江強

【摘要】 目的：研究胃癌患者血清微小核糖核酸-378（miR-378）和微小核糖核酸-21（miR-21）表達變化及其診斷效能。方法：選擇2015年3月-2017年12月本院收治的74例胃癌患者為胃癌組，同期收集62例胃良性病變患者為胃良性病變組，另選擇本院門診健康體檢者69例為對照組。比較各組血清miR-378和miR-21表達情況，分析胃癌患者血清miR-378和miR-21和臨床病理特征的關(guān)系，不同預(yù)后組血清miR-378和miR-21表達情況，并分析以上指標對胃癌的診斷效能。結(jié)果：三組血清miR-378和miR-21比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;對照組血清miR-378均高于胃良性病變組和胃癌組，且胃良性病變組高于胃癌組（P<0.05）;對照組血清miR-21均低于胃良性病變組和胃癌組，且胃良性病變組低于胃癌組（P<0.05）。胃癌患者血清miR-378和miR-21的表達與年齡、性別均無關(guān)（P>0.05），而與腫瘤直徑、組織分化程度、TNM分期、腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有關(guān)（P<0.05）。預(yù)后不良組血清miR-378水平低于預(yù)后良好組，miR-21水平高于預(yù)后良好組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。制作miR-378、miR-21、miR-378+miR-21對胃癌診斷的ROC曲線，其曲線下面積分別為0.802、0.774、0.882，靈敏度分別為0.812、0.779、0.841，特異度分別為0.703、0.770、0.824。結(jié)論：血清miR-378在胃癌患者中表達下降，miR-21表達明顯上調(diào)，miR-378聯(lián)合miR-21在胃癌診斷中有較高的診斷效能，可作為胃癌診斷的參考依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 胃癌 微小核糖核酸-378 微小核糖核酸-21 診斷效能

[Abstract] Objective： To study the expression of microRNA-378 （miR-378） and microRNA-21 （miR-21） in serum of patients with gastric cancer and their diagnostic efficacy. Method： A total of 74 patients with gastric cancer admitted to our hospital from March 2015 to December 2017 were selected as gastric cancer group， at the same time， 62 patients with gastric benign lesions were collected as gastric benign lesions group， in addition， 69 outpatients were selected as the control group. The expression of miR-378 and miR-21 were compared， the relationship between serum miR-378 and miR-21 and clinicopathological characteristics of gastric cancer patients， the expressions of serum miR-378 and miR-21 in different prognosis groups were analyzed， and the diagnostic efficacy of the above indicators for gastric cancer was analyzed. Result： The serum miR-378 and miR-21 of the three groups were compared， the difference was statistically significant （P<0.05）. The serum miR-378 of the control group were higher than those of the gastric benign lesion group and the gastric cancer group， the benign lesion group was higher than the gastric cancer group （P<0.05）. The serum miR-21 of the control group were lower than those of the gastric benign lesion group and the gastric cancer group， and the benign lesion group was lower than the gastric cancer group （P<0.05）. The expression levels of serum miR-378 and miR-21 in gastric cancer patients were not correlated with age and gender （P>0.05）， but they were correlated with tumor diameter， tissue differentiation， TNM stage， tumor invasion depth and lymph node metastasis （P<0.05）. The level of miR-378 in the poor prognosis group was lower than that in the good prognosis group， and the level of miR-21 was higher than that in the good prognosis group （P<0.05）. The ROC curves of miR-378， miR-21 and miR-378 + miR-21 in the diagnosis of gastric cancer were made， the area under the curve were 0.802， 0.774 and 0.882， the sensitivity were 0.812， 0.779 and 0.841， and the specificity were 0.703， 0.770 and 0.824. Conclusion： The expression of miR-378 in serum decreased and miR-21 was up-regulated in patients with gastric cancer. The combination of miR-378 and miR-21 has a high diagnostic efficiency in the diagnosis of gastric cancer， which can be used as a reference for the diagnosis of gastric cancer.[Key words] Gastric Cancer MicroRNA-378 MicroRNA-21 Diagnostic efficiencyFirst-authors address： Taian Cancer Prevention and Treatment Hospital， Taian 271000， China

