阿米拉?阿不拉提，范雪梅，毛新民，姚藍(lán)

兩色金雞菊黃酮成分對高糖高脂誘導(dǎo)的細(xì)胞模型能量代謝紊亂的影響

阿米拉?阿不拉提1，范雪梅2，毛新民1，姚藍(lán)1

1.新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830011；2.新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830011

觀察兩色金雞菊黃酮成分對高糖高脂誘導(dǎo)大鼠腎小球系膜細(xì)胞HBZY-1能量代謝紊亂的影響，探討其保護(hù)作用機(jī)制。采用高糖高脂誘導(dǎo)HBZY-1細(xì)胞建立體外糖尿病腎病代謝紊亂細(xì)胞模型，將HBZY-1細(xì)胞分為正常組、模型組和兩色金雞菊黃酮成分不同劑量組。采用MTS實(shí)驗(yàn)檢測模型細(xì)胞增殖水平，倒置顯微鏡觀察模型細(xì)胞形態(tài)變化，細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)觀察模型細(xì)胞細(xì)胞外基質(zhì)分泌，Western blot檢測細(xì)胞能量代謝調(diào)控因子5'腺苷-磷酸活化蛋白激酶α（p-AMPKα）、乙酰輔酶a羧化酶1（ACC1）、甾醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1（SREBP1）及氧化應(yīng)激因子一氧化氮合酶（eNOS）、尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4（NOX4）的蛋白表達(dá)。兩色金雞菊黃酮成分能抑制高糖高脂誘導(dǎo)的HBZY-1細(xì)胞增殖，細(xì)胞間隙增大、密度顯著降低；兩色金雞菊黃酮成分促進(jìn)模型細(xì)胞p-AMPKα、p-ACC1、eNOS的蛋白表達(dá)，抑制模型細(xì)胞SREBP1、NOX4、ACC1的蛋白表達(dá)；劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，兩色金雞菊黃酮成分對模型細(xì)胞細(xì)胞外基質(zhì)分泌有顯著抑制作用，同時α-平滑肌肌動蛋白的蛋白表達(dá)顯著降低。兩色金雞菊黃酮成分可能通過調(diào)控AMPK/SREBP1/ACC1能量代謝通路，抑制模型細(xì)胞增殖、氧化應(yīng)激，進(jìn)而改善腎臟纖維化病變。

兩色金雞菊；黃酮成分；氧化應(yīng)激損傷；糖脂代謝；細(xì)胞模型

糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy，DN）是糖尿病最嚴(yán)重的微血管并發(fā)癥，是慢性腎功能衰竭發(fā)病的主要原因。據(jù)統(tǒng)計(jì)，臨床約70%糖尿病患者同時并發(fā)慢性腎臟疾病[1]。糖尿病發(fā)病過程中伴隨的能量代謝紊亂可能與DN密切相關(guān)[2]。能量代謝紊亂通過激活細(xì)胞中多種信號通路誘發(fā)腎臟氧化應(yīng)激反應(yīng)，使腎臟功能性細(xì)胞大量纖維化因子致細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）聚集、基底膜增厚，誘發(fā)腎臟功能異常與纖維化病變[2-3]。然而能量代謝紊亂與DN確切的作用機(jī)制迄今尚不清楚。兩色金雞菊Nutt.為新疆地產(chǎn)藥用植物資源，具有活血化瘀、清熱解毒功效?；瘜W(xué)成分研究發(fā)現(xiàn)，兩色金雞菊含有豐富的黃酮類化合物，具有多種生物學(xué)活性[4]。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，兩色金雞菊黃酮成分和兩色金雞菊提取物具有較好的降糖、降脂和抗氧化應(yīng)激作用，同時能活化腎臟能量代謝因子5'腺苷-磷酸活化蛋白激酶（p-AMPK）[5-7]。兩色金雞菊黃酮成分是否通過調(diào)控能量代謝紊亂發(fā)揮保護(hù)腎臟作用尚不清楚。本研究擬采用高糖高脂誘導(dǎo)大鼠腎小球系膜細(xì)胞HBZY-1建立體外DN能量代謝紊亂模型，觀察兩色金雞菊黃酮成分通過調(diào)控能量代謝通路改善DN可能的作用機(jī)制。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥物及細(xì)胞株

