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摘要：通過人工方法結合Pentra 120血細胞分析儀檢測三種不同規(guī)格大菱鲆（Scophthalmus maximus）重要血液生理指標以期探討大菱鲆不同生長階段血液指標特點。結果顯示：350 g組大菱鲆粒細胞絕對值、中間細胞百分比、粒細胞百分比顯著高于70 g組（P<0.05）;70 g組大菱鲆淋巴細胞百分比顯著高于350 g組（P<0.05）;血紅蛋白含量、紅細胞壓積與魚體規(guī)格正相關且350 g組與20 g組間紅細胞壓積差異顯著（P<0.05）、血紅蛋白含量差異極顯著（P<0.01）;三種不同規(guī)格大菱鲆間血栓細胞系各項指標無顯著性差異。由此可知因大菱鲆紅細胞系及白細胞系部分血液指標在不同規(guī)格間存在著不同程度的差異難以得出正常參考范圍;血栓細胞系受魚體規(guī)格影響較小可作為大菱鲆血液常規(guī)指標基礎參考數據。

關鍵詞：大菱鲆（Scophthalmus maximus）;血液指標;血常規(guī)分析

大菱鲆（Scophthalmus maximus）屬硬骨魚綱鰈形目鲆科俗稱歐洲比目魚在中國又被稱為“多寶魚”[1]。 自1992年被引入我國以來因其生長速度快、易于進行大面積工廠化養(yǎng)殖等特點深受我國北方沿海養(yǎng)殖者的喜愛并迅速成為主要海水養(yǎng)殖品種[2]。近年來隨著養(yǎng)殖密度的不斷增大其病害問題也越來越嚴重為了更準確地監(jiān)測魚類的健康狀況對其血液生理生化指標的研究受到廣大學者的關注。

血液是人和動物機體中重要的組成部分魚體血液中各指標的動態(tài)變化反映著魚體自身機能或外界環(huán)境的改變對評價魚體健康、營養(yǎng)狀況及新陳代謝等都具有重要意義[3-4]。當魚體受到外界環(huán)境影響時其血液生理生化指標也會發(fā)生變化因此血細胞分析常被用來評價魚體的健康、營養(yǎng)狀況以及魚體對環(huán)境的適應情況等。近年來關于影響魚類血液生理指標變化因素的報道越來越多[5-6]但尚缺乏對大菱鲆血常規(guī)指標的分析。為了填補該空白本試驗針對三種不同規(guī)格大菱鲆的19項血常規(guī)指標進行檢測分析旨在探討大菱鲆不同生長階段血液指標的特點為其疾病診斷提供參考依據同時為魚類血液學、細胞學研究提供基礎資料。

1材料與方法

1.1試驗材料

取健康狀態(tài)下不同規(guī)格大菱鲆（20、70、350 g）各5尾為試驗用魚魚體規(guī)格分別為：20 g組：全長約10 cm平均體質量20 g;70 g組：全長約15 cm平均體質量70 g;350 g組：全長約28 cm平均體質量350 g。

1.2試驗方法

1.2.1血常規(guī)檢測自每尾試驗用魚尾靜脈各采取血液1 mL分別置于抗凝管中混勻用人工方法[7]結合Pentra 120血細胞分析儀檢測不同規(guī)格大菱鲆的紅細胞系、白細胞系、血栓細胞相關血常規(guī)指標。

1.2.2試驗數據處理將所測數據歸納整理用SPSS 22.0軟件求其均值和標準差并通過獨立性T檢驗分析各組間的差異顯著性以探討大菱鲆不同生長階段血液指標特點。

2結果

2.1三組不同規(guī)格大菱鲆白細胞相關血液指標

由表1可見白細胞系相關指標中350 g組粒細胞絕對值、中間細胞百分比、粒細胞百分比均顯著高于70 g組（P<0.05）350 g組淋巴細胞百分比顯著低于70 g組（P<0.05）其他指標組間差異均不顯著（P>0.05）。

2.2三組不同規(guī)格大菱鲆紅細胞相關血液指標

由表2可見350 g組大菱鲆血紅蛋白含量、紅細胞壓積顯著高于20 g組（P<0.05）其中350 g組與20 g組血紅蛋白含量差異極顯著（P<0.01）其余指標各組間無顯著性差異。

