閆培培 張裕民

【摘要】 目的 探究高效液相色譜法（HPLC）在腦心清膠囊添加硝苯地平檢測中的應用價值。方法 色譜柱為Agilent C18（250 mm×4.6 mm， 5 μm）， 以甲醇-水（60∶40）為流動相， 檢測波長為235 nm，?流量為1.0 ml/min， 進樣量為20 μl， 柱溫為30℃。結果 處于27.98～139.9 μg/ml范圍內(nèi)， 硝苯地平濃度線性關系良好， 得出Y=130.2+13.92X回歸方程， 相關系數(shù)：r=0.9941。重復性RSD是0.3%（n=5）， 進樣精密度0.7%（n=5）， 回收率平均值100.1%， RSD：1.0%（n=5）。結論 采用HPLC對腦心清膠囊添加硝苯地平進行檢測， 發(fā)現(xiàn)其準確度、靈敏度高， 重復性好， 是用于硝苯地平被非法添加在腦心清膠囊中測量的一種極佳的測定方式， 具有臨床應用價值。

【關鍵詞】 腦心清膠囊;硝苯地平;高效液相色譜法

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.12.088

硝苯地平適用于各種類型高血壓， 是一種防治心絞痛、抗高血壓的藥物， 對重度、頑固性高血壓有極佳的療效， 其起效快、峰/谷比值高是此藥的特點， 且經(jīng)臨床使用， 療效獲得肯定[1]。但是， 急需建立硝苯地平的檢驗檢測方式， 對此類非法添加進行嚴厲打擊[2]。本文對HPLC檢測腦心清膠囊添加硝苯地平的應用價值進行研究， 結果報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選擇色譜柱為Agilent （250 mm×4.6 mm，?5 μm）， 以甲醇-水（60∶40）為流動相， 檢測波長為235 nm，?流量為1.0 ml/min， 進樣量為20 μl， 柱溫為30℃。選擇帶DAD檢測器的Agilent 1260高效液相色譜儀， 島津UV 2700型紫外可見分光光度計;Mettler XS105型分析天平;上海波龍電子設備有限公司生產(chǎn)的USA-602超聲儀， Mettler Seven Excellence多功能參數(shù)測定儀。同時選取不同批號的、某廠家生產(chǎn)的3份腦心清膠囊樣品， 給出A、B、C編號， 并選擇編號為D的另一家腦心清膠囊， 選取批號為100338-201605中國食品藥品檢定研究院生產(chǎn)的硝苯地平對照品。甲醇（色譜醇）;超純水。

1. 2 方法

1. 2. 1 色譜條件 選擇色譜柱為Agilent （250 mm×4.6 mm， 5 μm）， 以甲醇-水（60∶40）為流動相， 檢測波長為235 nm， 流量為1.0 ml/min， 進樣量為20 μl， 柱溫為30℃。

1. 2. 2 定性實驗 精密稱取硝苯地平對照品27.40 mg置入100 ml的量瓶中， 用甲醇稀釋至刻度， 搖勻， 濾過， 精密量取續(xù)濾液3 ml置10 ml的量瓶中， 加甲醇稀釋至刻度， 濾過并搖勻， 作為對照品溶液分析。分別選擇各20粒樣品A、B、C的編號， 對內(nèi)容物進行稱重， 分別為5.3834、5.3840、5.3765 g， 分別將內(nèi)容物置入研缽中研磨， 再分別精密稱取B：0.8171 g， A：0.8076 g，?C：0.8031 g置于50 ml的量瓶中， 加適量甲醇， 振搖5 min溶解， 超聲處理10 min， 加甲醇稀釋到刻度， 濾過， 作為供試品溶液實施分析。結果：對照品色譜和供試品色譜中相應保留時間處， 紫外光譜圖一致， 檢出一個色譜峰， 說明在3種樣品中均含有硝苯地平。

選擇編號為D的另一家腦心清膠囊， 在50 ml的瓶中加入3粒內(nèi)容物， 加適量甲醇， 振搖5 min溶解， 超聲處理10 min， 加甲醇稀釋到刻度， 搖勻濾過， 選擇濾液作供試品溶液實施分析。結果：基于硝苯地平對照品相應保留時間內(nèi)， 樣品D無色譜峰， 顯示此樣品不含硝苯地平。分別稀釋后進樣的硝苯地平對照品溶液， 當信噪比為3時， 檢測限為0.02 μg。

1. 2. 3 定量實驗 對照液穩(wěn)定性實驗：分別在30 min、1 h、1.5 h、2 h、3 h選擇“定性實驗”項下的硝苯地平對照品溶液進行分析。對照液至少于3 h內(nèi)穩(wěn)定， 硝苯地平RSD為1.1%。

線性實驗：精密稱定硝苯地平對照品27.98 mg置100 ml的量瓶中， 加甲醇溶解稀釋至刻度， 搖勻， 分別精密量取5.00、4.00、3.00、2.00、1.00 ml置10 ml的量瓶中， 加甲醇溶解稀釋至刻度， 配制成濃度分別為139.90、111.92、83.94、55.96、27.98 μg/ml的溶液， 分別進樣20 μl實施分析。相應濃度為橫坐標（X）、縱坐標（Y）， 得出Y=130.2+13.92X回歸方程， 相關系數(shù)：r=0.9941。