兩色金雞菊黃酮提取物，新疆醫(yī)科大學(xué)協(xié)同創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)室提供。HBZY-1細(xì)胞，購自上海中喬新舟生物科技有限公司，貨號ZQ0540；根據(jù)說明書要求，將HBZY-1細(xì)胞傳代于含10%胎牛血清、1%雙抗DMEM培養(yǎng)液，置于含5%CO2、37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.2 主要試劑與儀器

DMEM培養(yǎng)基（HyClone company，批號SH30022.01），p-AMPK α（Affinity Biosciences，AF3423）、一氧化氮合酶（eNOS，Cell Signaling，貨號32027）、尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4（NOX4，Proteintech，貨號14247-1-AP）、乙酰輔酶a羧化酶1（ACC1，Proteintech，貨號21923-1-AP），磷酸化乙酰輔酶A羧化酶（p-ACC1，Affinity，貨號AF3421）、甾醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1（SREBPl，貨號sc-13551）、α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）抗體（Cell Signaling，貨號19245S），彩色蛋白Marker（Thermo Scientific Pierce，貨號26116、26625），蛋白上樣緩沖液（北京太陽生物科技有限公司，貨號P1016），Novex AP chromogenic substrate（Invitrogen，貨號WP20001），MTS細(xì)胞增殖試劑盒（Promega公司，貨號G3580）。Steri-Cult型CO2培養(yǎng)箱（美國Thermo公司），GelDocXR＋凝膠＋分析系統(tǒng)、156-8001型垂直電泳槽（美國Bio-Rad公司），ZESSAxioObserverZ1倒置顯微鏡（德國ZEISS公司），5427R型高速冷凍離心機(jī)（德國Eppendorf公司），Multiskan GO酶標(biāo)儀（美國Thermo Fisher公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 兩色金雞菊黃酮成分溶液制備

精密稱取兩色金雞菊黃酮提取物凍干粉20 mg，置于1.5 mL EP管，加入二甲基亞砜（DMSO）0.4 mL，反復(fù)震蕩使粉末充分溶解，得濃度為50 mg/mL兩色金雞菊黃酮提取物溶液，根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)置給藥濃度，加入不同體積DMSO稀釋成相應(yīng)的細(xì)胞給藥濃度。

2.2 高糖高脂溶液配制

分別稱取D-葡萄糖（HG）和棕櫚酸（PA）適量，將HG充分溶解于DMEM培養(yǎng)基中，定容于10 mL容量瓶，PA用DMSO震蕩充分溶解，制成HG、PA濃度分別為1 moL/L和0.25 mol/L貯備液，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過濾備用。本實(shí)驗(yàn)采用HG 100 mmol/L、PA 250 μmol/L干預(yù)細(xì)胞建立DN模型。

2.3 細(xì)胞分組及干預(yù)

MTS實(shí)驗(yàn)分組：用DMEM完全培養(yǎng)基培養(yǎng)HBZY-1細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶中覆蓋率達(dá)80%～90%細(xì)胞離心收集，對細(xì)胞混懸液進(jìn)行計(jì)數(shù)。接種于96孔板，每個濃度設(shè)4個復(fù)孔，4×103個/孔。5 h后待細(xì)胞貼壁生長，棄上清液并用含或不含藥物的無血清DMEM培養(yǎng)基干預(yù)。將細(xì)胞分為10組：正常組（NC組，有細(xì)胞但不干預(yù)），高糖高脂組（HG＋PA組），兩色金雞菊黃酮不同劑量（1、5、10、20、40、80、160、320 μg/mL）組（HG＋PA＋FC組）。

Western blot和細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)分組：取3×105個/孔細(xì)胞混懸液，按每孔2 mL接種于6孔板中培養(yǎng)，5 h待細(xì)胞貼壁生長后，PBS清洗細(xì)胞2次，將細(xì)胞設(shè)置為NC組、HG＋PA組、HG＋PA＋FC 25 μg/mL組、HG＋PA＋FC 50 μg/mL組、HG＋PA＋FC 100 μg/mL組、HG＋PA＋FC 150 μg/mL組，每個濃度設(shè)3復(fù)孔，干預(yù)給藥24 h后，棄上清液，用于各項(xiàng)指標(biāo)檢測。