胃癌為臨床最常見的惡性腫瘤之一，具有進展快、預(yù)后差等特點，嚴重危及患者生命安全。臨床研究報道，早期進行根治術(shù)治療是延長胃癌患者生存率的最佳手段[1]，但早期胃癌缺乏特異性癥狀，大部分患者就診時已進展至中晚期，錯過了最佳治療時機。影像學(xué)檢查存在一定局限性，靶組織活檢作為一種侵入性檢查，確診率高，但存在一定的取樣誤差，影響對疾病的評價[2]。目前臨床上缺乏較為靈敏的胃癌診斷標志物，癌胚抗原和糖類抗原的特異性和靈敏度較低。微小核糖核酸（miRNA）具有高度保守性、時序性、穩(wěn)定性和組織特異性，可耐RNA酶降解，在腫瘤發(fā)生發(fā)展中有重要作用，是目前腫瘤分子生物學(xué)研究的重點[3]。其中miR-21在多種腫瘤組織和細胞中過表達，能夠參與腫瘤的生長、侵襲、轉(zhuǎn)移及耐藥等反應(yīng)，黃新造等[4]研究發(fā)現(xiàn)，miR-21高表達和腫瘤患者不良預(yù)后有關(guān)。miR-378為重要的相關(guān)基因調(diào)控位點，最新研究發(fā)現(xiàn)其異常表達和宮頸癌、卵巢癌等相關(guān)，但在胃癌中的生物功能報道較少[5]。盡管組織miR能夠為腫瘤提供精確診斷，但其過程復(fù)雜、且創(chuàng)傷明顯，容易傷及胃黏膜，從而限制其在腫瘤診斷篩查中的應(yīng)用。血液樣本具有獲取方便、穩(wěn)定性高等特點，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，血清miRNA可作為多種惡性腫瘤診斷和預(yù)后的分子標記物。本研究主要分析胃癌患者血清miR-378和miR-21表達變化及其診斷效能，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2015年3月-2017年12月本院收治的74例胃癌患者，納入標準：（1）臨床明確診斷為胃癌;（2）預(yù)計生存期超過3個月;（3）未接受放化療;（4）心肝腎等無明顯異常，且外周血常規(guī)、心電圖基本正常[6]。排除標準：（1）其他部位原發(fā)腫瘤;（2）急性感染或機體嚴重創(chuàng)傷;（3）妊娠或哺乳期婦女;（4）胃癌復(fù)發(fā)。將74例胃癌患者作為胃癌組，同期收集62例胃良性病變患者作為胃良性病變組，另選擇本院門診健康體檢者69例作為對照組?；颊呔橥獗狙芯?，研究經(jīng)本院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 病史采集 記錄胃癌患者性別、年齡、腫瘤直徑、組織分化程度、TIM分期、腫瘤浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等情況。

1.2.2 樣本檢測 采集各組受試者空腹外周靜脈血4 mL，放置于不含乙二胺四乙酸試管，在室溫下放置1 h，常規(guī)離心后放置于-80 ℃低溫箱中保存待檢。采用實時熒光定量PCR反應(yīng)檢測miR-378和miR-21表達情況，以2-ΔΔCt表示miRNA的相對表達量。

