張 晶,徐小薈,趙書彬,張曦元,熊麗輝*
(1.長春中醫(yī)藥大學(xué),長春 130117;2.松原市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院,吉林 松原 138000)
胃脘痛[1]也稱為胃痛,為臨床中內(nèi)科常見疾病之一,與季節(jié)、氣候、地理等條件密切相關(guān)。東北地區(qū)緯度高,冬季寒冷,寒邪客胃證更為多見?!端貑枴ふ{(diào)經(jīng)論》曰:“氣血不和,百病乃變化而生?!盵2]脾胃為后天之本,氣血生化的源泉。寒邪客胃,易傷陽氣,致使氣機(jī)不暢,氣血不通則痛。王魯民[3]提出“天下疾病,唯寒不破,治療疾病,重在治寒”理論。目前,胃脘痛的實驗研究多以脾胃虛寒為主,模型易于復(fù)制且治療經(jīng)驗豐富。反之,寒邪客胃證的研究較少且治療單一。我們將主要研究單純寒邪對胃腸動力的影響,通過檢測胃排空和小腸推進(jìn)度進(jìn)一步說明其影響程度。
本研究選用的方劑良附丸出自清代謝元慶《良方集腋》。組方中高良姜味辛性熱,歸脾胃經(jīng),為祛寒濕、溫脾胃的要藥;香附辛平,微苦干,歸肝脾三焦經(jīng),醋制為疏肝解郁,理氣調(diào)中的常用藥。二者合用溫中散寒、行氣止痛。我們通過對治療組和模型組的比較分析,進(jìn)一步探究寒邪的影響程度及驗方良附丸的有效性。現(xiàn)將實驗方法及結(jié)果報道如下。
1.1 動物 雄性SD大鼠100只,SPF級,體質(zhì)量(200±20)g,動物許可證號:SCXK(遼)2015-0001。由遼寧長生生物技術(shù)股份有限公司提供。于長春中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿實驗室進(jìn)行造模實驗,室內(nèi)溫度22~25 ℃。
1.2 藥物 高良姜,醋香附均購于長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院免煎顆粒藥房。高良姜9 g,醋香附9 g,按照人和動物體表面積法[4],免煎顆粒和中藥劑量換算法,大鼠按照0.2 g·mL-1,每100 g給藥1 mL,計算出藥量后,稀釋溶解于冰箱保存,用前加熱。
1.3 制備半固體糊 參照文獻(xiàn)[5-6]方法,天平稱取10 g羧甲基纖維素鈉,溶解于250 mL的蒸餾水中,之后分別加入奶粉16 g,糖8 g,淀粉8 g和活性炭末2 g,攪拌均勻。配制成300 mL約300 g的黑色半固體糊儲存于4 ℃冰箱,用前稍加熱并搖勻。
1.4 試劑與儀器 10%水合氯醛、生理鹽水、羧甲基纖維素鈉、淀粉、糖、奶粉、活性炭、電子天平、體重秤、手術(shù)剪、鑷子、棉線繩子、小鼠灌胃針頭、注射器、燒杯(100 mL)、玻璃棒、卷尺等。
1.5 方法
1.5.1 分組和給藥 選取SD大鼠100只,適應(yīng)性喂養(yǎng)2 d后稱量體質(zhì)量,Excel表格錄入,按體質(zhì)量分為7組,分別是正常組、模內(nèi)組、模外組、?;旖M、治內(nèi)組、治外組、治混組,每組10只。治療組予以良附丸免煎顆粒,研粉沖水后大鼠依照0.2 g·mL-1,每100 g 給藥1 mL,每日上午8時給藥1次,一共給藥7 d。
1.5.2 造模和實驗 本實驗參照胃實寒[7]造模方法,再此基礎(chǔ)上進(jìn)行改良。模內(nèi)冰水灌胃法:從冰箱取出冷凍好的蒸餾水,待其融化至冰水混合物時,按每100 g給藥2 mL灌胃,每日2次。模外束縛敷冰法:用粗棉繩將大鼠四肢束縛,上下肢分別交叉綁在冰凍好的礦泉水瓶上,每次20 min,每日1次,生理鹽水灌胃每日2次。?;鞛閮烧呓Y(jié)合。大鼠定量飲食每組200 g,飲水400 mL,于每日8時記錄體質(zhì)量、飲食、飲水等變化。治療組在造模前灌藥,每日1次,間隔4 h。7 d后,解剖取材。