2.4 MTS實(shí)驗(yàn)

按照“2.3”項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)分組處理細(xì)胞，給藥干預(yù)細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)24、48、72 h后，棄上清液，加入MTS溶液20 μL/孔，37 ℃恒溫培養(yǎng)箱避光孵育2 h，于酶標(biāo)儀波長490 nm處測定吸光度（OD值），實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，計(jì)算細(xì)胞增殖率。細(xì)胞增殖率（%）＝實(shí)驗(yàn)組OD值÷對照組OD值×100%。倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)。

2.5 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)

在6孔板背后用滅菌直尺均勻畫出平行3條橫線。每孔加入約5×105個細(xì)胞，待細(xì)胞鋪滿6孔板后，用10 μL槍頭垂直于背后的橫線劃痕，用PBS清洗2次，將脫落細(xì)胞碎片洗凈，按照“2.3”項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)分組干預(yù)。分別在干預(yù)0、12、24 h時間點(diǎn)同一位置拍照比較各組劃痕寬度，從而反映細(xì)胞平面遷移能力。

2.6 Western blot實(shí)驗(yàn)

按照“2.3”項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)分組對干預(yù)后的細(xì)胞提取總蛋白，加細(xì)胞裂解液（RIPA∶PMSF＝1∶1），置于冰上裂解，離心分離上清液，采用BCA法對蛋白濃度定量，蛋白變性后分裝于EP管中，保存?zhèn)溆茫坏鞍咨蠘用靠?0 μg總蛋白，電泳（80 V分離膠，100 V濃縮膠）至溴酚藍(lán)完全跑出，采用濕轉(zhuǎn)法恒壓100 V冰浴轉(zhuǎn)膜，將蛋白移至PVDF膜上；5%脫脂奶粉封閉膜2 h；4 ℃搖床孵育一抗過夜，避光常溫孵育二抗（1∶2000）2 h，顯色劑顯色后，凝膠成像儀拍照，測灰度值，實(shí)驗(yàn)獨(dú)立重復(fù)3次。Image Lab軟件進(jìn)行條帶灰度值分析。以GAPDH、β-actin為內(nèi)參，計(jì)算蛋白相對表達(dá)量。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

4 結(jié)果

4.1 兩色金雞菊黃酮成分對高糖高脂誘導(dǎo)的HBZY-1細(xì)胞增殖的影響

高糖高脂干預(yù)細(xì)胞模型4、48、72 h，細(xì)胞增殖率分別為130.21%、129.6%、120.94%，且明顯高于NC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.01）。隨兩色金雞菊黃酮成分濃度增加及作用時間延長，抑制細(xì)胞增殖24 h時達(dá)高峰。其中在24、48 h兩色金雞菊黃酮成分（20、40、80 μg/mL）細(xì)胞增殖率明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.01）。當(dāng)兩色金雞菊黃酮成分濃度達(dá)160 μg/mL時，細(xì)胞增殖抑制作用均減弱，其原因可能是隨兩色金雞菊黃酮成分濃度增加及作用時間延長，其藥物本身顏色加深，OD值也隨之升高。結(jié)果見圖1。

4.2 兩色金雞菊黃酮成分對高糖高脂誘導(dǎo)的HBZY-1細(xì)胞形態(tài)的影響

不同濃度兩色金雞菊黃酮成分干預(yù)HBZY-1細(xì)胞24 h后，與NC組比較，高糖高脂環(huán)境可促進(jìn)HBZY-1細(xì)胞增殖，并可見部分HBZY-1細(xì)胞形態(tài)明顯改變，細(xì)胞出現(xiàn)肥大、聚集和呈現(xiàn)長梭形的現(xiàn)象，而隨兩色金雞菊黃酮成分濃度升高，細(xì)胞增殖受到抑制，相鄰細(xì)胞間隙增大。結(jié)果見圖2。

注：A. NC組；B. HG＋PA組；C～J. HG＋PA＋FC（1、5、10、20、40、80、160、320 μg/mL）組；與A比較，##P＜0.01；與B比較，*P＜0.05，**P＜0.01

