陳 鑫，蘭 康，羅 興，陶詩(shī)順，黃 晶

(西南科技大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，四川 綿陽(yáng) 621010)

【研究意義】“油菜-水稻”是四川盆地重要的種植模式之一。油菜秸稈中富含氮、磷、鉀等元素，若將其合理還田，可提高土壤有機(jī)質(zhì)含量和土壤肥力，進(jìn)而促進(jìn)后茬作物的生長(zhǎng)發(fā)育及產(chǎn)量形成[1-3]。近年來(lái)，隨著農(nóng)業(yè)機(jī)械化的發(fā)展，油菜收獲后，秸稈可隨旋耕機(jī)翻埋到土壤中，省時(shí)省力，易被農(nóng)戶(hù)接受。然而，大量生產(chǎn)實(shí)踐表明，油菜秸稈翻埋還田容易引起后茬水稻前期生長(zhǎng)不良。前人已從水稻地上部分生長(zhǎng)、根系發(fā)育等方面對(duì)秸稈翻埋還田造成的抑制作用進(jìn)行研究[4-7]，但鮮有結(jié)合水稻葉片生理活動(dòng)相關(guān)酶活性變化進(jìn)行深入分析。因此，明確油菜秸稈翻埋還田后水稻前期葉片的生理變化及其與農(nóng)藝性狀變化的關(guān)系具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】植物受到逆境脅迫時(shí)，其植物形態(tài)會(huì)與正常形態(tài)產(chǎn)生差異，與之相關(guān)的是一系列生理生化的變化過(guò)程，例如酶活性的升高或降低[8]。過(guò)氧化物酶(POD)在植物體內(nèi)的主要作用是清除H2O2，保護(hù)細(xì)胞免受毒害損傷[9]。有研究表明當(dāng)水稻受到淹水、低溫、鹽等脅迫時(shí)，POD酶活性會(huì)升高[10-12]。氮素是限制植物生長(zhǎng)和產(chǎn)量形成的首要因素，硝酸還原酶(NR)和谷氨酰胺合成酶(GS)在水稻植株氮素代謝中起著重要作用[13]。當(dāng)水稻受到低氧、氮磷等脅迫時(shí)，NR和GS酶活性升高[13-15]。油菜秸稈翻埋還田抑制水稻植株生長(zhǎng)也必然與一系列酶活性變化有關(guān)?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】在油菜秸稈翻埋還田條件下，上述與水稻植株抗氧化能力及氮代謝相關(guān)的幾種酶活性究竟會(huì)發(fā)生何種變化，有待深入研究。【擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題】本研究擬通過(guò)田間試驗(yàn)，研究油菜秸稈翻埋還田條件下水稻前期農(nóng)藝性狀及葉片幾種關(guān)鍵酶(POD、NR、GS)活性的變化，以期明確水稻生長(zhǎng)受秸稈翻埋抑制的生理機(jī)制，進(jìn)而為油菜秸稈科學(xué)還田及水稻高產(chǎn)高效栽培提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)地簡(jiǎn)介及供試材料

試驗(yàn)于2018年4-9月在四川省綿陽(yáng)市青義鎮(zhèn)西南科技大學(xué)農(nóng)場(chǎng)(104.7°E，31.5°N；海拔582 m)進(jìn)行，該地區(qū)氣候?qū)儆趤啛釒Ъ撅L(fēng)性濕潤(rùn)氣候，年平均氣溫約16.3 ℃，年平均降水量為963.2 mm，年日照時(shí)數(shù)約1298.1 h，年無(wú)霜期約272 d。試驗(yàn)前0～20 cm土壤容重為1.5 g/cm3，土壤pH為7.1，有機(jī)質(zhì)含量為13.3 g/kg，有效氮含量為89.2 mg/kg，有效磷含量為8.0 mg/kg，有效鉀含量為63.9 mg/kg。

前茬油菜品種為川油36，供試水稻品種為秈型三系雜交水稻宜香優(yōu)2115。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

設(shè)置油菜秸稈不還田(CK1)、油菜秸稈覆蓋還田(CK2)與油菜秸稈翻埋還田(RI)3個(gè)處理。采用完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，4次重復(fù)，小區(qū)面積3 m×4 m。前茬油菜收獲后，將油菜秸稈全部移出田塊，按照450 kg/667 m2油菜秸稈干基計(jì)算每個(gè)小區(qū)秸稈還田量，每個(gè)小區(qū)還田秸稈8 kg，試驗(yàn)所用油菜秸稈均經(jīng)秸稈還田機(jī)械粉碎至3～5 cm，晾干備用。RI處理的油菜秸稈于水稻移栽前用微型旋耕機(jī)翻埋到土壤中，翻埋深度約為15～20 cm，CK2處理的油菜秸稈在水稻移栽后第3天均勻覆蓋于水稻行間。

