馮義志，梁 林，張愛娟，林東森，任玉鵬，馬新剛，李文平，左伯軍*

(1.山東省農(nóng)藥科學(xué)研究院 山東省化學(xué)農(nóng)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 濟(jì)南 250033 2.棲霞市綜合行政執(zhí)法局， 山東 煙臺 265300)

蟲螨腈又名溴蟲腈(chlorfenapyr) ，化學(xué)名稱為4- 溴基-2-(4- 氯苯基)-1-(乙氧基甲基)-5-(三氟甲基)吡咯-3-腈，作用于昆蟲細(xì)胞的線粒體，主要抑制二磷酸腺苷(ADP)向三磷酸腺苷(ATP)的轉(zhuǎn)化，具有胃毒、觸殺活性，可防治小菜蛾、斜紋夜蛾、薊馬、菜蚜等多種害蟲[1]。然而，醫(yī)學(xué)研究表明，蟲螨腈對人、鳥、魚、蠶低毒，同時對小鼠的肝、脾、腎細(xì)胞DNA會產(chǎn)生損傷[2]。因此，許多國家對蟲螨腈在農(nóng)產(chǎn)品中的殘留限量都進(jìn)行了嚴(yán)格的規(guī)定。我國食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定了蟲螨腈在黃瓜等多種作物中的最大殘留限量，但尚未規(guī)定蟲螨腈在姜中的最大殘留限量[3]。目前，蟲螨腈在茶葉、小白菜、大白菜、水稻、蘋果、黃瓜、桃、茄子中殘留等研究已有報道[4-12]，氣相色譜法測定蟲螨腈在姜中的殘留尚未見報道。本試驗(yàn)研究并建立蟲螨腈在姜中殘留的氣相色譜法，同時通過1年四地的田間試驗(yàn)研究了240g/L蟲螨腈懸浮劑在姜和植株中的殘留動態(tài)及殘留水平，旨在為該藥劑在姜上的科學(xué)合理使用以及制定我國蟲螨腈在姜中最大殘留限量(MRL)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料 供試農(nóng)藥：240g/L蟲螨腈懸浮劑；蟲螨腈標(biāo)準(zhǔn)品(純度為99.0%)，購自Dr.Ehrenstorfer.GmbH；供試作物：姜；品種：山東為棉姜、安徽為魯姜1號、四川為大姜，廣西為小黃姜；氣相色譜儀(2010-plus)配ECD檢測器；多功能食品加工機(jī)(XBLL-25A)；電子天平(JA21002)；離心機(jī)(TDL-5-A)。氯化鈉(分析純)；乙酸乙酯 (分析純)。

1.2 田間試驗(yàn)設(shè)計 按照《農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則》[13]和《農(nóng)藥登記殘留田間試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》[14]要求設(shè)試驗(yàn)小區(qū)，小區(qū)面積30m2，重復(fù)3次，小區(qū)間設(shè)保護(hù)帶。另設(shè)對照小區(qū)。試驗(yàn)地點(diǎn)：山東、安徽、四川和廣西；試驗(yàn)時間：2017年；240g/L蟲螨腈懸浮劑在姜上防治甜菜夜蛾的推薦使用劑量： 54～72g a.i/ha，在甜菜夜蛾卵孵盛期至低齡幼蟲期施藥1次。

1.2.1 消解動態(tài)試驗(yàn) 消解動態(tài)按360g a.i/ha于姜生長期施藥，分別于施藥后當(dāng)天(施藥后2 h)1、3、5、7、14、21、28、35、42d在小區(qū)中按棋盤式分布，剪取土表以上的全株，每小區(qū)每次采樣量≥2kg。將植株樣本用不銹鋼刀具切碎，混勻后，用四分法分取100g 2份，裝入可封口的樣品袋中，貼好標(biāo)簽后立即放于-18℃冰柜中待測。

1.2.2 最終殘留試驗(yàn) 設(shè)2個施藥劑量：低劑量72 g a.i./ha(推薦最高劑量)，高劑量108g a.i/ha (推薦最高劑量的1.5倍)，各1～2次施藥，施藥間隔7d，末次施藥后間隔7、14、21d在小區(qū)中按棋盤式分布采樣，在距選定的姜秧約5cm處用鐵鍬將下部塊莖翻出、拔下，抖掉塊莖上泥土。每小區(qū)采9個點(diǎn)，采集塊莖≥2kg。將姜樣本用流動的涼水沖洗，然后用干凈的吸水紙吸干，用不銹鋼刀具切碎，混勻后，用四分法分取150g 2份，分別裝入可封口樣品袋中，貼好標(biāo)簽后立即放入-18℃冰箱中待測。