注：A. NC組；B. HG＋PA組；C～J. HG＋PA＋FC（1、5、10、20、40、80、160、320 μg/mL）組

4.3 兩色金雞菊黃酮成分對高糖高脂誘導(dǎo)的HBZY-1細(xì)胞能量代謝因子調(diào)控的影響

4.3.1 5'腺苷-磷酸活化蛋白激酶α蛋白表達(dá)

p-AMPKα在高糖高脂干預(yù)細(xì)胞后，與NC組比較顯著降低其表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.01），兩色金雞菊黃酮成分干預(yù)后各劑量組均不同程度上調(diào)p-AMPKα的表達(dá)，但兩色金雞菊黃酮成分25、50、100 μg/mL組與HG＋PA組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，僅兩色金雞菊黃酮成分150 μg/mL干預(yù)細(xì)胞后，顯著上調(diào)p-AMPKα表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05）。結(jié)果見圖3。

注：A. NC組；B. HG＋PA組；C～F. HG＋PA＋FC（25、50 100、150 μg/mL）組；與A比較，#P＜0.05；與B比較，*P＜0.05

4.3.2 甾醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1蛋白表達(dá)

高糖高脂誘導(dǎo)細(xì)胞后，與NC組比較，SREBP1表達(dá)上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.01）；兩色金雞菊黃酮成分干預(yù)后各劑量組均能明顯抑制細(xì)胞SREBP1表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.01）。結(jié)果見圖4。

4.3.3 磷酸化乙酰輔酶a羧化酶1蛋白表達(dá)

高糖高脂誘導(dǎo)細(xì)胞后，與NC組比較，p-ACC1表達(dá)降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩色金雞菊黃酮成分干預(yù)后各劑量組均不同程度上調(diào)p-ACC1的表達(dá)，與HG＋PA組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05），在兩色金雞菊黃酮成分 50 μg/mL時顯著上調(diào)p-ACC1的表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.01）。結(jié)果見圖5。

注：A. NC組；B. HG+PA組；C～F. HG＋PA＋FC（25、50 100、150 μg/mL）組；與A比較，##P＜0.01；與B比較，**P＜0.01

注：A. NC組；B. HG＋PA組；C～F. HG＋PA＋FC（25、50 100、150 μg/mL）組；與B比較，*P＜0.05，**P＜0.01

4.4 兩色金雞菊黃酮成分對高糖高脂誘導(dǎo)的HBZY-1細(xì)胞氧化應(yīng)激因子表達(dá)的影響

4.4.1 一氧化氮合酶蛋白表達(dá)

高糖高脂誘導(dǎo)下，細(xì)胞中氧化應(yīng)激保護(hù)因子eNOS表達(dá)與NC組比較顯著降低（＜0.05）；兩色金雞菊黃酮成分干預(yù)細(xì)胞后，eNOS表達(dá)明顯降低，與HG＋PA組比較，兩色金雞菊黃酮成分25、50、100 μg/mL時均能顯著上調(diào)細(xì)胞eNOS的表達(dá)（＜0.01），而兩色金雞菊黃酮成分 150 μg/mL對eNOS的上調(diào)作用差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見圖6。

注：A. NC組；B. HG＋PA組；C～F. HG＋PA＋FC（25、50 100、150 μg/mL）組；與B比較，**P＜0.01

4.4.2 尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4蛋白表達(dá)

高糖高脂誘導(dǎo)細(xì)胞后，NOX4表達(dá)升高，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩色金雞菊黃酮成分干預(yù)細(xì)胞后，兩色金雞菊黃酮成分各劑量組均能抑制細(xì)胞NOX4表達(dá)，與HG＋PA組比較，兩色金雞菊黃酮成分25 μg/mL時無明顯差異；兩色金雞菊黃酮成分100、150 μg/mL時明顯抑制細(xì)胞NOX4的表達(dá)（＜0.01）。結(jié)果見圖7。