水稻于2018年4月11日進(jìn)行旱地育秧。5月28日，選擇分蘗數(shù)為2～3個(gè)且長(zhǎng)勢(shì)一致的水稻秧苗進(jìn)行移栽，寬行50 cm，窄行25 cm，株距17 cm，每個(gè)小區(qū)栽種200株。小區(qū)道路兩邊設(shè)置保護(hù)行，小區(qū)間用自制防水隔板隔檔以防滲水滲肥。水稻復(fù)合肥(N∶P2O5∶K2O=23∶5∶7)按150 kg/hm2純氮進(jìn)行折算，基肥與分蘗肥的比例=1∶1?；试谒疽圃郧笆┯?，分蘗肥在水稻移栽2周后施用。水稻移栽后保持田面2～3 cm水層，6月26日開(kāi)始曬田，7月16日結(jié)束曬田。其他管理措施同當(dāng)?shù)馗弋a(chǎn)田。

1.3 樣品采集與測(cè)定

1.3.1 農(nóng)藝性狀測(cè)定 從水稻移栽7 d后開(kāi)始取樣，每周1次，直至?xí)裉锲诮Y(jié)束取樣。取樣時(shí)，每個(gè)小區(qū)選取2株具有代表性的植株，以稻株為中心，按26.7 cm×16.7 cm、深30 cm的土柱進(jìn)行取根，取出后分別置于0.4 mm孔徑尼龍網(wǎng)袋中用流水將根系泥土沖凈。迅速帶回實(shí)驗(yàn)室，分開(kāi)水稻地上與地下部分，測(cè)量株高與分蘗，統(tǒng)計(jì)黑根、白根、黃根數(shù)并計(jì)算單株根系總數(shù)。將水稻根系與地上部分裝進(jìn)信封袋，置于烘箱105 ℃下殺青0.5 h，80 ℃烘干至恒重，計(jì)算單株干物質(zhì)積累量。

1.3.2 酶活性測(cè)定 將每次取樣的植株迅速帶回實(shí)驗(yàn)室用液氮處理，選取水稻植株最后一片完全葉進(jìn)行POD、NR、GS酶活性的測(cè)定。POD活性測(cè)定采用愈創(chuàng)木酚法，以每克組織在每毫升反應(yīng)體系中每分鐘使470 nm下吸光值變化0.01為一個(gè)酶活力單位；NR活性采用活體法，以每小時(shí)每克鮮重樣品中催化產(chǎn)生1 μmol NO2ˉ的量為一個(gè)酶活力單位；GS活性測(cè)定采用鐵絡(luò)合比色法，以每克組織在每毫升反應(yīng)體系中每分鐘使540 nm下吸光值變化0.005為一個(gè)酶活力單位。具體測(cè)定方法參照文獻(xiàn)[16]。

1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

采用Excel 2013進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，SPSS 22.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，SigmaPlot 10.0作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 油菜秸稈翻埋還田對(duì)水稻植株生長(zhǎng)的影響

與油菜秸稈不還田(CK1)、油菜秸稈覆蓋還田(CK2)相比，油菜秸稈翻埋還田處理(RI)在水稻移栽后7～35 d，水稻植株的分蘗數(shù)及株高均受到抑制。從分蘗情況來(lái)看(圖1 A)，RI處理各個(gè)取樣時(shí)期的分蘗數(shù)均低于CK1與CK2；從21 d開(kāi)始，RI分蘗數(shù)顯著低于CK1，28 d時(shí)二者差異達(dá)到最大；RI分蘗數(shù)從28 d開(kāi)始顯著低于CK2；曬田期間(35 d)，RI分蘗數(shù)仍低于CK1與CK2，其中RI顯著低于CK2。植株株高變化趨勢(shì)與分蘗變化情況較為一致(圖1 B)，RI處理各個(gè)取樣時(shí)期植株株高均低于CK1與CK2；從14、28 d開(kāi)始，RI處理株高分別顯著低于CK1與CK2。CK1與CK2處理水稻分蘗與株高變化各個(gè)取樣時(shí)期均無(wú)顯著差異。

