1. 西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院，四川 瀘州 646000；2. 四川省阿壩州藏醫(yī)醫(yī)院，四川 馬爾 513229；3. 四川省中醫(yī)藥科學(xué)院，四川 成都 610041

藏藥三味寬筋藤湯散，藏文音譯為“勒哲松湯”，由寬筋藤、渣馴膏、訶子肉三味藏藥組成[1]，劑型為湯散劑，具有祛風(fēng)除痹、消腫止痛、干黃水的作用。用于關(guān)節(jié)急慢性紅腫、脹痛、伸屈不利、四肢僵硬，痛風(fēng)、痹證[2]。痛風(fēng)是由于嘌呤代謝紊亂，血尿酸增高導(dǎo)致尿酸結(jié)晶沉積在關(guān)節(jié)及皮下組織而致的一種疾病。臨床上以高尿酸血癥、特征性急性關(guān)節(jié)炎反復(fù)發(fā)作、痛風(fēng)結(jié)石形成為特點(diǎn)[3]。痛風(fēng)急性發(fā)作期的藥物治療主要是抗炎鎮(zhèn)痛，臨床上常用秋水仙堿、非甾體抗炎藥和其他鎮(zhèn)痛藥，雖然療效較好，但也有相應(yīng)的毒副作用，如胃腸道不適、肝細(xì)胞損害、過敏反應(yīng)等[4]。近年來，藏醫(yī)藥發(fā)展迅速，對防治痛風(fēng)有獨(dú)特的療效和特色的治療方法，三味寬筋藤湯散原方載于藏醫(yī)藥圣典《四部醫(yī)典》，文中明確提出三味寬筋藤湯散可防治痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎，且在阿壩州藏醫(yī)醫(yī)院臨床應(yīng)用中日服用藥材量極小，療效佳，副作用小。目前未見藏藥三味寬筋藤湯散毒性和藥效的相關(guān)報(bào)道，故本試驗(yàn)對藏藥三味寬筋藤湯散進(jìn)行急性和抗炎鎮(zhèn)痛作用的研究，為進(jìn)一步的開發(fā)成醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑和臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 試驗(yàn)材料和儀器

1.1 試驗(yàn)藥物 三味寬筋藤湯散(由阿壩州藏醫(yī)醫(yī)院配制，批號(hào)：20190428)，棕黃色粉末，1 g粉末相當(dāng)于1 g原生藥，用前用0.5% CMC-Na溶液配制成相應(yīng)濃度混懸液備用，本實(shí)驗(yàn)劑量按原生藥g/kg計(jì)算。醋酸潑尼松，5 mg/片(浙江仙琚制藥股份有限公司，批號(hào)：170621)；阿司匹林腸溶片，100 mg/片(Bayer HealthCare Manufacturing S.r.l.，批號(hào)：BJ46000)；鹽酸嗎啡緩釋片，10 mg/片(太極集團(tuán)西南藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：17110006)。

1.2 試驗(yàn)試劑 羧甲基纖維素鈉(CMC-Na，批號(hào)2014102701，成都市科龍化工試劑廠)；生理氯化鈉溶液(批號(hào)L218021808，四川科倫藥業(yè)股份有限公司)；伊文思藍(lán)(批號(hào)F20020913，中國醫(yī)藥(集團(tuán))上海化學(xué)試劑公司)；冰醋酸(批號(hào)20130726，成都長聯(lián)化工試劑有限公司)。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物 KM種小鼠，SPF級，由四川省中醫(yī)藥科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，生產(chǎn)合格證為SCXK(川)2018-19。小鼠寄養(yǎng)于四川省中醫(yī)藥科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心屏障系統(tǒng)，使用許可證號(hào)SYXK(川)2018-100。分籠飼養(yǎng)，自由攝食、飲水，定期更換墊料，室溫22～25 ℃，濕度50 %±5 %，明暗各12 h。

1.4 儀器 JA1003A電子天平(上海精天電子儀器有限公司)；TGL-16臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司)；Varioskan Flash全波長多功能酶標(biāo)儀(美國Thermo公司)；RB-200型智能熱板儀(成都泰盟科技有限公司)。

