中華人民共和國國家衛(wèi)生健康委員會(huì)

1 范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了腦脊液、漿膜腔積液、關(guān)節(jié)腔積液、糞便、精液和陰道分泌物等體液標(biāo)本臨床檢驗(yàn)的技術(shù)要求。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于開展上述類型體液標(biāo)本檢測的臨床實(shí)驗(yàn)室。

2 腦脊液檢驗(yàn)技術(shù)要求

2.1 標(biāo)本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)和貯存

2.1.1 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)與臨床共同討論并制訂腦脊液標(biāo)本采集和處理的標(biāo)準(zhǔn)操作程序。

2.1.2 臨床醫(yī)生應(yīng)在申請(qǐng)單上注明腦脊液標(biāo)本采集部位(如腰椎或腦室)的相關(guān)信息。

2.1.3 腦脊液標(biāo)本采集宜使用無菌試管(用于細(xì)胞學(xué)檢查的標(biāo)本不宜使用玻璃材質(zhì)的容器)，若能采集足量標(biāo)本，應(yīng)將其分裝至3～4支試管，每管宜取3～5 mL，一般無需使用抗凝劑。

2.1.4 第1管用于化學(xué)和免疫學(xué)檢查(如蛋白質(zhì)、葡萄糖等)，第2管用于微生物學(xué)檢查，第3管用于細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類計(jì)數(shù)。如需要做其它檢查(細(xì)胞病理學(xué)檢查等)，宜采集第4管標(biāo)本。若第1管混有穿刺出血，不可用于以蛋白質(zhì)檢查作為主要依據(jù)的疾病診斷(如多發(fā)性硬化癥)。

2.1.5 若無法采集足量標(biāo)本，可不進(jìn)行分裝，由醫(yī)生決定檢查項(xiàng)目；若需要進(jìn)行微生物學(xué)檢查，宜優(yōu)先進(jìn)行，再盡快進(jìn)行其他檢查。

2.1.6 腦脊液標(biāo)本應(yīng)在室溫條件下盡快運(yùn)送，細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類計(jì)數(shù)宜在1 h內(nèi)完成檢查，以免細(xì)胞破損。只有用于蛋白質(zhì)和核酸分析的標(biāo)本，可貯存于冷凍條件下(-20℃以下)。

2.1.7 腦脊液微生物學(xué)檢查標(biāo)本不可冷藏，在室溫條件下立即送檢或在患者床旁接種。

2.2 理學(xué)檢查 腦脊液理學(xué)檢查主要包括顏色、透明度和凝固性等。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)規(guī)定腦脊液理學(xué)檢查指標(biāo)描述和報(bào)告的規(guī)范用語。

2.3 化學(xué)和免疫學(xué)檢查

2.3.1 腦脊液化學(xué)檢查主要包括葡萄糖、蛋白質(zhì)、氯化物、酶學(xué)測定和蛋白電泳等，免疫學(xué)檢查主要包括免疫球蛋白、髓鞘堿性蛋白測定等。

2.3.2 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)注意各項(xiàng)目不同原理檢測方法的靈敏度和特異度差異，選擇適宜的方法開展檢測。2.3.3 進(jìn)行腦脊液葡萄糖、白蛋白和免疫球蛋白測定時(shí)，宜同時(shí)檢測血清中的相應(yīng)物質(zhì)，計(jì)算腦脊液/血清葡萄糖比值、腦脊液/血清白蛋白商(Qalb)、腦脊液/血清IgG商(QIgG)及IgG指數(shù)(即QIgG與Qalb比值)。

2.4 細(xì)胞學(xué)檢查

2.4.1 手工法細(xì)胞計(jì)數(shù)

2.4.1.1 宜使用標(biāo)注容積的血細(xì)胞定量計(jì)數(shù)板進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，包括細(xì)胞總數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、有核細(xì)胞計(jì)數(shù)和有核細(xì)胞分類計(jì)數(shù)。

2.4.1.2 外觀正常的標(biāo)本無需稀釋，渾濁和血性標(biāo)本需進(jìn)行1∶10～1∶200倍稀釋，稀釋倍數(shù)甚至更高(需要時(shí))。進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)可使用等滲鹽水稀釋標(biāo)本；進(jìn)行有核細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，可使用3%冰醋酸對(duì)標(biāo)本進(jìn)行處理。

