陳靜　朱鴻鵬　涂曉文

[摘 要] 目的：探討血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）在多囊腎（Polycystic kidney disease，PKD）發(fā)生發(fā)展中的水平變化及機(jī)制，為PKD的臨床治療提供新的思路。方法：以我院2012年8月—2015年8月收治的118例PKD患者為研究對(duì)象，納入觀察組，并按照其腎小球?yàn)V過(guò)率（Glomerular filtration rate，GFR）狀態(tài)，將GFR≥25 mL/min患者納入高濾過(guò)率組，將GFR<25 mL/min患者納入低濾過(guò)率組，此外，選取同期50例腎透明細(xì)胞癌患者，納入對(duì)照組。比較觀察組患者腎壁組織、對(duì)照組患者癌旁正常腎組織VEGF表達(dá)水平，并分析VEGF與觀察組患者GFR的關(guān)系。結(jié)果：觀察組VEGF表達(dá)等級(jí)高于對(duì)照組，其VEGF陽(yáng)性率為83.05%，亦高于對(duì)照組的54.00%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。高濾過(guò)組VEGF表達(dá)等級(jí)高于對(duì)照組，其VEGF陽(yáng)性率為97.96%，亦高于對(duì)照組的72.46%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：VEGF在PKD的發(fā)生過(guò)程中扮演了重要角色，隨著腎纖維化嚴(yán)重程度的逐漸增加，PKD腎臟組織VEGF表達(dá)逐漸下降，PKD早期實(shí)施VEGF抑制治療、PKD中晚期實(shí)施VEGF補(bǔ)充治療有望成為改善PKD患者預(yù)后質(zhì)量的新途徑。

[關(guān)鍵詞] 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；多囊腎；腎小球?yàn)V過(guò)率；機(jī)制

中圖分類號(hào)：R692 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：2095-5200（2016）05-020-03

DOI：10.11876/mimt201605008

多囊腎（Polycystic kidney disease，PKD）是一種常染色體遺傳病，患者以腎臟皮質(zhì)及髓質(zhì)出現(xiàn)大量囊腫為主要病理生理改變，囊腫對(duì)腎組織的持續(xù)擠壓可導(dǎo)致腎實(shí)質(zhì)損害，并引發(fā)血尿、蛋白尿等臨床癥狀，部分患者可因毒素積累發(fā)生尿毒癥，生存質(zhì)量受到嚴(yán)重威脅[1]。目前臨床對(duì)PKD的發(fā)病機(jī)制尚無(wú)明確闡釋，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，囊腫襯里上皮細(xì)胞過(guò)度增殖、囊腫周圍新生血管生成是導(dǎo)致PKD發(fā)生發(fā)展的主要原因[2]。研究發(fā)現(xiàn)，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）可參與小鼠PKD模型新生血管生成環(huán)節(jié)，導(dǎo)致囊腫增多、增大及腎臟組織纖維化[3]，但關(guān)于VEGF在PKD患者發(fā)病機(jī)制中作用研究較為缺乏。本研究探討VEGF在PKD發(fā)生發(fā)展中的水平變化及機(jī)制，希望為PKD發(fā)病機(jī)制及治療方案的指導(dǎo)提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以我院2012年8月—2015年8月收治的118例PKD患者為研究對(duì)象，均接受去頂減壓術(shù)治療，并經(jīng)術(shù)后病理組織學(xué)檢查確診PKD[4]，排除合并腎臟嚴(yán)重感染、自發(fā)性出血、難治性高熱、惡性腫瘤者，納入觀察組，并按照其腎小球?yàn)V過(guò)率（Glomerular filtration rate，GFR）狀態(tài)，將GFR≥25 mL/min患者納入高濾過(guò)率組，將GFR<25 mL/min患者納入低濾過(guò)率組[5]，此外，選取同期50例腎透明細(xì)胞癌患者，均經(jīng)術(shù)后病理組織學(xué)檢查明確診斷且癌旁組織為正常腎組織，納入對(duì)照組。觀察組男79例，女39例，年齡32～51歲，平均年齡（40.85±5.42）歲；對(duì)照組男33例，女17例，年齡30～55歲，平均（41.07±6.38）歲。兩組患者性別、年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