2 方法

2.1 急性毒性試驗(yàn)[5-6]由預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知藏藥三味寬筋藤湯散其急性毒性作用較弱，故對其做最大耐受量測定。取18～22 g的KM小鼠40只，雌雄各半，實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水16 h，按體重隨機(jī)將動(dòng)物分為對照組、藏藥三味寬筋藤湯散組。藏藥三味寬筋藤湯散以最大濃度(0.4275 g原生藥/mL)，最大體積(0.4 mL/10 g)一天灌胃小鼠2次，間隔6 h，使其日用劑量達(dá)到34.2原生藥g/kg，對照組灌胃等體積0.5% CMC。觀察并記錄動(dòng)物在給藥后14d內(nèi)的中毒表現(xiàn)及死亡情況，于給藥前、給藥后第7d、第14d稱體重，試驗(yàn)結(jié)束后處死小鼠取心、肝、脾、肺、腎稱濕重并計(jì)算臟器指數(shù)。臟器指數(shù)=臟器重量(mg)/小鼠體重(g)×10。

2.2 三味寬筋藤湯散對小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響 SPF級KM種小鼠，♂，18 ～22 g，適應(yīng)性喂養(yǎng)后按體重隨機(jī)分為4組，分別為模型組、醋酸潑尼松10 mg/kg、三味寬筋藤湯散3.0原生藥g/kg、1.0原生藥g/kg。每日灌胃1次，連續(xù)7d，末次給藥后1h尾靜脈注射1%伊文思藍(lán)生理鹽水溶液(0.1 mL/10g)，10 min后腹腔注射1%冰醋酸生理鹽水溶液0.1 mL/10g，30 min后處死小鼠，腹腔注射生理鹽水4 mL/10g，輕揉腹部后剪開腹腔取出腹水，離心，于590 nm測定OD值[7]。

2.3 鎮(zhèn)痛試驗(yàn)

2.3.1 三味寬筋藤湯散對冰醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響 SPF級KM小鼠，♀♂各半，18～22 g。適應(yīng)性喂養(yǎng)后按體重隨機(jī)分為4組，分別為模型組、阿司匹林100 mg/kg，三味寬筋藤湯散3.0原生藥g/kg，三味寬筋藤湯散1.0原生藥g/kg，每日灌胃1次，連續(xù)7 d，末次給藥30 min后i.p.0.7%冰醋酸溶液0.1 mL/10g，隨即記錄小鼠的扭體次數(shù)，連續(xù)記錄15 min[8]。

2.3.2 三味寬筋藤湯散對小鼠熱刺激疼痛反應(yīng)的影響 SPF級KM小鼠，♀，18～22 g。適應(yīng)性喂養(yǎng)后進(jìn)行篩選，以痛閾值>5 s且<30 s為合格，記錄痛閾值。5 min后再次測定痛閾值，以兩次平均值作為正常痛閾值，據(jù)此將小鼠分為對照組、鹽酸嗎啡組10 mg/kg、三味寬筋藤湯散3.0原生藥g/kg，三味寬筋藤湯散1.0原生藥g/kg，每日灌胃1次，連續(xù)7 d，鹽酸嗎啡僅在第7 d給藥1次。末次給藥后0.5 h、1 h、2 h測定小鼠藥后痛閾值[9]。

3 結(jié)果

3.1 急性毒性

3.1.1 藏藥三味寬筋藤湯散對小鼠體重影響 小鼠在灌胃給予藏藥三味寬筋藤湯散34.2原生藥g/kg后14 d內(nèi)，未發(fā)現(xiàn)小鼠死亡，亦未見其他異常反應(yīng)。藏藥三味寬筋藤湯散組總體體重與對照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；但藏藥三味寬筋藤湯散雌性小鼠體重在給藥后7 d、14 d輕于對照組，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，藏藥三味寬筋藤湯散雄性小鼠體重與對照組比較無顯著性差異，結(jié)果見表1。

組別劑量/g原生藥/kg性別n給藥前/g7d/g14d/g對照組—♀1018.7±1.527.8±1.432.8±2.2♂1020.2±1.127.3±1.737.1±2.0♀♂2019.5±1.527.5±1.534.9±3.0三味寬筋藤湯散34.2♀1019.1±1.4 26.0±1.3** 30.8±1.6*♂1020.3±1.228.6±2.336.5±2.4♀♂2019.7±1.427.3±2.333.7±3.6

注：與對照組比較,*P<0.05，**P<0.01。

3.1.2 藏藥三味寬筋藤湯散對小鼠臟器影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)處死動(dòng)物，解剖肉眼檢查各組小鼠主要臟器均未發(fā)現(xiàn)肉眼可見異常，三味寬筋藤湯散34.2原生藥g/kg對小鼠心、肝、肺、腎等主要臟器指數(shù)均無明顯影響，與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；但可增加雄性小鼠脾臟指數(shù)，與對照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見表2。