重復性實驗：在研缽中研磨20粒A號樣品內(nèi)容物稱重5.3840 g， 分別精密稱取0.8072、0.8076、0.8031、0.8171、0.8076 g置50 ml的量瓶中， 加適量甲醇， 振搖5 min， 超聲處理10 min， 加甲醇稀釋到刻度， 濾過， 作為供試品溶液實施分析， 平均測定5份。結果計算出平均含量為1.03 mg/粒， 計算硝苯地平的含量， 依據(jù)“含量測定”項下校正因子（f）計算， RSD為0.3%。

進樣精密度實驗：連續(xù)5次， 選擇“定性實驗”下的對照品溶液， 結果得RSD為0.7%。

2 結果

2. 1 硝苯地平回收率實驗 精密稱取硝苯地平對照品27.75 mg置100 ml的量瓶中， 加甲醇稀釋到刻度， 精密量取15 ml置于50 ml量瓶中， 加甲醇溶解稀釋到刻度、搖勻， 在10 ml的量瓶中放置“定性試驗”下A樣品溶液5 ml， 精密量取2 ml， 加甲醇稀釋到刻度且搖勻， 并實施進樣分析。見表1。

2. 2 HPLC對腦心清膠囊添加硝苯地平的檢測結果? ?精密稱取硝苯地平對照品27.40、29.04 mg分置100 ml的量瓶中， 并加甲醇溶解稀釋到刻度， 搖勻， 分別精密量取3 ml置10 ml的量瓶， 加甲醇稀釋到刻度， 進樣分析。分別選擇各20粒樣品A、B、C的內(nèi)容物稱重， 樣品分別為：C：0.8031、0.8054 g;B：0.8171、0.8189 g;A：0.8706、0.8711 g;均放置在50 ml的量瓶中， 加適量甲醇超聲處理10 min， 振搖5 min， 加甲醇稀釋至刻度， 濾過， 選擇續(xù)濾液20 μl進樣分析。見表2。

3 討論

經(jīng)實驗， 試用幾種不同色譜柱， 基于固定相的選擇上效果均較為理想， 如應用C18、C8柱， 腦心清和硝苯地平分離度理想， 峰形尖銳， 色譜峰可較好分離， 保留時間適當。通常以對照品和保留時間核對定性， 確認紫外吸收光譜， 當判斷為偽藥， 則非法添加西藥硝苯地平。本文實施線性關系等方法學研究， 為了審慎， 對其加入量為每粒1 mg稍多進行準確測定[3， 4]。

硝苯地平無臭、無味， 是黃色結晶粉末、遇光不穩(wěn)定， 易出現(xiàn)歧化反應， 易分解， 在價格上此種藥物有較強優(yōu)勢。存在負性肌力和傳導的作用， 藥效時間短、血壓波動大， 增加冠心病患者死亡率， 但是容易出現(xiàn)非法添加使用化學藥物的情況， 造成無意中增加患者的風險性， 劑量上難以很好的把握， 對患者的生命產(chǎn)生嚴重威脅， 發(fā)生不良反應[5， 6]。在具體的實驗過程中因硝苯地平遇光不穩(wěn)定， 溶解配制完成后避免分解， 需盡快使用[7]。腦心清膠囊主要成分為柿葉提取物， 內(nèi)含兒茶酸、槲皮素、山奈素、黃酮等有效成分， 選取現(xiàn)代化的方式進行定性定量分析是提高其藥效質(zhì)量的有效方式。

綜上所述， 針對腦心清膠囊添加硝苯地平檢測中采用HPLC， 發(fā)現(xiàn)其準確度、靈敏度高， 重復性好， 能夠作為一種極佳的測定方式， 用于硝苯地平被非法添加在腦心清膠囊中的測量， 具有臨床應用價值。

參考文獻

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[2] 徐琴玉， 陳新軍. 用腦心通膠囊治療不穩(wěn)定型心絞痛對患者血清炎性細胞因子的水平及臨床療效的影響. 當代醫(yī)藥論叢， 2019， 17（15）：158-159.

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[4] 張明， 任宏偉， 劉育慧. 心腦清軟膠囊聯(lián)合匹伐他汀治療高脂血癥的臨床研究. 現(xiàn)代藥物與臨床， 2019， 34（3）：677-681.

[5] 李國宏， 紀品川， 王雅君. 心腦康膠囊對慢性穩(wěn)定性心絞痛患者血液流變學和血清細胞因子的影響. 中國煤炭工業(yè)醫(yī)學雜志， 2019， 22（2）：191-194.

[6] 裴月梅. HPLC法測定清腦降壓片中非法添加的氫氯噻嗪、鹽酸哌唑嗪、鹽酸異丙嗪、利血平、硝苯地平. 中草藥， 2014， 45（23）：3414-3417.

[7] 孫曉巖， 李清. HPLC法同時檢測29家硝苯地平制劑的有關物質(zhì). 沈陽藥科大學學報， 2018（6）：469-476.

[收稿日期：2019-11-07]