201201GZ，藥物組成：桂枝9 g、白芍9 g、甘草6 g、生姜9 g、大棗3枚（9 g）。制作方法：將藥物按比例放入煎藥機中，加10倍量水，煎煮1 h，濃縮后干燥粉碎即得，后過200目篩。1 g干浸膏粉相當于原生藥6.0 g。

1.1.3 赤芍桂枝湯浸膏粉末 生產批號201202GZ，藥物組成：桂枝9 g、赤芍9 g、甘草6 g、生姜9 g、大棗3枚（9 g）。制作方法同1.1.2。

1 g干浸膏粉相當于原生藥5.9 g。

1.1.4 赤白芍桂枝湯浸膏粉末 生產批號201203GZ，藥物組成：桂枝9 g、赤芍4.5 g、白芍4.5 g、甘草6 g、生姜9 g、大棗3枚（9 g）。制作方法同1.1.2。1 g干浸膏粉相當于原生藥6.4 g。

以上藥物飲片由河南風濕病醫(yī)院統一購買于河南省藥材公司，由河南中醫(yī)藥大學藥學院劉雅敏統一制備，密閉保存使用。另外考慮樣品制備損耗等因素，3個處方均按1 g干浸膏相當于原生藥6 g計算。本實驗制馬錢子配伍桂枝湯高、中、低劑量中，馬錢子粉的含量分別為13.41%、7.19%、3.72%。

1.2 實驗動物 昆明種小鼠，SPF級，體質量18～22 g，雌雄各半，購自河南省實驗動物中心，生產許可證號SCXK（豫）2010-0002。統一飼養(yǎng)于河南省藥檢所動物實驗中心，輻照條形飼料，單籠喂養(yǎng)，自由飲水，每籠5只。實驗室溫度（23.0±2.0）℃，濕度50%～65%。

2 數據處理

所得實驗數據運用加權概率單位法（Bliss氏法），首先通過NDST軟件計算各組半數致死量（LD50），其次分別按照減毒率公式計算出各自的減毒率，最后進行比較分析。

3 實驗方法及結果

3.1 單純制馬錢子LD50實驗 經過前期預實驗，得出制馬錢子Dm（最小100%死亡量）為450 mg·kg-1，Dn（最大0不死量）為200 mg·kg-1，然后在Dm和Dn范圍內選擇6個劑量組，組間劑量比為0.85。取雌雄各半、體質量18～22 g的昆明種小鼠60只，隨機分為6組，每組10只。實驗前禁食12 h以上，自由飲水，將制馬錢子粉用蒸餾水按質量等比級數依次配制成6個劑量的混懸液，按每10克小鼠體質量給予0.3 mL藥液量灌胃給藥。

經過多次預實驗及文獻報道可知馬錢子的中毒特點主要表現為煩躁、呼吸增強、心跳加速、四肢抽搐，直到死亡[6-8]。達到中毒劑量后小鼠一般在10 min內死亡，死亡狀態(tài)為四肢及尾巴強直性僵直、抽搐。灌胃給藥后30 min內存活的小鼠，基本1 h內逐漸恢復正常。因此，實驗采用一次給藥的方式，給藥后將存活的小鼠以給藥前的飼養(yǎng)方式飼養(yǎng)，連續(xù)觀察7 d，每天詳細記錄小鼠中毒癥狀、死亡數及死亡狀態(tài)，實驗結束后，清點各組死亡數。實驗結果數據見表1，運用Bliss氏法計算后得知本實驗所用制馬錢子LD50為258 mg·kg-1，95%可信限為236.44～277.65 mg·kg-1。

預算知制馬錢子與白芍桂枝湯、赤芍桂枝湯、赤白芍桂枝湯配伍后的3個混懸液組，即13.41%馬錢子的Dm為2545 mg·kg-1，Dn為1271 mg·kg-1;7.19%馬錢子的Dm為5100 mg·kg-1，Dn為2781 mg·kg-1;3.72%馬錢子的Dm為14 258 mg·kg-1，Dn為5730 mg·kg-1。取昆明種小鼠540只，體質量18～22 g，雌雄各半，隨機分為9組，即3種混懸液的3個劑量組（13.41%馬錢子、7.19%馬錢子、3.72%馬錢子），每組60只。在每組的Dm和Dn范圍內按各自的組間比選取6個劑量組，每個劑量組隨機分10只小鼠。在禁食不禁水12 h后，將制馬錢子粉分別與3個桂枝湯浸膏粉用蒸餾水按等比級數依次配制成混懸液，灌胃量為每10克小鼠體質量給藥0.3 mL。仍然采用一次給藥后連續(xù)觀察7 d的實驗方法，實驗結束后，清點各組死亡數。運用Bliss氏法計算出各組LD50及95%可信限范圍，然后計算出減毒率，減毒率（%）=（混合物LD50-馬錢子LD50）/馬錢子LD50。（注：公式的混合物中馬錢子與純馬錢子換算為同一比例）。結果見表2、表3、表4。