2.4.1.3 細(xì)胞計(jì)數(shù)按以下程序進(jìn)行。a)將標(biāo)本充分混勻，充液前可用旋轉(zhuǎn)式攪拌器混勻(時(shí)間不能超過2～5 min)或手工顛倒混勻10～15次，避免過度震蕩造成細(xì)胞破損，也不能產(chǎn)生氣泡。b)分別吸取少量充分混勻的標(biāo)本，充入計(jì)數(shù)板兩側(cè)的計(jì)數(shù)池(應(yīng)確保計(jì)數(shù)板潔凈)，靜置5～10 min(時(shí)間長短取決于細(xì)胞沉淀的效果)。c)使用低倍鏡(10×)瀏覽細(xì)胞分布情況，細(xì)胞分布應(yīng)均勻(每個(gè)大方格內(nèi)細(xì)胞數(shù)量相差宜不超過10個(gè))，細(xì)胞應(yīng)無重疊，否則宜重新充液。d)在高倍鏡(40×)下選擇合適的區(qū)域盡快進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。每個(gè)計(jì)數(shù)池細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū)域的確定原則是：若初步估計(jì)9個(gè)大方格中細(xì)胞數(shù)少于200個(gè)，則計(jì)數(shù)9個(gè)大方格(計(jì)數(shù)區(qū)域相當(dāng)于9 mm2)；若估計(jì) 9個(gè)大方格中細(xì)胞數(shù)大于200個(gè)，則計(jì)數(shù)4個(gè)角的大方格(計(jì)數(shù)區(qū)域相當(dāng)于4 mm2)；若估計(jì)1個(gè)大方格中細(xì)胞數(shù)大于200個(gè)，則計(jì)數(shù)中央大方格內(nèi)4個(gè)角和中央1個(gè)中方格(計(jì)數(shù)區(qū)域相當(dāng)于0.2 mm2)。計(jì)數(shù)壓線細(xì)胞時(shí)，應(yīng)遵循“數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右”的原則。

2.4.1.4 紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和有核細(xì)胞計(jì)數(shù)宜在同一計(jì)數(shù)池中完成，取兩個(gè)計(jì)數(shù)池計(jì)數(shù)結(jié)果的均值進(jìn)行報(bào)告。

2.4.2 儀器法細(xì)胞計(jì)數(shù) 儀器法細(xì)胞計(jì)數(shù)的要求見附錄A。

2.4.3 細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查

2.4.3.1 應(yīng)在標(biāo)本采集后4 h內(nèi)完成細(xì)胞涂片，若超過4 h，結(jié)果報(bào)告時(shí)宜標(biāo)注“細(xì)胞分類計(jì)數(shù)結(jié)果可能不可靠”。

2.4.3.2 宜使用細(xì)胞離心涂片機(jī)(細(xì)胞甩片機(jī))制備涂片進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查，滴加標(biāo)本前先向甩片機(jī)的標(biāo)本室中加入1滴22%白蛋白溶液(無菌)，可增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)載玻片的粘附性。

2.4.3.3 涂片制備后應(yīng)置于室溫條件自然晾干，宜進(jìn)行改良瑞氏染色。

2.4.3.4 進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)檢查時(shí)，應(yīng)能正確識(shí)別：成熟紅細(xì)胞、有核紅細(xì)胞；中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞；淋巴細(xì)胞、反應(yīng)性淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞；單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞；腦室內(nèi)襯細(xì)胞、柔腦膜細(xì)胞；惡性腫瘤細(xì)胞(原始細(xì)胞、淋巴瘤細(xì)胞、非造血系統(tǒng)腫瘤細(xì)胞等)；細(xì)菌、真菌和寄生蟲等。

2.4.3.5 應(yīng)對(duì)有核細(xì)胞(包括各類造血細(xì)胞、內(nèi)襯細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和非典型細(xì)胞)進(jìn)行分類計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)結(jié)果以百分比報(bào)告。細(xì)胞類型無法確定時(shí)，可將其歸入“非典型細(xì)胞”，并在報(bào)告中加以描述。

2.4.3.6 懷疑惡性腫瘤時(shí)，應(yīng)全片查找腫瘤細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)疑似腫瘤細(xì)胞時(shí)應(yīng)及時(shí)通知臨床進(jìn)一步做細(xì)胞病理學(xué)檢查。

2.5 病原學(xué)檢查

2.5.1 涂片檢查 對(duì)混濁或膿性腦脊液可直接涂片，染色鏡檢。對(duì)無色透明或無明顯混濁的腦脊液，應(yīng)使用細(xì)胞離心涂片機(jī)(細(xì)胞甩片機(jī))離心。將腦脊液標(biāo)本離心取沉淀物進(jìn)行涂片，經(jīng)革蘭染色查找肺炎鏈球菌、葡萄球菌和鏈球菌等，亞甲藍(lán)染色查找腦膜炎奈瑟菌，抗酸染色查找結(jié)核分枝桿菌，墨汁染色查找隱球菌。對(duì)于疑似寄生蟲感染的患者，應(yīng)注意查找吸蟲卵、阿米巴滋養(yǎng)體和絳蟲囊尾蚴等。

