何 社 軍

(靈寶市第一人民醫(yī)院醫(yī)學檢驗科 靈寶 472500)

淋巴結結核主要由結核分支桿菌感染引發(fā)所致，是臨床高發(fā)肺外結核病類型之一，多發(fā)于20～40歲青壯年群體及≤12歲的兒童群體，嚴重威脅患者身心健康[1]。隨著現代醫(yī)學技術的進步和發(fā)展，利用光學顯微鏡鑒別結核分支桿菌成為了行之有效的方法，但臨床確診仍需要結合生化試驗及病菌培養(yǎng)結果。為了有效檢出分枝桿菌，提高淋巴結結核患兒分支桿菌檢測陽性率，本研究以我院確診的157例淋巴結結核患兒為研究對象，就羅氏培養(yǎng)法和涂片鏡檢法的檢測結果進行了如下探討，以供參考。

1 材料與方法

1.1 標本材料

選取2015年9月～2018年9月醫(yī)院兒科確診的的157例淋巴結結核患兒，采用細針穿刺法吸取活檢組織樣本，樣本選取量0.6～4.0ml。

1.2 儀器材料

上海普赫光電科技有限公司提供的Olympus光學顯微鏡； 青島海博生物公司提供的萋-尼氏抗酸染液和硝基苯甲酸生長試驗(PNB法)鑒定培養(yǎng)基；濟南賽爾生物科技有限公司提供的中性羅氏培養(yǎng)基。

1.3 方法

按照1∶1的濃度，用2%NaOH-N-乙酰半胖氨酸消化處理采集樣本，終濃度1%，渦旋震蕩30s，消化20min，添加pH6.8的無菌磷酸鹽緩沖液直至50ml，離心15min，3000r/min，取沉淀物添加pH6.8無菌磷酸鹽緩沖液1ml混合均勻，待接種、涂片。(1)涂片鏡檢法：混勻處理后的樣本，用滴管戲曲0.1ml涂于載玻片正面右側約2/3處，自然干燥?；鹧婀潭ê蟛捎每顾崛旧R檢，抗酸桿菌呈紅色，背景呈藍色。分級標準如下：抗酸桿菌陰性(-)：0條/300個視野；具體抗酸桿菌數目：抗酸桿菌(4+)：每個視野≥10條；抗酸桿菌(3+)：每個視野1～9條；抗酸桿菌(2+)：每10個視野1～9條；抗酸桿菌(1+)：每100個視野3～9條；每300個視野1～8條[2]。(2)涂片鏡檢法：取處理后的樣本100μl，分別接種至兩個中性羅氏培養(yǎng)基上，室溫(37℃)下平臥培養(yǎng)基斜面，24h后調整為直立放置，接種第3d、第7d分別觀察1次，之后每周觀察1次，記錄培養(yǎng)基斜面菌落生長情況。滿8周后報告陰性者。(3)根據《結核病診斷實驗室檢驗教程》采用PNB法鑒定分支桿菌菌型[3]。

1.4 統計學方法

用SPSS23.0處理數據，以χ2檢驗計數資料[n(%)]，P<0.05時，表明有統計學差異。

2 結果

2.1 羅氏培養(yǎng)和涂片鏡檢結果分析

羅氏培養(yǎng)結果提示，157例患兒陽性48例(30.57%)，陰性109例(69.43%)，其中陽性分級情況如下：4+占比6.25%(3/48)，3+占比8.33%(4/48)，2+占比4.17%(2/48)，1+占比25.00%(12/48)，3～20個占比33.33%(16/48)，1～2個占比22.92%(11/48)。涂片鏡檢結果提示，陽性100例(63.69%)，陰性57例(36.31%)，其中陽性分級情況如下：4+占比7.00%(7/100)，3+占比9.00%(9/100)，2+占比14.00%(14/100)，1+占比30.00%(30/100)，3～8個占比25.00(25/100)，1～2個占比15.00%(15/100)。

2.2 兩種方法檢查結果的一致性分析

涂片分級和羅氏培養(yǎng)的檢查結果一致性分析，見表1。

2.3 兩種培養(yǎng)方法結果一致性分布

由上述分析結果可知，羅氏培養(yǎng)診斷陽性者48例中包含真陽41例，109例陰性者包括真陰50例；涂片鏡檢診斷陽性者100例中包含真陽41例，109例陰性者中包括真陰50例。據此可知，涂片鏡檢和羅氏培養(yǎng)診斷均為陽性者41例，均為陰性者50例，兩種方法結合可明確診斷者比例為57.96%(91/157)。

2.4 兩種方法檢驗結果的陽性率對比

根據上述研究結果可知，涂片鏡檢的陽性率為63.69%(100/157)，羅氏培養(yǎng)的陽性率為30.57%(48/157)，兩種方法檢驗結果的陽性率對比，χ2=35.559，P=0.000。

2.5 菌種檢驗結果分析

根據PNB法檢測結果發(fā)現48株病菌分離株中包括結核桿菌復合群47株，占比97.92%(47/48)；非結核分枝桿菌1株，占比2.08%(1/48)。

3 討論

結合本文實踐結果可知，PNB法鑒定的結核分枝桿菌復合群為47株，在全部分離株中占比達到了97.92%，提示淋巴結結核患兒多為結核分支桿菌復合群感染病例。本文研究中中發(fā)現，為了提高離心沉淀后涂片鏡檢陽性率，應注意下述要點：(1)提高樣本采集數目，預先確認檢查項目，結合檢查項目科學分配標本；(2)先使用低倍鏡確認片狀有效成分，再調換成油鏡詳細鏡檢；(3)嚴格控制離心力，這是因為離心過小沉淀物容易懸浮，導致濃縮集菌流失；(4)調低染色時的沖洗水流量，避免標本從玻片上脫落[4]。

表1 兩種方法檢查結果的一致性分析[n(%)]

涂片分級羅氏培養(yǎng)4+3+2+1+3～20個1～2個陰性合計4+311000273+110311292+0114305141+00054219303～8個00014218251～2個0000111315陰性0010335057合計342121611109157

有學者對269例淋巴結結核患兒研究后發(fā)現，細針穿刺取活檢組織，經消化處理、離心沉淀等操作濃縮集菌，能夠有效提高涂片鏡檢的分支桿菌陽性率，其中涂片鏡檢陽性率顯著高于培養(yǎng)法陽性率，而結核分枝桿菌復合群是導致淋巴結結核患兒發(fā)生的主要致病菌[5]。與既往報道結果相吻合，本文研究發(fā)現涂片鏡檢的分枝桿菌檢測陽性率遠高于羅氏培養(yǎng)法，初步分析這與部分患者近期接受過廣譜抗生素治療、培養(yǎng)過程中發(fā)生污染等因素密切相關，因此有必要加強淋巴結結核患兒分枝桿菌檢測環(huán)節(jié)的質控力度。

綜上所述，采用細針穿刺提取組織樣本、消化處理、離心沉淀等措施濃縮集菌，可有效提高涂片鏡檢檢出分支桿菌的陽性率，有利于醫(yī)師準確檢出分支桿菌，明確患兒疾病類型，對后續(xù)科學制定診療方案發(fā)揮著積極的作用，同時為了進一步明確患兒致病菌類型，有必要鑒定培養(yǎng)陽性菌株菌型。