2.3三組不同規(guī)格大菱鲆血栓細胞相關血液指標

三組不同規(guī)格大菱鲆血栓細胞系組間各項指標均無顯著性差異（P>0.05）詳見表3。

3討論

3.1大菱鲆白細胞相關血液指標分析

白細胞是魚體主要的免疫細胞與機體的防御功能密切相關隨著魚體增長或外界環(huán)境的變化白細胞數目也在不斷變化。孟繁伊等[8]研究表明1～4齡花羔紅點鮭體內白細胞數量逐漸遞增。此外孟繁伊等[8]還發(fā)現(xiàn)1齡鯉血液中首次出現(xiàn)嗜中性粒細胞而在2齡鯉血液中才出現(xiàn)嗜酸性粒細胞。周雪瑩等[9]表明大菱鲆的粒細胞中只含有嗜中性粒細胞不含有嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞;本次試驗結果顯示350 g組粒細胞絕對值、粒細胞百分比均顯著高于70 g組（P<0.05）而與20 g組無明顯差異（P>0.05）這可能就是因為不同種類的粒細胞在大菱鲆體內出現(xiàn)的時期不同所致但本次試驗所用血細胞分析儀為三分型未對粒細胞進行詳細分類因此具體原因仍有待探索。本次檢測結果中出現(xiàn)了三組不同規(guī)格大菱鲆淋巴細胞絕對值和中間細胞絕對值組間差異不顯著（P<0.05）但350 g組與70 g組淋巴細胞百分比與中間細胞百分比卻差異顯著的現(xiàn)象（P>0.05）這可能是因為受白細胞系內其它指標的影響導致不同組間淋巴細胞與中間細胞在所有白細胞中出現(xiàn)的比列差異顯著也可能是因為魚體尚處于發(fā)育階段機體還未成熟細胞受分裂周期的影響在數量上浮動較大所致。

3.2大菱鲆紅細胞相關血液指標分析

紅細胞是魚體內含量最多的細胞。臧坤等[10]表明牙鲆體內紅細胞數顯著高于白細胞數。本次試驗結果顯示不同規(guī)格大菱鲆體內紅細胞的數量亦高于血栓細胞和白細胞。由此可見不同品種魚類的血常規(guī)指標存在相似性。血液中紅細胞對氧氣的運輸主要依托血紅蛋白來完成紅細胞的數量與血液攜帶氧氣的能力正相關[11-12]。本次試驗結果顯示350 g組血紅蛋白含量極顯著高于20 g組（P<0.01）這可能是因為體格較大的大菱鲆體內氣體交換量也大為了提高載氧效率機體會產生相對較多的紅細胞和血紅蛋白以保證呼吸運動正常進行。紅細胞壓積是影響血液黏度最主要的因素紅細胞壓積越大其全血黏度值越高[13-14]魚體在游動時血液循環(huán)的速度與血液流暢度密切相關黏稠的血液流暢度往往較低。本次實驗結果表明隨著魚體規(guī)格的增大紅細胞壓積逐漸變大且350 g組紅細胞壓積顯著高于20 g組（P<0.05）這或許就是規(guī)格較大的魚體沒有規(guī)格較小的魚體喜歡游動的原因。

3.3大菱鲆血栓細胞相關血液指標分析

血栓細胞的歸類問題一直存在爭議袁仕取等[15]認為血栓細胞應歸為白細胞的一類尾崎久雄[16]則認為血栓細胞應單獨歸為一類。為了更清晰地表述各組數據之間的差異本次采用尾崎久雄的分類方法將血栓細胞系單獨分析。

試驗所用三種不同規(guī)格大菱鲆血栓細胞相關血液指標差異均不顯著（P>0.05）表明血栓細胞系在魚體生長發(fā)育過程中相對穩(wěn)定各項指標受魚體規(guī)格影響較小本試驗結果可作為大菱鲆臨床診斷中血常規(guī)參考依據。此外血栓細胞的數目、壓積以及平均血栓細胞體積與魚體規(guī)格呈現(xiàn)正相關狀態(tài)這可能是因為血栓細胞數量以及壓積必須隨著魚體規(guī)格增大而加大以保證機體正常的抗凝血作用;而血栓細胞寬度隨著魚體規(guī)格增大反而降低或許是因為血栓細胞數量增多所致。