注：A. NC組；B. HG+PA組；C～Ｆ. HG＋PA＋FC（25、50 100、150 μg/mL）組；與B比較，**P＜0.01

4.5 兩色金雞菊黃酮成分對高糖高脂誘導(dǎo)HBZY-1細(xì)胞纖維化的影響

4.5.1 細(xì)胞黏附能力

不同濃度兩色金雞菊黃酮成分處理后，動態(tài)觀察0、12、24 h兩色金雞菊黃酮成分各劑量組細(xì)胞間隙大小及劃痕間距變化；隨著時間推移，NC組細(xì)胞間隙與劃痕間距變化不明顯，HG＋PA組細(xì)胞間隙與劃痕間距隨培養(yǎng)時間的增加而顯著變小，細(xì)胞密度明顯增加，不同濃度兩色金雞菊黃酮成分干預(yù)細(xì)胞后，隨培養(yǎng)時間的延長，細(xì)胞間隙與劃痕間距逐漸變大，細(xì)胞密度明顯降低。見圖8。

注：A. NC組；B. HG＋PA組；C～F. HG＋PA＋FC（25、50 100、150 μg/mL）組

4.5.2 α-平滑肌肌動蛋白表達(dá)

NC組細(xì)胞α-SMA表達(dá)與HG＋PA組比較無明顯差異，兩色金雞菊黃酮成分干預(yù)細(xì)胞后，α-SMA表達(dá)均不同程度上有所降低，其中兩色金雞菊黃酮成分25、50 μg/mL時較HG＋PA組α-SMA表達(dá)降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；兩色金雞菊黃酮成分100、150 μg/mL時能顯著抑制高糖高脂誘導(dǎo)HBZY-1細(xì)胞α-SMA的表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.01），其中兩色金雞菊黃酮成分150 μg/mL作用最顯著。見圖9。

注：A. NC組；B. HG＋PA組；C～F. HG＋PA＋FC（25、50 100、150 μg/mL）組；與B比較，**P＜0.01

5 討論

DN并非由單一因素引發(fā)，而是由多因素、多途徑導(dǎo)致的疾病。臨床發(fā)現(xiàn)，降血糖劑、腎素醛固酮系統(tǒng)拮抗劑的應(yīng)用并未能很好地防治DN發(fā)生。除遺傳因素外，機(jī)體長期代謝紊亂是造成DN的累積誘發(fā)因素，而糖代謝與脂代謝異常則起決定性作用。本實(shí)驗(yàn)采用葡萄糖與棕櫚酸干預(yù)HBZY-1細(xì)胞建立DN糖脂代謝異常的細(xì)胞模型，探討兩色金雞菊黃酮成分通過對模型細(xì)胞能量代謝的調(diào)控改善DN作用機(jī)制。

AMPK在腎臟中高表達(dá)，在細(xì)胞缺乏能量狀態(tài)下被活化，是糖尿病患者糖脂質(zhì)代謝調(diào)控的關(guān)鍵因子[8]。SREBP1、ACC1均為調(diào)節(jié)脂肪酸表達(dá)、參與脂肪酸合成的關(guān)鍵調(diào)控因子[9]。AMPK不僅通過調(diào)節(jié)AMP/ATP 比值調(diào)控機(jī)體血糖穩(wěn)態(tài)，同時磷酸化的AMPK通過抑制下游SREBP1、ACC1的表達(dá)，下調(diào)三酰甘油、脂肪酸等脂質(zhì)的生成和積累[10]?？梢夾MPK與DN腎臟糖脂代謝調(diào)控密切相關(guān)，本研究發(fā)現(xiàn)，兩色金雞菊黃酮成分能顯著活化模型細(xì)胞中AMPK，抑制SREBP1、p-ACC1的表達(dá)，對DN腎臟能量代謝紊亂有改善作用。