與CK1和CK2相比，RI處理在水稻移栽后14～35 d，抑制水稻地上、地下部干物質(zhì)積累。從水稻地上部干物質(zhì)積累量來(lái)看(圖1 C)，RI地上部干物質(zhì)積累量在水稻移栽后7～35 d均低于CK1與CK2，其中，水稻移栽后14～35 d，RI顯著低于CK1與CK2，降低量分別達(dá)到0.14～6.97 g和0.22～5.15 g，在28 d時(shí)分別達(dá)到最大差異。從水稻地下部干物質(zhì)積累量來(lái)看(圖1 D)，RI地下部干物質(zhì)積累量在水稻移栽后14～35 d低于CK1與CK2，其中，RI在21～28 d顯著低于CK1，分別低0.30、0.73 g；RI在14～28 d顯著低于CK2，分別低0.08、0.24、0.92 g。CK1與CK2的地上、地下部干物質(zhì)積累量差異不顯著。

2.2 油菜秸稈翻埋還田對(duì)水稻根系數(shù)量的影響

水稻根系生長(zhǎng)發(fā)育狀況直接影響水稻植株的生長(zhǎng)發(fā)育。RI處理的水稻總根數(shù)和白根數(shù)均低于CK1和CK2(圖2)。水稻移栽后14～35 d，RI處理的水稻總根數(shù)顯著低于CK1與CK2處理。白根作為水稻的新生根系，它的數(shù)量直接反映了根系整體活力和代謝效率。從白根數(shù)來(lái)看(圖2 B)，RI在水稻移栽后7～35 d低于CK1(28 d時(shí)除外)，在35 d時(shí)顯著低于CK1；RI在水稻移栽后7～35 d均低于CK2，其中，在移栽后28和35 d時(shí)顯著低于CK2。從白根數(shù)的變化曲線(xiàn)上看，隨著水稻生育進(jìn)程推移，白根數(shù)在快速增加，21 d后，RI處理的白根數(shù)有所下降，而CK2處理的白根數(shù)仍然在增加。

2.3 油菜秸稈翻埋還田對(duì)水稻葉片POD、NR、GS酶活性的影響

油菜秸稈不同還田方式下水稻葉片的POD活性呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢(shì)(圖3 A)。整體來(lái)看，RI在整個(gè)觀(guān)測(cè)階段POD活性最高；水稻移栽后7～21 d，RI與CK1之間差異較小，21 d后，RI的POD活性顯著高于CK1，分別高214.7、100.9個(gè)活性單位(U/g 鮮重)；RI的POD活性在水稻移栽后7～35 d均顯著高于CK2，高出61.7～219.8個(gè)活性單位(U/g 鮮重)；CK2與CK1之間差異不顯著。

水稻葉片NR、GS酶活性在3種處理下總體表現(xiàn)為RI和CK2處理高于CK1(圖3 B, C)。與CK1相比，水稻移栽后7～35 d，RI處理的NR、GS酶活性顯著高于CK1(水稻移栽后14 d時(shí)NR酶活性除外)；與CK2相比，水稻移栽21 d前，CK2的NR、GS酶活性高于RI，水稻移栽后21 d，RI高于CK2，且RI處理的NR酶活性在移栽7和28 d時(shí)顯著高于CK2，分別高0.20和0.15個(gè)活性單位(μmol/h/g鮮重)，但RI處理的GS酶活性與CK2之間差異不顯著。

圖1 油菜秸稈翻埋還田對(duì)水稻分蘗數(shù)(A)、株高(B)、地上部(C)及地下部(D)干物質(zhì)積累的影響Fig.1 Effects of rape residue incorporation on tiller number (A), plant height (B), dry weight of shoot (C) and roots (D) of rice

圖2 油菜秸稈翻埋還田對(duì)水稻總根數(shù)(A)及白根數(shù)(B)的影響Fig.2 Effects of rape residue incorporation on total root numbers (A) and white root numbers (B) of rice

圖3 油菜秸稈翻埋還田對(duì)水稻葉片POD(A)、NR(B)、GS(C)酶活性的影響Fig.3 Effects of rape residue incorporation on POD (A), NR (B), GS (C) activity in rice leaves