1.2.3 隨訪 胃癌患者均以電話、門診等方式進行1年隨訪，入組日期即為隨訪起始日期，至隨訪結(jié)束、失訪或者死亡為截止日期。

1.3 觀察指標及判定標準 （1）比較三組血清miR-378和miR-21表達情況;（2）分析胃癌患者血清miR-378和miR-21的表達和各項臨床指標的關(guān)系;（3）比較胃癌患者不同預(yù)后組血清miR-378和miR-21的表達，無遠處轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)和死亡者判定為預(yù)后良好，有遠處轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)或死亡者判定為預(yù)后不良;（4）分析血清miR-378和miR-21對胃癌的診斷效能。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 18.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料用（x±s）表示，兩組間選用獨立樣本t檢驗，多組間采用方差分析;計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗。繪制受試者工作特征曲線（ROC曲線）分析指標對胃癌的診斷效能，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組一般資料比較 胃癌組74例，男40例，女34例;年齡41～68歲，平均（58.14±5.82）歲。胃良性病變組62例，男36例，女26例;年齡38～67歲，平均（56.95±6.27）歲。腸上皮化生28例，胃竇炎性息肉20例，胃竇潰瘍14例。對照組69例，男38例，女31例;年齡36～69歲，平均（57.48±4.84）歲。三組性別、年齡比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 三組血清miR-378和miR-21比較 三組血清miR-378和miR-21比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;對照組血清miR-378均高于胃良性病變組和胃癌組，且胃良性病變組高于胃癌組（P<0.05）;對照組血清miR-21均低于胃良性病變組和胃癌組，且胃良性病變組低于胃癌組（P<0.05），見表1。

2.3 胃癌患者不同預(yù)后組血清miR-378和miR-21的表達比較 預(yù)后不良組血清miR-378水平低于預(yù)后良好組，miR-21水平高于預(yù)后良好組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2。

2.4 胃癌患者血清miR-378和miR-21的表達和各項臨床指標的關(guān)系分析 胃癌患者血清miR-378和miR-21的表達與年齡、性別均無關(guān)（P>0.05），而與腫瘤直徑、組織分化程度、TNM分期、腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有關(guān)（P<0.05），見表3。

2.5 血清miR-378和miR-21對胃癌的診斷效能分析 制作miR-378、miR-21、miR-378+miR-21對胃癌診斷的ROC曲線，其曲線下面積分別為0.802、0.774、0.882，靈敏度分別為0.812、0.779、0.841，特異度分別為0.703、0.770、0.824，見表4和圖1。

3 討論

胃癌是源自于胃黏膜上皮的惡性腫瘤，全腫瘤流行病統(tǒng)計數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，目前胃癌的發(fā)生率呈上升趨勢，是導(dǎo)致惡性腫瘤患者死亡的主要疾病之一[7]。臨床研究已表明，早期胃癌經(jīng)正規(guī)治療的5年生存率在85%以上[8]。因此盡早診治是提高胃癌療效和改善預(yù)后的最有效方式，但我國胃癌早期診斷較為困難，發(fā)現(xiàn)時多已經(jīng)處于中晚期。胃癌的發(fā)生是復(fù)雜的生物學(xué)過程，近年來隨著對惡性腫瘤異質(zhì)性研究的深入和分子生物學(xué)的進展，多個研究表明，腫瘤發(fā)生發(fā)展中miRNA可起到類似癌基因和抑癌基因的作用，從而調(diào)節(jié)腫瘤細胞的增殖及凋亡等反應(yīng)，影響腫瘤生物學(xué)行為[9-10]。miRNA為小分子調(diào)控RNA，疾病狀態(tài)下表達譜出現(xiàn)異常改變，從而引起癌變的系列反應(yīng)。血液中miRNAs具有穩(wěn)定性高、檢測損傷小等特點，目前研究已證實多種miRNAs和腫瘤發(fā)生有良好相關(guān)性[11]。