1.6 實驗指標(biāo)檢測
1.6.1 一般情況檢測 實驗7 d,每天檢測大鼠體質(zhì)量、飲食、飲水、毛發(fā)等變化。
1.6.2 胃排空率檢測 最后1 d造模給藥后,大鼠禁食不禁水12 h,實驗當(dāng)天大鼠按 3 mL·kg-1半固體胡灌胃[8-9],30 min后麻醉取材。腹主動脈取血后,打開腹腔,手術(shù)線結(jié)扎幽門和賁門,取出胃,用濾紙稀釋干凈血液后稱總重,而后沿胃大彎剪開,生理鹽水洗去胃內(nèi)容物,濾紙吸干水分,稱凈重。胃中殘留率=(胃全重-胃凈重)/所灌半固體糊×100%;胃排空率=[1-(胃全質(zhì)量-胃凈質(zhì)量)/灌胃量]×100%[8-11]。
1.6.3 小腸推進(jìn)度率檢測 取完胃后,分離腸,將幽門到回盲部的腸管分離出來并測量長度,此為小腸總長度,之后測炭末推進(jìn)度,即幽門部到炭末移動的最遠(yuǎn)距離,計算小腸推進(jìn)率。小腸推進(jìn)率(%)=幽門部到炭末前沿的長度/小腸的總長度×100 %。
1.7 統(tǒng)計學(xué)方法 選用 SPSS 19.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行分析總結(jié),計數(shù)資料采用百分率和χ2表示,計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
2.1 各組大鼠飲食、飲水與體質(zhì)量變化比較 見表1。
表1 各組大鼠飲食、飲水與體質(zhì)量變化比較(±s,n =10)
表1 各組大鼠飲食、飲水與體質(zhì)量變化比較(±s,n =10)
注:與空白組比較,### P<0.001;與相應(yīng)模型組比較,△P<0.05,△△P<0.01,△△△P<0.001
3.2 各組大鼠胃殘留率、排空率與小腸推進(jìn)率變化比較 見表2。
表2 各組大鼠胃殘留率、排空率與小腸推進(jìn)率變化比較(±s,n =10) %
表2 各組大鼠胃殘留率、排空率與小腸推進(jìn)率變化比較(±s,n =10) %
注:與空白組比較,### P<0.001;與相應(yīng)模型組比較,△P<0.05,△△P<0.01,△△△P<0.001
本研究分析寒邪客胃與氣血之間的關(guān)系,探討寒邪客胃型胃脘痛的特征,進(jìn)而更好服務(wù)于臨床。本研究結(jié)果表明,模內(nèi)和模外、?;煜啾?,對大鼠飲食、體質(zhì)量的影響不大,與畢殿紅[12]研究有所不同,說明外寒影響程度大于內(nèi)寒。我們改良后的造模方法,符合寒邪客胃證,對胃腸功能有抑制作用,能夠減輕胃排空率[13-14],但實驗發(fā)現(xiàn)良附丸對胃排空的治療作用不顯著,可能與高良姜水煎劑抑制胃腸蠕動有關(guān)[13]。實驗創(chuàng)新發(fā)現(xiàn)內(nèi)寒能夠明顯降低寒邪客胃證大鼠的小腸推進(jìn)率,外寒對其影響不顯著,通過良附丸的治療能顯著改善大鼠小腸推進(jìn)率,增強(qiáng)胃腸動力,進(jìn)一步明確不同寒邪對大鼠的影響,指導(dǎo)臨床選擇最優(yōu)治療方案。
在實驗的過程中,我們發(fā)現(xiàn)胃底部伴有不同程度脹滿,血流變學(xué)有改變,實驗結(jié)果顯示溫里散寒效果不是很明顯,繼而提出新的問題,寒邪客胃易出現(xiàn)氣滯和血瘀,寒邪客胃證的治療是否應(yīng)以標(biāo)實為主,本虛為次。通過對《中華醫(yī)典》的搜索,篩選出胃實寒的治療多以散寒、行氣、活血為主,但未明確說明三者權(quán)重,所以所以接下來的我們將就此展開深入研討,以散寒、行氣、活血法探討寒邪客胃治療權(quán)重,為臨床胃實寒的治療提供新思路。