3 討 論

前人研究表明，秸稈還田會(huì)降低水稻前期分蘗數(shù)、株高、干物質(zhì)積累及根系活力[4-7]。本研究中，油菜秸稈翻埋還田導(dǎo)致水稻移栽后分蘗減少，植株矮小，生物量積累緩慢，根系數(shù)量減少。研究結(jié)果與前人的研究結(jié)果基本一致。秸稈還田后抑制水稻前期生長(zhǎng)，其原因可能一是參與秸稈腐解的微生物從土壤中吸收氮素滿(mǎn)足自身繁殖需要，從而造成與水稻植株?duì)幍默F(xiàn)象[17]；二是夏季溫度較高，微生物數(shù)量增加[18]，秸稈腐解釋放大量有機(jī)酸等不利于水稻生長(zhǎng)的物質(zhì)[19-20]；三是在淹水條件下，秸稈還田使土壤中還原物質(zhì)增多、pH下降，影響水稻根系活力，進(jìn)而影響水稻前期生長(zhǎng)發(fā)育[7]。本研究中，覆蓋還田的處理與對(duì)照差異不明顯，可能是因?yàn)楦采w處理的秸稈由于其覆蓋在田間表面上，短時(shí)間內(nèi)腐解不夠徹底，釋放的毒性物質(zhì)對(duì)根系影響較小[21]。

逆境脅迫下，植物抗氧化酶的變化較為復(fù)雜。蘭旭等[22]研究指出，水稻花期高溫脅迫導(dǎo)致其穎花POD活性先升后降，處理5 d時(shí)達(dá)到最大。本研究中，從移栽后7～21 d，水稻POD活性不斷下降，可能是本試驗(yàn)第一次取樣時(shí)間為移栽7 d后，錯(cuò)過(guò)了POD活性短暫上升的階段[23]。直到開(kāi)始曬田，POD活性上升，可能是由于曬田改善了土壤通氣狀況、緩解了低氧等脅迫狀況，水稻體內(nèi)保護(hù)酶類(lèi)進(jìn)行了適應(yīng)性調(diào)整[8]。前人研究認(rèn)為淹水[10]、低溫[11]、鹽[12]等脅迫下水稻POD活性增加。本研究中，RI處理下POD活性高于CK1與CK2，可能是由于秸稈翻埋還田導(dǎo)致土壤環(huán)境改變，如還原性物質(zhì)增多，水稻植株受到脅迫而產(chǎn)生了較多活性氧，為清除體內(nèi)的活性氧，需要相對(duì)較高的POD活性。

水稻在逆境脅迫下，其體內(nèi)NR、GS酶活性受到誘導(dǎo)升高[13-15]。前人研究發(fā)現(xiàn)根際溶氧量對(duì)水稻生長(zhǎng)的影響可能與氮代謝密切相關(guān)[14]，且水稻對(duì)氮素的吸收利用需要消耗呼吸作用釋放的ATP[13]。本研究中，油菜秸稈還田條件下水稻葉片NR和GS酶活性高于秸稈不還田，可能是由于秸稈還田導(dǎo)致根際土壤溶氧量更低[24]，根系有氧呼吸受阻，為維持能量供應(yīng)，氮代謝途徑發(fā)生改變，植株通過(guò)提高NR和GS酶活性，促進(jìn)呼吸作用進(jìn)而提供氮代謝所需能量[13]。另一方面，自然狀態(tài)下的農(nóng)作物秸稈，C/N比較高，還田初期，有機(jī)質(zhì)分解較慢，土壤中微生物為維持自身生命需要與水稻植株競(jìng)爭(zhēng)氮素[25]，可能導(dǎo)致土壤中氮素缺乏，水稻葉片通過(guò)提高NR和GS活性促進(jìn)自身對(duì)氮素的吸收利用[13-14]。水稻的生長(zhǎng)發(fā)育不僅與氮素代謝有關(guān)，還與光合作用、呼吸作用等生理生化過(guò)程密切相關(guān)[15]。要明確油菜秸稈翻埋還田后水稻前期生長(zhǎng)發(fā)育受阻的生理機(jī)制，還需進(jìn)一步研究其他相關(guān)生理酶活性的變化。

4 結(jié) 論

水稻移栽14 d后到曬田期間，油菜秸稈翻埋還田下的水稻生長(zhǎng)受到明顯抑制，水稻分蘗數(shù)、株高、地上和地下部干物質(zhì)積累量及根系數(shù)量均顯著低于CK1和CK2。在油菜秸稈翻埋還田處理下，水稻葉片具有較高的POD、NR和GS活性。