鄒天雨，趙宇，馬莉，程為平*

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040；2.黑龍江中醫(yī)藥大學附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040)

抑郁癥(Depression)屬于抑郁障礙的亞型之一[1]，以持久而顯著的情緒低沉、興趣缺失為主要特點，長時間心境障礙可伴有軀體癥狀的出現(xiàn)，在我國發(fā)病率已達到總人數的4.2%[2]。抑郁癥的發(fā)病機制尚不明確，還停留在假說階段，其中單胺類神經遞質的含量變化被廣泛認為是抑郁癥產生和轉歸的重要因素[3]，常用的抗抑郁藥物也是以影響神經遞質含量起效。前額葉皮質負責調控情感，海馬負責認知與記憶功能，應激會使這兩個區(qū)域神經元結構被破壞，神經網絡功能障礙，就會導致神經遞質分泌相對不足，進而導致抑郁癥的發(fā)生。針灸治療抑郁癥具有安全、副作用小等特點且療效顯著[4]，而電針可保持持續(xù)的刺激量和作用時間，使神經元釋放的神經遞質增加，以到達治療抑郁癥的目的。筆者結合多年臨床實踐，選用慢性不可預知溫和刺激(Chronic unpredictable mild stimulation, CUMS)模型，以電針百會及神庭穴為治療方法，檢測模型小鼠不同腦區(qū)單胺類神經遞質的含量變化，探討其作用機理，為臨床推廣此方法提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 動物與分組

SPF級ICR小鼠48只，雌性8周齡，體質量20～30 g，購于北京維通利華實驗技術有限公司。常規(guī)適應性飼養(yǎng)1周后，按數字隨機表將小鼠分為空白組、模型組、對照組(陽性藥物對照)和治療組(電針組)，每組各12只。

1.2 主要器材、試劑和儀器

安迪牌不銹鋼毫針(長25 mm、直徑0.25 mm)；華誼牌電針儀(型號：G6805-2A)；DB018型小鼠開場活動記錄系統(tǒng)(北京智鼠多寶科技)；去甲腎上腺素(NE)、5-羥色胺(5-HT)、多巴胺(DA)標準品(美國Sigma公司)；鹽酸氟西汀膠囊(百優(yōu)解，20 mg/粒，禮來蘇州制藥有限公司)；捷盛牌超低溫冰箱(DW-86L80);LICHEN牌臺式高低速離心機(LC-LX-HL210D);上海精科超高效液相色譜儀 (LC-210)。

1.3 構建動物模型

除空白組外，其余3組進行CUMS模型構建，根據《神經生物學實用實驗技術》[5]中步驟進行操作。動物在21 d的時間內接受慢性、不可預知的溫和刺激。日間刺激包括強迫冰水游泳、搖晃鼠籠、束縛管束縛、胡椒粉等氣味刺激；夜間刺激包括持續(xù)燈光照射、鼠墊潮濕處理、傾斜鼠籠、禁食水24 h，每天從日間和夜間刺激方法中各挑選一種刺激對小鼠進行處理，順序隨機，連續(xù)不重復，使小鼠不能夠預知刺激的出現(xiàn)。為減少不同應激對行為和生化指標的影響，測試當天所有小鼠都接受相同刺激。

1.4 干預處理

造模完成后空白組及模型組均進行常規(guī)飼養(yǎng)。對照組進行藥物灌胃，將20 mg的氟西汀研成粉末，加100 mL蒸餾水配制成懸濁液(0.2 mg/mL)，使用灌胃器將藥液由動物口直接注入到胃中，按0.3 mg/kg的劑量，連續(xù)灌服21 d。治療組根據《實驗針灸學》[6]明確小鼠百會穴、神庭穴所處定位，以毫針分別向前平刺，深度約2 mm。采用 G6805 電針儀進行電針干預，針柄末端連接導電線，正極連接百會穴、負極連接神庭穴，電壓2 V，疏密波，頻率1/20 Hz，每日1次，每次20 min，共治療21 d。

1.5 動物行為學觀察

記錄造模前、造模第21天及干預第21天的行為學數據。糖水消耗實驗記錄小鼠禁食禁水24 h后, 給予10 g/L蔗糖水飲用24 h后糖水的消耗量。曠場實驗記錄測定5 min內各組小鼠水平運動和垂直運動的變化，以動物穿越底面的塊數為水平活動的得分數，以直立次數為垂直活動的得分數。將小鼠放入曠場箱正中, 以小鼠三足跨入鄰格的次數為水平活動得分, 以雙足離開底面直立次數為垂直活動得分。

糖水消耗量(%)=消耗糖水量/糖水總量×100%

1.6 單胺類神經遞質測定

干預完成后，取各組模型小鼠, 以4%水合氯醛按0.1 mL/10 g腹腔注射進行麻醉，麻醉起效后將小鼠固定于鼠板上。將小鼠斷頭，經顱前正中線剪開頭皮暴露顱骨，剪開枕骨，小心撬開顱骨，取出腦組織。冰盤上剝離大鼠腦組織后, 快速剪取前額葉與海馬組織, 稱重后液氮速凍后放入-80 ℃冰箱保存。取小鼠海馬區(qū)及前額葉腦組織，加入二羥基苯甲酸, 冰浴超聲勻漿30 s,13 500 r/min低溫4 ℃離心15 min, 將上清液采用高效液相色譜法測定不同腦區(qū)單胺類神經遞質5-HT、NE、DA的含量變化。