2.5.2 病原體培養(yǎng) 選擇合適的培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件進(jìn)行普通細(xì)菌、苛養(yǎng)菌、結(jié)核分枝桿菌或真菌培養(yǎng)，臨床懷疑腦膿腫時(shí)宜進(jìn)行厭氧菌培養(yǎng)。所有進(jìn)行培養(yǎng)的腦脊液宜同時(shí)進(jìn)行病原菌的涂片檢查。2.5.3 抗原檢測 可檢測腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌、隱球菌等病原菌抗原，檢測結(jié)果宜與涂片檢查和病原培養(yǎng)結(jié)果一起解釋，腦脊液隱球菌抗原陽性有確診意義；其他抗原陽性是重要診斷提示，宜結(jié)合病史、臨床表現(xiàn)、腦脊液其他檢查(細(xì)胞學(xué)、涂片和培養(yǎng)、化學(xué)等)綜合判斷。

2.5.4 核酸檢測 必要時(shí)，實(shí)驗(yàn)室可采用PCR等分子生物學(xué)方法檢測結(jié)核分枝桿菌、腦膜炎奈瑟菌等病原菌核酸。

3 漿膜腔積液檢驗(yàn)技術(shù)要求

3.1 標(biāo)本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)和貯存

3.1.1 漿膜腔積液包括胸水、腹水、心包腔積液等，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)與臨床共同制訂標(biāo)本采集和處理的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，并向臨床提供正確的標(biāo)本采集容器和抗凝劑(必要時(shí))。不同檢查項(xiàng)目的標(biāo)本采集要求見表1。

3.1.2 標(biāo)本應(yīng)在室溫條件下盡快送檢；細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類計(jì)數(shù)的標(biāo)本應(yīng)盡快檢測，若無法及時(shí)檢測，染色后的標(biāo)本置于2～8℃條件下保存，宜48 h內(nèi)完成檢測。

3.2 理學(xué)檢查 漿膜腔積液理學(xué)檢查主要包括顏色、透明度和凝固性等。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)規(guī)定漿膜腔積液理學(xué)檢查指標(biāo)描述和報(bào)告的規(guī)范用語。

表1 漿膜腔積液標(biāo)本采集要求

3.3 化學(xué)和免疫學(xué)檢查

3.3.1 漿膜腔積液化學(xué)檢查主要包括蛋白質(zhì)、乳酸、葡萄糖和酶學(xué)測定等；免疫學(xué)檢查主要包括腫瘤標(biāo)志物、免疫球蛋白測定等。

3.3.2 葡萄糖測定應(yīng)在標(biāo)本采集后1 h內(nèi)完成，無法及時(shí)檢測的標(biāo)本應(yīng)用氟化鈉抗凝管采集；其他化學(xué)檢查宜在2 h內(nèi)完成；宜同時(shí)檢測血清標(biāo)本中的相應(yīng)物質(zhì)并進(jìn)行比較。

3.3.3 嚴(yán)重化膿標(biāo)本不宜進(jìn)行pH檢測。

3.4 細(xì)胞學(xué)檢查

3.4.1 漿膜腔積液細(xì)胞學(xué)檢查主要包括細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類計(jì)數(shù)等。

3.4.2 細(xì)胞數(shù)量過多、渾濁或血性標(biāo)本宜用等滲鹽水進(jìn)行稀釋；有凝塊的標(biāo)本不能用于細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類計(jì)數(shù)，但可用于細(xì)胞病理學(xué)檢查，需先輕輕攪動(dòng)凝塊釋出細(xì)胞并進(jìn)行洗滌處理。

3.4.3 細(xì)胞計(jì)數(shù)方法可參見2.4.1.3。

3.4.4 細(xì)胞分類計(jì)數(shù)宜采用細(xì)胞離心法制備涂片，應(yīng)先洗滌細(xì)胞，以提高涂片中的細(xì)胞數(shù)量并保持細(xì)胞形態(tài)。涂片自然干燥，宜使用改良瑞氏染色方法染色后進(jìn)行細(xì)胞分類計(jì)數(shù)，發(fā)現(xiàn)可疑惡性細(xì)胞時(shí)，應(yīng)及時(shí)通知臨床送細(xì)胞病理學(xué)檢查；發(fā)現(xiàn)結(jié)晶時(shí)，應(yīng)在報(bào)告中注明。

3.5 病原學(xué)檢查 懷疑感染時(shí)，所有標(biāo)本應(yīng)進(jìn)行革蘭染色涂片和培養(yǎng)。懷疑厭氧菌感染，則加做厭氧菌培養(yǎng)；腹水、肝膿腫穿刺液宜常規(guī)進(jìn)行厭氧菌培養(yǎng)。懷疑寄生蟲感染時(shí)，應(yīng)將標(biāo)本離心后取沉渣進(jìn)行涂片，宜使用改良瑞氏染色方法進(jìn)行檢查，查找有無微絲蚴、包蟲棘球蚴頭節(jié)和小鉤、阿米巴滋養(yǎng)體等。