組別劑量/g原生藥/kg性別n心肝脾肺腎對照組—♀1047.9±6.0466.9±36.944.6±9.474.7±20.7127.0±9.0♂1045.3±4.7517.7±27.542.9±4.874.3±31.5120.8±38.8♀♂2046.6±5.4492.3±41.043.7±7.374.5±25.9130.1±9.4三味寬筋藤湯散34.2♀1046.2±3.2478.9±48.339.0±6.576.6±27.2124.3±9.2♂1045.7±4.9556.0±53.248.6±5.2*74.8±33.0129.2±7.6♀♂2046.0±4.0517.5±63.343.8±7.675.7±29.5126.7±8.6

注：與對照組比較，*P<0.05。

3.2 三味寬筋藤湯散對小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響 三味寬筋藤湯散對醋酸致小鼠腹腔通透性升高具有一定的抑制作用，但作用較弱，與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見表3。

組別n劑量/g/kgOD值模型組12-0.15±0.05醋酸潑尼松120.10.09±0.05三味寬筋藤湯散123.00.11±0.05三味寬筋藤湯散121.00.12±0.03

3.3 鎮(zhèn)痛試驗(yàn)

3.3.1 三味寬筋藤湯散對冰醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響 三味寬筋藤湯散可減少醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的次數(shù)，但與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見表4。

組別n劑量/g/kg扭體次數(shù)模型組12-14.5±7.7阿司匹林120.16.8±7.4三味寬筋藤湯散123.07.7±9.8三味寬筋藤湯散121.09.7±11.2

3.3.2 三味寬筋藤湯散對小鼠熱刺激疼痛反應(yīng)的影響 三味寬筋藤湯散對熱刺激小鼠痛閾值無明顯影響，與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見表5。

組別n劑量/g/kg正常痛閾值/s給藥后痛閾值/s0.5 h1 h2 h模型組10-24.6±9.819.7±5.618.5±7.017.9±4.6鹽酸嗎啡100.0124.0±9.726.6±9.524.8±6.830.2±13.3*三味寬筋藤湯散103.024.7±7.820.1±9.016.8±6.621.7±15.1三味寬筋藤湯散101.024.7±7.319.9±7.422.8±7.020.3±12.2

注：與模型組比較，*P<0.05。

3 討論

痛風(fēng)(Gout)是由于嘌呤類物質(zhì)在體內(nèi)代謝紊亂，導(dǎo)致血液中尿酸水平升高，或(和)尿酸排泄減少而導(dǎo)致尿酸鹽結(jié)晶沉積于關(guān)節(jié)液和組織的炎癥性疾病[9]。痛風(fēng)的典型臨床表現(xiàn)是高尿酸血癥、急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、慢性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)石、關(guān)節(jié)畸形、腎實(shí)質(zhì)性病變等。痛風(fēng)急性發(fā)作期的藥物治療主要是抗炎鎮(zhèn)痛，臨床上常用秋水仙堿、非甾體抗炎藥和其他鎮(zhèn)痛藥。對于間歇期和慢性期的治療主要是降尿酸治療，使尿酸持續(xù)達(dá)到正常水平，治療藥物分為抑制尿酸生成藥(別嘌呤醇、非布司他等)、促進(jìn)尿酸排泄藥(丙磺舒、苯溴馬隆等)和尿酸酶(拉布立酶、培格洛替酶等)[10-11]。

藏藥三味寬筋藤湯散功效為祛風(fēng)除痹、消腫止痛、干黃水，臨床用于治療關(guān)節(jié)急慢性紅腫、脹痛、伸屈不利、四肢僵硬、痛風(fēng)及痹證等。原方載于藏醫(yī)藥經(jīng)典著作《四部醫(yī)典》，在阿壩州藏醫(yī)醫(yī)院常用于痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎，療效佳；且該方每日用量僅6 g，廉價(jià)有效，給患者帶來的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)較小，有較大的開發(fā)價(jià)值，因此課題組成員對藏藥三味寬筋藤的急性毒性試驗(yàn)以及抗炎鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行研究。

本試驗(yàn)研究測得小鼠一次性口服藏藥三味寬筋藤湯散的最大耐受量為34.2 g原生藥/kg，該劑量為臨床擬用劑量(6.0 g/d，0.1 g/kg)的342倍，提示藏藥三味寬筋藤湯散臨床用藥是比較安全的。同時(shí)具有一定抑制醋酸致小鼠腹腔通透性升高的作用，也有減少醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的趨勢，提示三味寬筋藤湯散具有一定的鎮(zhèn)痛、抗炎作用。