4 討 論

馬錢子具有較強的抗炎鎮(zhèn)痛效果，臨床上用于治療風濕頑痹效果顯著。然其藥性猛烈，走竄力強，大大限制了臨床使用范圍。桂枝湯是《傷寒論》群方之首，功能解肌發(fā)表，調和營衛(wèi)。在臨床上使用桂枝湯配伍馬錢子抗炎鎮(zhèn)痛效果顯著，因此桂枝湯配伍馬錢子對馬錢子應用于臨床具有很大的指導意義。桂枝湯中選擇白芍或赤芍，學者各有見地[9-11]。赤芍、白芍始分于梁代，多數醫(yī)家認為，“白補而赤瀉，白收而赤散”[12]。白芍味甘，酸，微寒，歸肝、脾、心經，功效補血，平肝陽，緩急止血，止汗。赤芍味多甘，寒，歸心、肝經，功效清熱涼血，解毒，透疹。李曉麗等[13]研究表明，馬錢子赤芍配伍組與馬錢子單煎組比較，馬錢子堿和士的寧含量均明顯降低。胡錫琴等[14]研究表明，配伍赤芍的藥量越大，越可以減輕馬錢子的毒性，并能增強其鎮(zhèn)痛作用，為赤芍與馬錢子配伍提供很好的實驗依據。吳鵬等[15]發(fā)現，赤芍中赤芍總苷能顯著增加小鼠耳廓毛細血管開放量、細動脈和細靜脈血管口徑，其中7.5 mg·kg-1、25 mg·kg-1作用比較明顯。

通過本實驗可知，制馬錢子配伍3種桂枝湯后，制馬錢子所占混懸液13.41%、7.19%、3.72%的3個比例中，以3.72%時3種桂枝湯均對其有明顯的減毒作用;縱向分析，不同的桂枝湯配伍制馬錢子后，赤芍桂枝湯減毒效果最佳。桂枝湯配伍馬錢子經實驗證明既能減輕制馬錢子毒性，又能增加其藥效作用，因此值得進一步研究。本實驗僅從減毒效果觀察桂枝湯配伍馬錢子后的減毒率，關于更深一步的作用機制，還需對桂枝湯與制馬錢子配伍的毒效動力學及分子細胞影響進行更深層次的研究。

參考文獻

[1] 李朝陽，婁玉鈐，苗根旺，等.配伍肉桂、桂枝對馬錢子毒性影響的實驗研究[J].風濕病與關節(jié)炎，2012，1（6）：28-30.

[2] 苗根旺，婁玉鈐，李朝陽，等.配伍生地黃、熟地黃對制馬錢子毒性影響的實驗研究[J].風濕病與關節(jié)炎，2012，1（5）：19-22.

[3] 婁玉鈐，成廣超，李朝陽，等.配伍甘草對制馬錢子毒性影響的實驗研究[J].風濕病與關節(jié)炎，2012，1（2）：40-42，50.

[4] 王淑靜，婁玉鈐.配伍對馬錢子的減毒增效研究概述[J].風濕病與關節(jié)炎，2014，3（2）：78-80.

[5] 王淑靜.桂枝湯對馬錢子減毒及抗炎鎮(zhèn)痛作用影響的實驗研究[D].鄭州：河南中醫(yī)學院，2015.

[6] 李朝陽，邱海彥，婁玉鈐，等.配伍肉桂、桂枝對制馬錢子抗炎鎮(zhèn)痛影響的實驗研究[J].風濕病與關節(jié)炎，2013，2（5）：17-20.

[7] 苗根旺，婁玉鈐，李朝陽，等.配伍生地黃、熟地黃對制馬錢子抗炎、鎮(zhèn)痛影響的實驗研究[J].風濕病與關節(jié)炎，2013，2（3）：21-24.

[8] 李朝陽.馬錢子在治療風濕病中的配伍減毒與增效研究[D].鄭州：河南中醫(yī)學院，2012.

[9] 王秋玲.赤芍與白芍質量差異及其形成機制研究[D].北京：北京中醫(yī)藥大學，2012.

[10] 吳金雄.白芍、赤芍化學成分與活血功效的比較研究[D].廣州：廣州中醫(yī)藥大學，2012.

[11] 王巧.芍藥質量控制方法與白芍總苷藥物動力學研究[D].沈陽：沈陽藥科大學，2005.

[12] 裴艷霞.略談赤芍白芍的異同點[J].光明中醫(yī)，2011，26（9）：1934.

[13] 李曉麗，宋振華，秦林.馬錢子配伍赤芍前后毒性及鎮(zhèn)痛抗炎作用的實驗研究[J].中國中西醫(yī)結合雜志，1998，18（S1）：286-289.

[14] 胡錫琴，喬雷，林飛，等.配伍赤芍對馬錢子LD50和鎮(zhèn)痛作用的影響[J].陜西中醫(yī)學院學報，2009，32（2）：57-58.

[15] 吳鵬，魏盼，李戀曲，等.桂枝湯通過抑制淋巴細胞向Th2細胞分化抑制變應性接觸性皮炎[J].中國藥理學通報，2019，35（10）：1461-1466.

收稿日期：2020-08-20;修回日期：2020-09-25