miR-378能夠作用于絲裂原活化蛋白激酶1，抑制胃癌細胞的增殖、遷移及侵襲，影響其細胞周期，誘導(dǎo)細胞凋亡[12]。黃聲凱等[13]研究報道，miR-378在胃癌組織中的表達明顯下調(diào)，起到抑癌基因作用，通過增強胃癌細胞miR-378的表達，可促進胃癌增殖、侵襲和凋亡等胃癌生物學(xué)作用。Treece等[14]通過研究發(fā)現(xiàn)，miR-378低表達可能影響化療藥物的敏感性，導(dǎo)致化療藥物耐藥，影響化療療效。又有研究發(fā)現(xiàn)，肺癌中miR-378高表達者生存期相對較長[15]。以上研究表明miR-378可能對腫瘤的發(fā)生發(fā)展可能起到負調(diào)控作用。本研究結(jié)果顯示，三組血清miR-378比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;對照組血清miR-378均高于胃良性病變組和胃癌組，且胃良性病變組高于胃癌組（P<0.05），提示miR-378可能作為抑癌基因參與胃癌發(fā)病。另有研究發(fā)現(xiàn)，miR-378表達和惡性腫瘤生物學(xué)行為有一定相關(guān)性[16]。本研究也顯示，miR-378表達和不同腫瘤直徑、組織分化程度、TNM分期、腫瘤浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有差異。進一步分析發(fā)現(xiàn)，預(yù)后良好組miR-378水平較預(yù)后不良組高，預(yù)后不良組血清miR-378水平低于預(yù)后良好組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），說明miR-378表達能夠反映胃癌患者預(yù)后。但目前有關(guān)胃癌患者中miR-378的診斷效能缺乏客觀依據(jù)，本研究中ROC曲線分析顯示，胃癌患者血清中miR-378曲線下面積為0.802，且有較高靈敏性和特異性，表明miR-378在胃癌診斷上有較高的準確性，此為miR-378作為癌癥診斷的潛在標志提高了理論基礎(chǔ)。

miR-21作為一種癌基因，可參與細胞增殖、分化、凋亡等反應(yīng)，與腫瘤生長、侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)，在多種惡性腫瘤中的表達上調(diào)，可能成為腫瘤早期診斷的標志物[17]。缺氧條件下，miR-21可抑制細胞增殖，影響DNA在損傷修復(fù)中的能力，利于血管再生，從而在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起到重要作用[18]。已有研究報道，miR-21在腎癌等惡性腫瘤中的表達上調(diào)，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)展和轉(zhuǎn)移[19]。且有研究發(fā)現(xiàn)，對奧沙利鉑耐藥的胃癌患者miR-21表達顯著上調(diào)，下調(diào)miR-21表達能夠增加化療藥物敏感性[20]。本研究顯示，胃癌患者血清miR-21呈高表達，和胃癌患者多種腫瘤生物學(xué)行為相關(guān)，說明其可參與胃癌形成，促進癌基因作用，為胃癌診斷提供一定參考依據(jù)。胃癌miR-21低表達者的療效優(yōu)于高表達者，且miR-21低表達者的3年存活率顯著高于高表達者，提示其和患者不良預(yù)后有一定相關(guān)性[18]。Sekar等[21]通過研究發(fā)現(xiàn)，miR-21高表達可作為胃癌患者預(yù)后的獨立危險因素。本研究顯示，預(yù)后良好組血清miR-21水平較低，證實其和胃癌患者預(yù)后的關(guān)系。且本研究發(fā)現(xiàn)，miR-21對胃癌診斷的ROC曲線為0.774，表明miR-21有著較高的診斷價值，能夠有效鑒別胃部良惡性病變。將miR-378和miR-21二者并聯(lián)試驗發(fā)現(xiàn)，曲線下面積較miR-378和miR-21單獨檢測大，說明聯(lián)合檢測可提高胃癌的診斷效能。

綜上所述，血清miR-378在胃癌患者中表達下降，miR-21表達明顯上調(diào)，miR-378聯(lián)合miR-21在胃癌診斷中有較高的診斷效能，可作為胃癌診斷的參考依據(jù)。

參考文獻

[1] Yang D，Kotzev A I，Draganov P V.Endoscopic submucosal dissection for early gastric cancer in the West： the absolute but not final word[J].Gastrointest Endosc，2019，90（3）：480-482.

[2] Tan M C，Graham D Y.Gastric cancer risk stratification and surveillance after Helicobacter pylori eradication： 2020[J].Gastrointest Endosc，2019，90（3）：457-460.

[3]榮維，王浩，宋麗萍.胃癌患者血清中微小RNA分子的特異性表達及其臨床意義[J].臨床內(nèi)科雜志，2015，32（2）：88-90.

