趙永成 于薇 任可馨 付微 梁軍

【摘要】目的 探討NRG1可否促進Whartons jelly間充質(zhì)干細胞表達VEGF。方法 提取人臍帶Whartons jelly間充質(zhì)干細胞;細胞分未轉(zhuǎn)染組和轉(zhuǎn)染組;NRG1轉(zhuǎn)染三天后，ELISA方法檢測上清液中VEGF的含量，免疫熒光方法檢測細胞中VEGF的表達。結(jié)果 轉(zhuǎn)染組上清液中VEGF的含量和免疫熒光陽性率與未轉(zhuǎn)染組的比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 NRG1可促進Whartons jelly間充質(zhì)干細胞表達VEGF。

【關(guān)鍵詞】Whartons jelly間充質(zhì)干細胞;神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1;血管內(nèi)皮生長因子

【中圖分類號】R329 【文獻標志碼】A 【文章編號】ISSN.2095.6681.2020.9..02

臍帶Whartons jelly間充質(zhì)干細胞（Whartons jelly mesenchymal stem cells，WJMSCs）被認為是理想的干細胞源[1]。但移植的細胞存在存活率低的問題。神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1（neuregulin-1，NRG-1）屬于生長和分化因子家族，可參與血管新生[2]。在體外，BMP4可否通過上調(diào)WJMSCs表達血管內(nèi)皮生長因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF），進而促進血管新生改善細胞生存環(huán)境，未查見相關(guān)報道。

1 材料與方法

1.1? 材料

人臍帶（牡丹江紅旗醫(yī)院）;FBS、DMEM培養(yǎng)基（Hyclone）;NRG-1質(zhì)粒（牡丹江醫(yī)學(xué)院干細胞研究所）;ELISA試劑盒（Takara）;VEGF抗體（Sigma）。

1.2? 方法

1.2.1 細胞提取

取剖腹產(chǎn)臍帶，剪成直徑約0.3 cm的組織塊，用10% FBS-DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)組織塊;每2 d換液一次;細胞融合至90%時傳代。

1.2.2 實驗分組

實驗分為轉(zhuǎn)染組和未轉(zhuǎn)染組。

1.2.3 細胞轉(zhuǎn)染

取第三代細胞，按Lipofectamine TM 2000說明書把VEGF質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞。細胞轉(zhuǎn)染3天后，進行VEGF檢測。

1.2.4 ELISA檢測

按ELISA試劑盒說明書檢測上清液中VEGF的含量。用酶標儀在450 nm波長下檢測樣本OD值。

1.2.5 免疫熒光檢測

4%多聚甲醛固定15 min后1%牛血清白蛋白封閉25 min;VEGF抗體孵育100 min;二抗孵育50 min;DAPI復(fù)染15 min。陽性率=紅色熒光數(shù)/藍色熒光數(shù)×100%。

1.3? 統(tǒng)計學(xué)方法

統(tǒng)計分析采用SPSS 13.0軟件，計量數(shù)據(jù)以x±s表示，組間比較采用單因素方差，差異顯著的判斷標準為P<0.05。

2 結(jié) 果

2.1? ELISA檢測結(jié)果

如表1所示，轉(zhuǎn)染組上清液VEGF的含量與對照組的比較，具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.2? 免疫熒光檢測結(jié)果

陽性細胞的胞質(zhì)和突起呈紅色熒光;經(jīng)非特異性染色的細胞核呈藍色熒光（圖1）。轉(zhuǎn)染組的陽性細胞表達率與對照組的比較，具有統(tǒng)計學(xué)意義（表2）。

3 討 論

NRG1可促進多種細胞表達VEGF。NRG1可使發(fā)育的心肌增強VEGF的表達 [3];還能增加VEGF在人冠狀動脈平滑肌細胞中的表達[4]。在病理情況下，結(jié)腸癌患者的活檢標本中，NRG1與VEGF表達呈正相關(guān)[5]。本研究發(fā)現(xiàn)，NRG1可促進WJMSCs表達VEGF。這些研究結(jié)果表明，NRG1可調(diào)控VEGF的表達，進而參與增生、抗凋亡和血管新生等多種生物學(xué)過程。

NRG1的配體是酪氨酸激酶（Erythroblastic leukemia viral oncogene homologs，ErbB）受體。NRG1∕ErbB信號不僅通過促VEGF表達途徑[5]，還可通過直接作用血管內(nèi)皮[2]和血管平滑肌[6]途徑促進血管新生。

參考文獻

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作者簡介：趙永成（1984年-），男，牡丹江醫(yī)學(xué)院在讀碩士，研究方向：干細胞分化機制及臨床應(yīng)用的實驗研究

通訊作者：梁 軍（1972年-），男，博士，教授，牡丹江干細胞研究所所長，

研究方向：干細胞分化機制及臨床應(yīng)用的實驗研究