1.3 分析方法

1.3.1 樣品前處理方法 將姜樣品用食品調(diào)理儀進(jìn)行粉碎，準(zhǔn)確稱取10.0g(植株5.0g)樣品至50mL具塞離心管內(nèi)，加入5mL水(植株10mL)和10mL乙酸乙酯，渦旋5min；加入4g氯化鈉，劇烈搖晃30s，4 000r/min離心5min；取上清液約1mL，用40mgPSA和100mg無水硫酸鎂凈化，經(jīng)0.22μm濾膜過濾，待測。

圖1 蟲螨腈溶劑標(biāo)樣0.01mg/L色譜圖

1.3.2 色譜測定條件 毛細(xì)管色譜柱：Rxi-1MS(30m×0.25μm×0.25mm)；載氣：氮?dú)?純度>99.999%)；柱流量：1.5mL/min；吹掃流量：3mL/min；進(jìn)樣體積：1μL；分流比：不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣口溫度：250℃；柱溫：初始溫度100℃保持1min，以10℃/min升至280℃，保持9min；檢測器溫度：280℃；尾吹流量：30mL/min。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作 將1 000mg/L的蟲螨腈標(biāo)準(zhǔn)溶液用乙酸乙酯稀釋配得5、1、0.5、0.1、0.05、0.01mg/L系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，在1.3.2節(jié)色譜條件下進(jìn)行測定。

1.3.4 添加回收率測定 在空白姜和植株樣品中分別按照0.01、0.05、0.5mg/kg和0.02、0.2、5mg/kg水平添加蟲螨腈標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個濃度5次平行試驗(yàn)。按1.3.1節(jié)方法進(jìn)行提取、凈化，按1.3.2節(jié)色譜條件進(jìn)行檢測，測定回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性范圍及檢出限 以峰面積Y為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣質(zhì)量濃度X為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，在0.01～5mg/L范圍內(nèi)，蟲螨腈峰面積與進(jìn)樣質(zhì)量濃度間呈良好的線性關(guān)系，線性方程分別為Y=5 075 840.7X+1 102 019.8，相關(guān)系數(shù)r=0.994 0。通過最小添加水平得到姜和植株的定量限(LOQ)分別為0.01和0.02mg/kg。

2.2 蟲螨腈的添加回收率和精密度 添加不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的蟲螨腈于空白基質(zhì)中，進(jìn)行添加回收試驗(yàn)(表1)。結(jié)果表明：蟲螨腈在2種基質(zhì)中不同添加水平的平均回收率為90.6%～104.3%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.3%～10.9%。

表1 蟲螨腈在姜和植株中的添加回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

續(xù)表

2.3 蟲螨腈在姜植株中的消解動態(tài) 消解動態(tài)試驗(yàn)結(jié)果表明：蟲螨腈在姜植株中降解動態(tài)符合一級動力學(xué)方程(表2)，山東和安徽姜植株中蟲螨腈的半衰期分別為6.0和8.2d。

表2 蟲螨腈在姜植株中的消解動力學(xué)方程

2.4 蟲螨腈在姜中的最終殘留量 在山東、安徽、四川和廣東四地，按照推薦低劑量72g a.i/ha，高劑量108g a.i/ha，各1～2次施藥，施藥間隔7d，末次施藥后間隔7、14、21d樣品。四地最終采收間隔7d的姜樣品中蟲螨腈殘留量在<0.01～0.134mg/kg之間，殘留中值為0.031 0mg/kg；最終采收間隔14d的姜樣品中蟲螨腈殘留量在<0.01～0.163mg/kg之間，殘留中值為0.01mg/kg；最終采收間隔21d的姜樣品中蟲螨腈殘留量在<0.01～0.049 5mg/kg之間，殘留中值為0.01mg/kg。

3 結(jié)論和討論

建立了蟲螨腈在姜和植株中的殘留分析方法。結(jié)果表明：蟲螨腈在姜中添加回收率為82.7%～106.9%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.0%～10.9%。在植株中添加回收率為89.6%～107.4%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.3%～2.7%。本試驗(yàn)中蟲螨腈在姜和植株中的最低檢出質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.01和0.02mg/kg。方法的重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確度、精密度及檢出限均可滿足該農(nóng)藥的殘留分析要求。

蟲螨腈在姜植株中的殘留消解均符合一級動力學(xué)方程，其中蟲螨腈在姜植株中的半衰期分別為6.0和8.2d。本試驗(yàn)結(jié)果表明240g/L蟲螨腈懸浮劑按照72～108g a.i./ha劑量，分別施藥1～2次，末次施藥采樣間隔21d采集最終姜樣品中蟲螨腈的殘留量在<0.01～0.049 5mg/kg之間。目前，我國尚未制定蟲螨腈在姜上的最大殘留限量，日本和歐盟規(guī)定蟲螨腈在姜中的殘留限量為0.05mg/kg。以此為參考，建議推薦安全間隔期為21d。本試驗(yàn)結(jié)果不僅為蟲螨腈在姜上的合理使用標(biāo)準(zhǔn)提供了科學(xué)依據(jù)，對制定蟲螨腈在姜上的最大殘留限量也提供了數(shù)據(jù)支持。