1.2 研究方法

1.2.1 標(biāo)本取材 觀察組標(biāo)本取自于術(shù)中新鮮多囊腎壁組織，對(duì)照組標(biāo)本取自術(shù)中癌旁組織，標(biāo)本自腎透明細(xì)胞癌邊緣≥5 cm且病理組織學(xué)檢查未見癌細(xì)胞。標(biāo)本取出體內(nèi)后立即以10%中性福爾馬林固定，行乙醇和二甲苯脫水、透明，石蠟包埋，保存待測(cè)。

1.2.2 檢測(cè)方法 使用免疫組化染色法檢測(cè)待測(cè)標(biāo)本VEGF表達(dá)情況，檢測(cè)方法[6]：實(shí)施切片脫蠟、水化，以PBS沖洗后行抗原修復(fù)，而后置于3% H2O2去離子水中，室溫孵育10 min，PBS沖洗并滴加適當(dāng)比例稀釋后一抗，置于恒溫孵育箱內(nèi)，37℃孵育1 h；PBS沖洗并滴加二抗，置于恒溫孵育箱內(nèi)，37℃孵育30 min。最后實(shí)施DAB顯色、蘇木素復(fù)染、梯度酒精脫水、二甲苯透明、樹膠封片，以PBS代替一抗為陰性對(duì)照，實(shí)施結(jié)果判定。

1.2.3 結(jié)果判定 于光學(xué)顯微鏡（×400）下，采用半定量5分評(píng)分法，選取10個(gè)不重疊的視野，根據(jù)VEGF在標(biāo)本內(nèi)染色強(qiáng)弱深度及染色范圍進(jìn)行結(jié)果判定，判定標(biāo)準(zhǔn)[7]：染色強(qiáng)度：0分：無(wú)著色；1分：淺著色，視野內(nèi)可見棕黃色片狀染色；2分：深著色，視野內(nèi)可見棕黃色大顆粒或棕黑色染色；染色范圍：1分：棕黃色染色范圍≤25%；2分：棕黃色染色范圍25%～50%；3分：棕黃色染色范圍50%～75%；4分：棕黃色染色范圍≥75%。以染色強(qiáng)度及染色范圍評(píng)分之和為分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，總分<2分為（﹣），2分≤總分<3分為（+），3分≤總分<4分為（++），總分≥4分為（+++），其中（﹣）、（+）為低表達(dá)（陰性），（++）、（+++）為高表達(dá)（陽(yáng)性）。

1.3 分析方法

比較VEGF在PKD腎臟組織、正常腎組織中表達(dá)情況，總結(jié)VEGF在PKD發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮的作用，并比較VEGF在不同腎功能的PKD腎臟組織中表達(dá)情況，探討VEGF在PKD發(fā)展過(guò)程中扮演的角色。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

對(duì)本臨床研究的所有數(shù)據(jù)采用SPSS18.0進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以（n/%）表示，并采用χ2檢驗(yàn)，等級(jí)資料采用秩和檢驗(yàn)，計(jì)量資料以（x±s）表示，滿足方差齊性則采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，若方差不齊，則采用校正t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PKD腎臟組織、正常腎組織中VEGF表達(dá)情況

觀察組VEGF陽(yáng)性率為83.05%，亦高于對(duì)照組的54.00%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2 不同腎功能PKD腎臟組織中VEGF表達(dá)情況

觀察組118例患者中，49例患者GFR≥25 mL/min，納入高濾過(guò)組，其余69例患者GFR<25 mL/min，納入低濾過(guò)組。高濾過(guò)組VEGF表達(dá)等級(jí)高于對(duì)照組，其VEGF陽(yáng)性率為97.96%，亦高于對(duì)照組的72.46%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

3 討論

PKD是全球范圍內(nèi)發(fā)病率最高的單基因遺傳性疾病，約有接近80%的患者在77歲前可進(jìn)展至終末期腎病甚至死亡，對(duì)社會(huì)及家庭造成了沉重負(fù)擔(dān)[8]。由于目前醫(yī)學(xué)界對(duì)PKD的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，仍缺乏特異性治療藥物，臨床治療重點(diǎn)多集中于緩解疼痛、血尿、高血壓等并發(fā)癥，在預(yù)防或延緩PKD進(jìn)展方面具有一定意義，但無(wú)法阻止PKD自然病程的進(jìn)展[9]。