1.7 統(tǒng)計學分析

2 結果

2.1 各組小鼠糖水消耗實驗結果比較

各組小鼠造模前糖水消耗無明顯差異(P>0.05)。造模第21天，模型組、對照組、治療組同空白組相比，糖水消耗量明顯下降(P<0.05)。干預第21天，對照組、治療組與模型組相比，糖水消耗量明顯升高(P<0.05)，對照組與治療組相比，無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組小鼠不同時期糖水消耗量比較

注：與空白組比較,＊P<0.05；與模型組比較,△P<0.05。

2.2 各組小鼠曠場實驗結果比較

各組小鼠造模前曠場實驗水平及垂直運動次數無明顯差異(P>0.05)。造模第21天，模型組、對照組、治療組同空白組相比，曠場實驗水平及垂直運動次數明顯下降(P<0.05)。干預第21天，對照組、治療組與模型組相比，曠場實驗水平及垂直運動次數明顯升高(P<0.05)，對照組與治療組相比，無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2和表3。

表2 各組小鼠不同時期曠場實驗水平運動次數比較次)

注：與空白組比較,＊P<0.05；與模型組比較,△P<0.05。

表3 各組小鼠不同時期曠場實驗垂直運動次數比較次)

注：與空白組比較,＊P<0.05；與模型組比較,△P<0.05。

2.3 各組小鼠前額葉皮質單胺類神經遞質含量變化

與空白組對比，模型組小鼠前額葉皮質單胺類神經遞質含量較少(P<0.05)，對照組、治療組與模型組相比，小鼠前額葉皮質單胺類神經遞質含量升高(P<0.05)，對照組與治療組相比，無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表4。

表4 各組小鼠前額葉皮質神經遞質含量比較

注：與空白組比較,＊P<0.05；與模型組比較,△P<0.05。

2.4 各組小鼠海馬區(qū)單胺類神經遞質含量變化

與空白組對比，模型組小鼠海馬區(qū)單胺類神經遞質含量較少(P<0.05)，對照組、治療組與模型組相比，小鼠海馬區(qū)單胺類神經遞質含量升高(P<0.05)，對照組與治療組相比，無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表5。

表5 各組小鼠海馬區(qū)神經遞質含量比較

注：與空白組比較,＊P<0.05；與模型組比較,△P<0.05。

3 討論

針刺治療抑郁癥的方法眾多且療效確切[7]。本實驗依據多年臨床經驗，選用了電針百會及神庭穴的方法，以CUMS模型驗證此方法有效性并探討可能的作用機制。根據實驗中行為學結果顯示，CUMS模型降低了小鼠的糖水消耗量，而且減少了小鼠的自發(fā)運動，貼近人類抑郁情緒下快感缺失和意志活動減弱的癥狀。對照組和治療組在干預后的數據變化，說明電針百會及神庭穴可以明顯改善抑郁小鼠的動物行為學。

單胺類神經遞質假說被認為是抑郁癥發(fā)生的最直接機制之一[8]，神經信號的傳遞依賴于突觸間神經遞質的功能和含量，如果含量減少則會導致情緒調節(jié)的神經網絡被抑制，產生抑郁情緒[9]。5-HT可以調節(jié)人類情緒，DA與人的精神狀態(tài)有關，NE可以影響人類快樂感覺及應激性反應功能[10]。目前，包括氟西汀在內的臨床常用藥物，大多是以突觸間隙中5-HT等遞質含量增加為作用目的。所以理論上，任何增加腦內單胺類神經遞質含量的治療方法都可以起到一定的治療作用。對照組和治療組的小鼠腦內5-HT、NE、DA含量明顯高于模型組，表明電針百會及神庭穴治療抑郁癥的作用機制之一，就是可以提高前額葉和海馬區(qū)單胺類神經遞質的含量。前額葉皮質是調控人類情緒的重要區(qū)域，海馬區(qū)與人類的認知和記憶密切相關[11]。研究表明，抑郁癥患者的前額葉與海馬區(qū)呈現(xiàn)萎縮狀態(tài)，而經過治療后可得到明顯改善[12]。

百會穴為諸陽之會，開竅醒神，振奮陽氣；神庭穴清散頭風，鎮(zhèn)靜安神；此二穴皆屬督脈，提升陽氣。抑郁癥患者病初多氣滯實火之證，病久則陽郁神疲，由實轉虛，陽氣不足則腦神失養(yǎng)而發(fā)病。本實驗以迎隨補瀉之補法刺入，電針連接以百會為正神庭為負，電流由百會穴流向神庭穴為補法，可激發(fā)陽氣，安神定志。

隨著科學技術的發(fā)展，腦的網絡功能也越來越清晰。有研究指出抑郁癥患者中央執(zhí)行網絡的功能連接異常，對情緒和認知信息的加工和處理能力會下降[13]。中央執(zhí)行網絡主要包括前額葉、后頂葉等部分皮層[14]。根據解剖位置，百會與神庭穴分別位于后頂葉和前額葉的投射區(qū)，鐘慧[15]研究發(fā)現(xiàn)，針刺這兩個穴位會引起頂下小葉、額中回、額下回的腦功能活動活躍。陳華德等[16]發(fā)現(xiàn)針刺百會后海馬及海馬旁回信號增強。通過陳苑[17]的研究，可以說明5-HT與抑郁癥腦網絡的功能連接關系密切，單胺類神經遞質可能是腦網絡功能連接的物質基礎。電針百會及神庭穴很可能是通過提高腦功能區(qū)神經遞質含量，繼而加強了中央執(zhí)行網絡等腦網絡系統(tǒng)的連接。未來將進一步探討抑郁癥患者腦網絡功能與針刺選穴的關系，驗證電針百會及神庭穴的作用機制，為臨床治療此類疾病提供新的思路與方法。