NOXs是細(xì)胞中一類具有氧化活性的蛋白。在機(jī)體代謝紊亂情況下，eNOS解偶聯(lián)，可使NOX表達(dá)增多，產(chǎn)生大量活性氧（ROS），誘導(dǎo)細(xì)胞或組織氧化應(yīng)激損傷。腎臟是氧化應(yīng)激反應(yīng)最為敏感的器官之一[11]。NOX4廣泛分布在腎臟血管、系膜細(xì)胞、腎小管、足細(xì)胞中。臨床研究發(fā)現(xiàn)，NOX4在DN患者體內(nèi)被持續(xù)激活，誘導(dǎo)產(chǎn)生大量ROS產(chǎn)物，與腎臟生理功能異常和病理結(jié)構(gòu)的改變密切相關(guān)[12]。兩色金雞菊黃酮成分干預(yù)模型細(xì)胞后，可顯著下調(diào)細(xì)胞NOX4的表達(dá)，說明兩色金雞菊黃酮成分具有抑制HBZY-1細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)的作用。但也發(fā)現(xiàn)，HG＋PA組細(xì)胞與NC組比較NOX4表達(dá)有所升高，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，推測可能由于不同種屬細(xì)胞對高糖高脂刺激反應(yīng)有所差異，大鼠腎小球系膜細(xì)胞NOX4表達(dá)對高糖高脂刺激反應(yīng)敏感性較低。與此同時，模型細(xì)胞eNOS表達(dá)顯著下調(diào)，說明細(xì)胞已受到毒性損傷，兩色金雞菊黃酮成分干預(yù)能顯著升高eNOS水平。結(jié)合上述結(jié)果，我們推測兩色金雞菊黃酮成分可能通過調(diào)控能量代謝穩(wěn)態(tài)，逆轉(zhuǎn)細(xì)胞中氧化應(yīng)激導(dǎo)致的細(xì)胞毒性和功能損傷。然而HBZY-1細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷與ECM聚集、纖維化因子釋放密切相關(guān)。腎臟不同功能細(xì)胞在氧化應(yīng)激狀態(tài)下，分泌腎組織纖維化因子α-SMA，轉(zhuǎn)化為肌組織成纖維細(xì)胞，導(dǎo)致腎臟細(xì)胞ECM聚集、基底膜增厚、不同程度的纖維化。我們通過劃痕實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)兩色金雞菊黃酮成分能顯著抑制細(xì)胞中ECM分泌，同時下調(diào)α-SMA的表達(dá)。因此，兩色金雞菊黃酮成分可能通過調(diào)控能量代謝AMPK/SREBP1/ACC1通路，抑制細(xì)胞中氧化應(yīng)激所導(dǎo)致的ECM分泌與α-SMA表達(dá)異常，對腎臟纖維化病變發(fā)揮保護(hù)作用。但能量代謝紊亂發(fā)生機(jī)制較復(fù)雜，兩色金雞菊黃酮成分調(diào)控能量代謝對腎臟的作用機(jī)制也較復(fù)雜，仍有待進(jìn)一步研究。

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Effects of Flavonoids ofNutt. on Energy Metabolism Disorder of High Glucose and High Fat-induced Cell Model

AMILA Abulati1, FAN Xuemei2, MAO Xinmin1, YAO Lan1

To observe the effects of flavonoids ofNutt. on energy metabolism disorder of high glucose and high fat-induced cell model; To explore its protective mechanism.Rat diabetic nephropathy metabolic disorder cell model was established by high glucose and high fat-induced HBZY-1 cell. HBZY-1 cells were divided into normal group, model group and flavonoids ofNutt. different dosage groups. MTS assay was used to detect the cell proliferation level of the model cells, and the morphology of the cells was observed under an inverted microscope. Cell scratch assay was used to observe the secretion of extracellular matrix in model cells. Western blot was used to detect the protein expressions of cellular energy metabolism regulator factor p-AMPKα, ACC1, SREBP1 and oxidative stress factor eNOS, and NOX4.Flavonoids ofNutt. could inhibit cell proliferation of high glucose and high fat-induced HBZY-1 cells. Bigger cell space and lower cell density were detected after Flavonoids of Coreopsis Tinctoria Nutt treatment; FC could increase the expressions of p-AMPKα, p-ACC1, and eNOS and inhibit the expressions of SREBP1, NOX4, ACC1, and α-SMA; Cell scratch assay results showed that flavonoids ofNutt. significantly inhibited ECM excretion, and α-SMA protein expression decreased.Flavonoids ofNutt. can inhibit cell proliferation and oxidative stress via regulating AMPK/SREBP1/ACC1 signaling pathway then improve the renal fibrosis.

flavonoids ofNutt.; flavonoids; oxidative stress damage; glycolipid; cell model

R285.5

A

1005-5304(2020)05-0035-07

10.3969/j.issn.1005-5304.201908139

國家自然科學(xué)基金（81560671）

姚藍(lán)，E-mail：56174475@qq.com

（2019-08-09）

（2019-09-15；編輯：華強(qiáng)）