陶貴斌，李昕曈，蔣常鵬，高紅梅*

（長春中醫(yī)藥大學(xué)·吉林長春·130117）

參志顆粒是由遠(yuǎn)志、五味子、當(dāng)歸、菊花、人參、甘草等6味中藥制成的純中藥復(fù)方制劑。其中遠(yuǎn)志為主藥，五味子為臣藥。具有安神、益智等功效。參志顆粒作為新藥，在上市之前需要對其進(jìn)行工藝研究、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和相關(guān)檢查等一系列的研究[1]。為較好地控制制劑的相關(guān)質(zhì)量，實驗室進(jìn)行了大量的實驗研究工作，采用薄層色譜法對方中的遠(yuǎn)志、菊花、甘草、人參等進(jìn)行了定性鑒別，為了能夠更好地規(guī)范制劑的質(zhì)量，我們參照2015年版《中國藥典》進(jìn)行了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，為該制劑質(zhì)量控制提供依據(jù)[2～7]。

復(fù)方新藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究是藥學(xué)研究的主要內(nèi)容之一，也是新藥藥學(xué)評價的重點內(nèi)容[8]。近年來中藥復(fù)方新藥的研究水平有了較大提高[9]，中藥復(fù)方新藥的質(zhì)量不是僅質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)本身就可以解決的[10]，但質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是保證產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵環(huán)節(jié)和重要內(nèi)容[11]，產(chǎn)品質(zhì)量的提高離不開質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高[12]。隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，在基于質(zhì)量源于設(shè)計的理念指導(dǎo)下，中藥復(fù)方新藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)系將日臻科學(xué)、系統(tǒng)和完善[13]。

1 儀器與設(shè)備

1.1 儀器

HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋 （國華電器有限公司）；KQ-250B型超聲波清洗器 （江蘇省昆山市淀山湖鎮(zhèn)儀器有限公司）；101-31SS電熱鼓風(fēng)干燥箱型烘箱（邦西儀器科技上海有限公司）；ZF-20D暗箱式紫外分析儀（上海寶山顧村電光儀器廠）；FA1204B電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；島津LC-2030型高效液相色譜儀（中國島津公司）；色譜柱（大連依利特分析儀器有限公司）。

1.2 試藥

參志顆粒為實驗室自制。五味子醇甲（中國食品藥品檢定研究院，批號：11857-201714，HPLC純度98.5%）。乙腈（色譜純，賽默飛世爾北京有限公司）；純凈水。

1.3 供試品與對照品

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

依利特 C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），梯度洗脫，柱溫為 40℃，流動為乙腈（A）-0.1%磷酸（B）（0～20min，15%A；20.01～24min，20%～25%A；24.01～26min，25%～30%A；26.01～30min，30%～35%A；30.01～240min，35%～40%A；40.01～45min，40%～48%A；45.01～53min，48%～53%A）；流速 1ml/min；檢測波長 348nm，進(jìn)樣量15μl。

2.2 對照品溶液的制備

取五味子醇甲對照品26.31mg，精密稱定，置于25ml容量瓶中，甲醇定容，再吸取2.85ml定容于100ml容量瓶中，制成0.03mg/ml。五味子醇甲對照品溶液，搖勻，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取樣品10g，研細(xì)，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加甲醇100ml，稱量其重量，超聲處理30min，冷卻至室溫后加入甲醇補足失重，濾過，取續(xù)濾液50ml水浴鍋上蒸干，加20ml水溶解其殘渣，再用水飽和正丁醇萃取3次，每次20ml，合并水飽和正丁醇層，蒸干后殘渣加甲醇溶解定容至50ml，作為供試品溶液。

2.4 五味子陰性供試品的制備

按處方比例制備去除五味子以外方藥材中其他成分藥材，按制備工藝制備陰性樣品，再按“2.3”項下方法制備陰性供試品溶液。

2.5 線性及范圍

依照“2.1”項下的色譜條件，分別精密吸取不同濃度五味子醇甲對照品溶液（10、20、50、100、200、300μg/ml）10μl，注入高效液相色譜儀，以峰面積和濃度進(jìn)行線性回歸?；貧w方程為y=6283.3x-12607（r=0.9995）

2.6 精密度考察

密吸取供試品溶液10μl，依照“2.1”項下的色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄對照品的峰面積，計算RSD值為1.03，表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性考察

精密吸取供試品溶液15μl，依照“2.1”項下的色譜條件，分別于 0、2、4、6、8、12h 測定峰面積并計算其RSD值為1.03%，表明五味子醇甲在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性考察

取同一批參志顆粒10g，研細(xì)，精密稱定，按“2.3”項下的方法制備供試品溶液，重復(fù)6次，測定五味子醇甲含量并計算其RSD值為1.24，表明該制備方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率實驗

取9份已知含量參志顆粒粉末5g，精密稱定，在每3份中分別加入五味子醇甲對照品溶液，使其相當(dāng)于樣品中五味子醇甲含量的0.5、1、1.5倍，按“2.3”項下的方法制備成供試品溶液，測定并計算加樣回收率及其RSD值[20]，結(jié)果見表1。

測量結(jié)果表明，92%＜回收率＜105%，且回收率RSD值＜2%，測定結(jié)果與真實值接近，回收率符合標(biāo)準(zhǔn)。

圖1 五味子對照品溶液

圖2 供試品溶液

圖3 五味子陰性供試品溶液

圖4 空白對照溶液

2.10 樣品含量測定

取三批參志顆粒，每批各3份，每份10g，按照“2.3”項下方法制成供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣分析，通過外表一點法計算五味子醇甲的含量，三批顆粒中五味子醇甲含量見表2。

表6 含量測定結(jié)果

測定結(jié)果測定五味醇甲的平均含量為0.81mg/g，暫定其含量要求不得低于0.65 mg/g。

3 討論

3.1 復(fù)方中指標(biāo)性成分的確定

本文采用高效液相色譜方法對參志顆粒中五味子的有效成分五味子醇甲進(jìn)行含量測定，復(fù)方中五味子為君藥，在處方中所占比重最多，選其作為指標(biāo)成分。

3.2 色譜條件選擇

分別考察了甲醇超聲提取、甲醇回流提取等不同的處理條件，通過比較目標(biāo)化合物的含量、與相鄰峰之間的分離度，結(jié)果顯示本實驗操作方法下，待測組分含量高，分離度好，因此確定樣品提取方法。

通過DAD二極管陣列檢測器在200～400nm處掃描，發(fā)現(xiàn)五味子醇甲在348nm處具有最大吸收，因此確定檢測波長為348nm。