3.4不同規(guī)格大菱鲆血常規(guī)的綜合分析

三組不同規(guī)格大菱鲆白細胞系、紅細胞系中部分指標受魚體規(guī)格影響較大不能形成確切的血常規(guī)參考值血栓細胞系受魚體規(guī)格影響較小可考慮將此試驗結果作為建立大菱鲆血常規(guī)正常值的參考依據。但要注意的是在魚體生長發(fā)育的過程中不同種類的細胞發(fā)揮著不同的作用受外界環(huán)境的影響或機體功能的改變血液指標也會發(fā)生相應的改變如在不同的水溫、養(yǎng)殖密度及營養(yǎng)狀況下測得的魚體內各項血液指標也不同由于本試驗選用大菱鲆的規(guī)格、數量均較少且未將季節(jié)、飼養(yǎng)條件、養(yǎng)殖密度等其它因素參考在內因此容易出現(xiàn)偶然性的結果所以本次試驗結果也就僅可作為建立大菱鲆血常規(guī)的參考依據而不能算得出其確切范圍。由此可見建立大菱鲆血常規(guī)正常參考值任重而道遠還需廣大學者共同努力擴大魚體規(guī)格加大樣本數量將季節(jié)、飼養(yǎng)環(huán)境等現(xiàn)實因素都考慮進去以此建立出一套健全的大菱鲆血常規(guī)正常值參考范圍。

參考文獻：

[1] 孟慶聞，蘇錦祥，繆學祖.魚類分類學[M].北京：中國農業(yè)出版社，1995：941-955.

[2] 周玉，郭文場，楊振國.魚類血細胞的研究進展[J].動物學雜志，2001，36（6）：55-57.

[3] Rombout J H W M，Huttenhuis H B T，Picchietti S.Phylogeny and ontogeny of fish leucocytes[J].Fish and Shellfish Immunology，2005，19（5）：441-455.

[4] Garcia F，Pilarski F，Onakae M.Hematology of Piaractus mesopotamicus fed diets supplemented with vitamins C and E，challenged by Aeromonas hydrophila[J].Aquaculture，2007，271（1-4）：39-46.

[5] 聶小寶，吳波，侯夢然，等.無水保活條件下不同溫度對鱘魚生理生化指標的影響[J].食品科技，2017，42（12）：147-152.

[6] 范超杰，熊建利，呂成才，等.飼料中殼寡糖含量對黃河鯉魚幼魚血液參數的影響[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2019（09）：161-164.

[7] 桂遠明.水產動物機能學實驗[M].北京：中國農業(yè)出版社，2004：167-184.

[8] 孟繁伊，黃權，郝鳳奇.不同年齡花羔紅點鮭肌肉成分和血液指標的比較研究[J].中國水產科學，2009，16（01）：113-119.

[9] 周雪瑩，崔龍波，劉冬，等.養(yǎng)殖大菱鲆血細胞形態(tài)和相關生理指標的測定[J].魯東大學學報，2007，23（4）：366-370.

[10] 臧坤，徐永江，柳學周，等.兩種養(yǎng)殖條件下牙鲆的血液生理生化指標比較分析[J].漁業(yè)科學進展，2013，34（05）：36-42.

[11] 周賢君，彭坤輝，梁正其，等.青田田魚血液學初步研究[J].凱里學院學報，2010，28（03）：50-51.

[12] 陳剛，周暉，張健東.軍曹魚血液指標及血細胞發(fā)生的觀察[J].水生生物學報，2005，29（5）：564-570.

[13] 孫朝輝，徐炳燕，張衛(wèi)云，等.不同方法測定紅細胞壓積對血液流變學部分指標的影響[J].血液流變學雜志，2006，16（2）：31-32.

[14] 田鵬鵬，朱麗莎，馬青，等.紅細胞壓積與年齡以及紅細胞沉降率的關系[J].國際檢驗醫(yī)學雜志，2017（2）：209-210.

[15] 袁仕取，張永安.鱖魚外周血細胞顯微和超顯微結構的觀察[J].水生生物學報.1998，22（1），39-47.

[16] 尾崎久雄.魚類血液與循環(huán)生理[M].許學龍，等譯.上海：上?？茖W技術出版社，1982：15-66.

Abstract：In order to explore the characteristics of blood indexes in different growth stages of Scophthalmus maximus （turbot），the blood routine analysis of turbot was performed by manual testing and Pentra120 blood analyzer.The results showed that there were significant differences in the absolute value of granulocytes，percentage of lymphocytes，intermediate cells and granulocytes between 70 g group and 350 g group （P<0.05），the hematokrit were significantly different （P<0.05） and hemoglobin was different （P<0.01） between 20 g group and 350 g group，but there was no significant difference among the other 13 indexes.The result indicated that： some leukocyte-related and RBC-related blood indices of turbot were unstable，it was difficult to obtain normal reference range，but thrombus cell-related blood indices were relatively stable，could be used as the basis of turbots normal blood indices.

Key words：Scophthalmus maximus;blood index;blood routine analysis

（收稿日期：2020-04-27）