終末期腎病的特征為腎臟發(fā)生不可逆性的纖維化，而腎臟纖維化程度與腎臟損傷程度具有較高的一致性[10]。在腎臟纖維化的發(fā)生過(guò)程中，上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）是其必經(jīng)之路及重要機(jī)制，當(dāng)腎臟發(fā)生EMT時(shí)，腎小管上皮細(xì)胞間緊密連接特性消失，細(xì)胞膜粘連受體顯著減少，從而逐漸出現(xiàn)間質(zhì)細(xì)胞特征。李林等[11]研究發(fā)現(xiàn)，PKD小鼠模型腎臟纖維化過(guò)程中，部分成纖維母細(xì)胞可能來(lái)源于腎小管上皮組織向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化，進(jìn)一步印證了PKD發(fā)生發(fā)展過(guò)程中EMT發(fā)揮的重要作用。此外，Seeger等[12]指出，腎臟囊腫發(fā)展過(guò)程與腫瘤發(fā)展相似，亦需要大量氧氣及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，以保證能量供應(yīng)及發(fā)育活性，故往往伴有微小毛細(xì)血管的廣泛生長(zhǎng)。

作為一種促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增生、毛細(xì)血管生成的關(guān)鍵因子，VEGF具有激活并刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞、啟動(dòng)新生血管發(fā)育、調(diào)節(jié)新生血管塑造成形功能，可能在PKD發(fā)生的EMT及血管廣泛生長(zhǎng)環(huán)節(jié)扮演了重要角色[13]。本研究結(jié)果示，PKD病變腎臟組織VEGF表達(dá)等級(jí)及陽(yáng)性率均高于正常組織，說(shuō)明VEGF在PKD的發(fā)生中占據(jù)著重要地位。景穎等[14]指出，正常腎臟內(nèi)，VEGF主要表達(dá)于足細(xì)胞、遠(yuǎn)端腎小管及集合管上皮細(xì)胞，在缺血缺氧引發(fā)的急性腎功能衰竭中，VEGF表達(dá)明顯增高，并通過(guò)刺激VEGF-2介導(dǎo)的信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，發(fā)揮抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡、保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞、加速腎臟康復(fù)作用，并通過(guò)刺激血管生成，促進(jìn)腎小球病變恢復(fù)。該結(jié)果表明，在PKD發(fā)生早期，VEGF表達(dá)呈上升狀態(tài)，以拮抗腎臟損傷，延緩EMT進(jìn)程。

通過(guò)上述研究，可以發(fā)現(xiàn)，VEGF在PKD發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮了重要作用，而隨著VEGF的升高，患者成纖維細(xì)胞增殖、成纖維細(xì)胞向肌成纖維轉(zhuǎn)化不斷加劇，往往導(dǎo)致腎臟組織纖維化程度上升[15]。但本研究結(jié)果示，高濾過(guò)組VEGF表達(dá)等級(jí)及陽(yáng)性率高于低濾過(guò)組，說(shuō)明隨著患者腎臟纖維化程度的加劇，其VEGF表達(dá)逐漸下降，與上述猜測(cè)存在矛盾，其原因可能為：隨著腎臟纖維化程度的加劇，損傷血管內(nèi)皮轉(zhuǎn)化能力及血管緊張度逐漸下降，且腎小球周圍正常的皮質(zhì)毛細(xì)血管網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)逐漸喪失[16-17]，導(dǎo)致VEGF的維持血管內(nèi)皮細(xì)胞生存、發(fā)展及功能的作用無(wú)法發(fā)揮，故VEGF逐漸降低。同時(shí)，Chen等[18]發(fā)現(xiàn)，結(jié)扎小鼠單側(cè)輸尿管后，其VEGF濃度表達(dá)明顯降低，而應(yīng)用藥物減輕腎臟纖維化程度后，其VEGF濃度有所恢復(fù)，印證了上述結(jié)論。

綜上所述，VEGF在PKD發(fā)生發(fā)展中扮演了重要角色，PKD發(fā)病早期，VEGF表達(dá)明顯上升，以促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞生成、誘導(dǎo)EMT過(guò)程，但隨著患者腎臟纖維化程度的加劇，VEGF表達(dá)逐漸下降。針對(duì)PKD患者病情，實(shí)施抑制VEGF表達(dá)或上調(diào)VEGF表達(dá)治療，有望為其病情進(jìn)展的延緩及預(yù)后質(zhì)量的改善提供新的思路。

參 考 文 獻(xiàn)

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