[4]黃新造，占桂香，賽君，等.miR-21表達與肝細胞癌患者預(yù)后的相關(guān)性[J].實用癌癥雜志，2017，32（8）：1391-1392.

[5]陳小平，任新萍，杜依蓓，等.miR-378對卵巢癌細胞增殖能力的影響[J].中國婦幼保健，2018，33（11）：2562-2565.

[6]中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會.直腸癌規(guī)范化診療指南（試行）[J/OL].中國醫(yī)學(xué)前沿雜志（電子版），2013，5（7）：56-63.

[7] Urakawa S，Yamasaki M，Goto K，et al.Peri-operative monocyte count is a marker of poor prognosis in gastric cancer： increased monocytes are a characteristic of myeloid-derived suppressor cells[J].Cancer Immunol Immunother，2019，68（8）：1341-1350.

[8] Kotidis E，Tatsis MGPD，Tatsis D.Technical aspects， short- and long-term outcomes of laparoscopic and robotic D2-lymphadectomy in gastric cancer[J].J BUON，2019，24（3）：889-896.

[9] Ishimoto T，Baba H，Izumi D，et al.Current perspectives toward the identification of key players in gastric cancer microRNA dysregulation[J].Int J Cancer，2016，138（6）：1337-1349.

[10]李琴，劉朝奇.循環(huán)miRNA在胃癌早期診斷及預(yù)后中的研究進展[J].廣東醫(yī)學(xué)，2016，37（24）：3764-3766.

[11] Kevin Tak-Pan N G，Chung Mau Lo，Nathalie Wong，et al.

Early-phase circulating miRNAs predict tumor recurrence and survival of hepatocellular carcinoma patients after liver transplantation[J].Oncotarget，2016，7（15）：19824-19839.

[12] Goto K，Ishikawa S，Honma R，et al.The transcribed-ultraconserved regions in prostate and gastric cancer： DNA hypermethylation and microRNA-associated regulation[J].Oncogene，2016，35（27）：3598-3606.

[13]黃聲凱，王佳，李燕，等.血清miR-378和miR-21聯(lián)合檢測對胃癌的診斷價值[J].中華腫瘤雜志，2018，40（6）：441-445.

[14] Treece A L，Duncan D L，Tang W，et al.Gastric adenocarcinoma microRNA profiles in fixed tissue and in plasma reveal cancer-associated and Epstein-Barr virus-related expression patterns[J].Lab Invest，2016，96（6）：661-671.

[15]蘇州，羅文娟，稅蓮.肺癌患者血清外周血單個核細胞microRNA表達譜變化及其意義[J].中華腫瘤防治雜志，2016，23（S2）：39-40.

[16] Zhou Z，Ma J.miR-378 serves as a prognostic biomarker in cholangiocarcinoma and promotes tumor proliferation， migration， and invasion[J].Cancer Biomark，2019，24（2）：173-181.

[17]戴凌，蔣志慶，張廣鈺，等.胃癌患者血清miR-21水平變化及意義[J].山東醫(yī)藥，2017，57（41）：80-82.

[18]庹敏，童仕倫.PTEN、PI3K和miR-21在胃癌中的表達及相關(guān)性研究[J].安徽醫(yī)藥，2017，21（11）：2019-2022.

[19]羅麗華，幸茂輝，冉瑞智，等.晚期胃癌患者血清miR-21和let-7i水平變化與奧沙利鉑化療療效的關(guān)系[J].實用臨床醫(yī)藥雜志，2016，20（9）：60-63.

[20]肖燾，揭志剛.microRNA-21在胃癌研究中的進展[J].重慶醫(yī)學(xué)，2018，47（20）：2733-2736.

[21] Sekar D，Krishnan R，Thirugnanasambantham K，et al.

Significance of microRNA 21 in gastric cancer[J].Clin Res Hepatol Gastroenterol，2016，40（5）：538-545.

（收稿日期：2019-09-18） （本文編輯：姬思雨）