郝艷萍 張勝利 馮驍驕

（晉中市綜合檢驗檢測中心 山西晉中 030600）

1 前言

赭曲霉毒素是繼黃曲霉毒素后又一種引起世界廣泛關(guān)注的霉菌毒素，主要由多種生長在糧谷類農(nóng)作物上的曲霉和青霉產(chǎn)生。赭曲霉毒素主要侵害動物肝臟與腎臟，可引起腎臟損傷，大量的毒素可引起動物的腸黏膜炎癥和壞死[1]。其中，毒性最大的是赭曲霉毒素A，GB 2762—2017《食品中污染物限量》[2]中規(guī)定，谷物制品中赭曲霉毒素A 的最大限量為5.0 μg/kg。

2 儀器、材料與方法

2.1 儀器

高效液相色譜儀（HPLC 美國 Waters），配熒光檢測器。

2.2 材料

赭曲霉毒素A 免疫親和柱：Agela，產(chǎn)品編號：BAC10005；甲醇（CH3OH）：色譜純（默 克）；乙 腈（CH3CN）：色譜純（默克）；冰乙酸（C2H4O2）：優(yōu)級純（天津大茂化學試劑有限公司）；赭曲霉毒素A 標準物質(zhì)[3]：GBW（E）100303，濃度 1.9 μg/mL；赭曲霉毒素A 標準儲備液：用甲醇-乙腈（50+50）溶液將標物稀釋10 倍，配制成濃度0.19 μg/mL 的標準儲備液，4℃冰箱保存；提取液：乙腈+水（60+40）；真菌毒素清洗緩沖液：稱取25.0 g 氯化鈉、5.0 g 碳酸氫鈉溶于水中，加入0.1 mL 吐溫20，用水稀釋至1 L；磷酸鹽緩沖液：稱取 8.0 g 氯化鈉、1.2 g 磷酸氫鈉、0.2 g 磷酸二氫鉀、0.2 g 氯化鉀溶解于約990 mL 水中，用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH 至7.0，用水稀釋至1 L。

2.3 方法

2.3.1 色譜條件

液相色譜柱 C18 柱（1.7 μm×2.1 mm×50 mm）；檢測器：熒光檢測器（大流通池），激發(fā)波長333 nm，發(fā)射波長 460 nm；流動相：水（含 2%冰乙酸）：乙腈=54∶46；流速：0.30 mL/min；進樣體積：3.0 μL；柱溫：25℃。

2.3.2 供測試溶液的制備

稱取樣品 25.0 g（精確至 0.1 g），加入 100 mL 提取液（乙腈+水（60+40）），振蕩 30 min，定量濾紙過濾，移取4 mL 濾液加入26 mL 磷酸鹽緩沖液混合均勻，之后于8 000 r/min 離心5 min，上清液作為濾液備用。將免疫親和柱連接于玻璃注射器下，準確移取全部濾液注入玻璃注射器中，將空氣壓力泵與玻璃注射器相連接，調(diào)節(jié)壓力，使溶液以約1 滴/s 的流速通過免疫親和柱，至空氣進入親和柱中，依次用10 mL真菌毒素清洗緩沖液、10 mL 水先后淋洗免疫親和柱，流速為 1～2 滴/s，棄去全部流出液，抽干小柱。準確加入1.5 mL 甲醇洗脫，流速約為1 滴/s，收集全部洗脫液氮吹至干，用流動相溶解殘渣定容至1 mL 供檢測用[4]。

3 檢出限的測定

赭曲霉毒素A 標準儲備液用流動相溶液逐級稀釋成 0.475、0.95、1.9、3.8、9.5、19、38 ng/mL 的標準工作液，儀器自動進樣，繪制標準曲線，詳見表1。

表1 標準曲線

將標準品溶液適當稀釋后制得一系列不同濃度的標準溶液，進樣分析，以信噪比10∶1 作為定量限，所進標液濃度為0.475 ng/mL，定量限為0.475 μg/kg，估約為0.48 μg/kg； 本實驗室赭曲霉毒素A 的定量限為 0.48 μg/kg。以信噪比 3∶1 作為檢出限，所進標液濃度為 0.158 ng/mL，檢出限為 0.158 μg/kg，估約為0.16 μg/kg； 本實驗室赭曲霉毒素A 的檢出限為0.16 μg/kg（以樣品稱樣量為25.0 g，稀釋倍數(shù)為25，最終定容體積為1.0 mL 計），低于標準中的谷物食品測定定量限 1 μg/kg 和檢出限 0.3 μg/kg。

4 精密度試驗

以一陽性燕麥作為樣品，稱取6 份，按2.3.2 方法處理后上機測定，做精密度試驗。結(jié)果詳見表2。

5 準確度試驗

取上述樣品共稱取18 份，每份稱取質(zhì)量25.0 g，每6 份為一組，每組分別加入不同濃度水平的標準物質(zhì)溶液適量，樣品號1～6 瓶為一組，每瓶各加入0.19 μg/mL 赭曲霉毒素 A 標準儲備液 100 μL，樣品號 7～12 瓶為一組，每瓶各加入 0.19 μg/mL 赭曲霉毒素 A 標準儲備液 500 μL，樣品號 13～18 瓶為一組，各加入0.19 μg/mL 赭曲霉毒素A 標準儲備液1.5 mL，按2.3.2 方法處理后上機測定做加標回收試驗，同時計算每組加標后樣品測定值的相對標準偏差，進一步進行精密度確認，結(jié)果詳見表3。

表2 精密度試驗結(jié)果

表3 3 組樣品回收率與相對標準偏差

6 分析與討論

本文用HPLC 測定谷物食品中赭曲霉毒素A含量，在0～40 ng/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.999 9，赭曲霉毒素A 的檢出限為0.16 μg/kg，精密度相對標準偏差為1.93%～3.05%，加標回收率為80%～100%。可見晉中市綜合檢驗檢測中心實驗室現(xiàn)有的儀器設(shè)備能滿足GB 5009.6—2016《食品中赭曲霉毒素A的測定》[5]第一法免疫親和凈化液相色譜法的要求，可以正常開展谷物食品中赭曲霉毒素A 的檢測工作。