4 關(guān)節(jié)腔積液檢驗(yàn)技術(shù)要求

4.1 標(biāo)本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)和貯存

4.1.1 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)與臨床共同制訂關(guān)節(jié)腔積液標(biāo)本采集和處理的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，并向臨床提供正確的標(biāo)本采集容器和抗凝劑。

4.1.2 采集多管標(biāo)本時(shí)，第1管應(yīng)使用無抗凝劑試管，宜采集4 ～5 mL，并觀察是否凝固，離心取上清液做化學(xué)和免疫學(xué)檢查(如葡萄糖、白蛋白和脂類，類風(fēng)濕因子和補(bǔ)體測定等)；第2管應(yīng)使用肝素鈉(25 U/ mL)或EDTA溶液抗凝，用于細(xì)胞計(jì)數(shù)、分類計(jì)數(shù)和結(jié)晶鑒定時(shí)宜采集1～3 mL，如同時(shí)做細(xì)胞病理學(xué)檢查時(shí)宜采集4～5 mL，使用肝素鋰、草酸鹽或EDTA粉末抗凝，可能影響結(jié)晶檢查結(jié)果；第3管應(yīng)使用肝素(25 U/mL)抗凝、也可以采用多聚茴香腦磺酸鈉(SPS)抗凝劑或無抗凝劑試管，宜采集4～5 mL，用于微生物學(xué)檢查。

4.1.3 當(dāng)標(biāo)本量較少難以完成所有檢查時(shí)，應(yīng)及時(shí)與臨床進(jìn)行溝通，不宜拒收標(biāo)本。

4.1.4 標(biāo)本應(yīng)在室溫條件下盡快送檢并完成檢查。

4.2 理學(xué)檢查 關(guān)節(jié)腔積液理學(xué)檢查主要包括顏色、透明度、黏稠度及凝固性等。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)規(guī)定關(guān)節(jié)腔積液理學(xué)檢查指標(biāo)的描述和報(bào)告的規(guī)范用語。

4.3 化學(xué)和免疫學(xué)檢查

4.3.1 關(guān)節(jié)腔積液化學(xué)檢查主要包括葡萄糖、尿酸、乳酸、脂類和蛋白質(zhì)測定等，免疫學(xué)檢查主要包括自身抗體和類風(fēng)濕因子等；進(jìn)行化學(xué)和免疫學(xué)檢查時(shí)宜同時(shí)檢測血清標(biāo)本中的相應(yīng)物質(zhì)并進(jìn)行比較。

4.3.2 葡萄糖測定應(yīng)在1 h內(nèi)完成，無法及時(shí)檢測的標(biāo)本應(yīng)使用氟化鈉抗凝管采集。

4.4 細(xì)胞學(xué)和結(jié)晶檢查

4.4.1 標(biāo)本處理

4.4.1.1 關(guān)節(jié)腔積液較為粘稠，宜使用等滲鹽水或透明質(zhì)酸酶緩沖液對(duì)標(biāo)本進(jìn)行處理，如每毫升關(guān)節(jié)腔積液加透明質(zhì)酸酶400單位，置于37℃孵 育10 min。

4.4.1.2 細(xì)胞數(shù)量過多、渾濁或血性標(biāo)本宜用等滲鹽水進(jìn)行稀釋；進(jìn)行有核細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，可使用低滲性鹽水(0.3%)破壞紅細(xì)胞，但不可使用乙酸，以免形成黏蛋白凝塊影響鏡檢。

4.4.2 涂片檢查 宜使用細(xì)胞離心法制備濕片和染色涂片(涂片自然晾干后用甲醇固定至少5 min)，宜使用改良瑞氏染色方法，進(jìn)行細(xì)胞學(xué)和結(jié)晶檢查。宜使用光學(xué)顯微鏡的暗視野或偏振光顯微鏡進(jìn)行結(jié)晶檢查(如尿酸鹽結(jié)晶、焦磷酸鈣結(jié)晶)，應(yīng)注意區(qū)分塵粒、劃痕、碎片與病理性結(jié)晶。

4.4.3 細(xì)胞計(jì)數(shù) 細(xì)胞計(jì)數(shù)方法同腦脊液細(xì)胞計(jì)數(shù)，宜在標(biāo)本采集后1 h內(nèi)完成檢測。關(guān)節(jié)腔積液標(biāo)本較難混勻，可用旋轉(zhuǎn)式攪拌器混勻5～ 10 min，避免過度震蕩造成細(xì)胞破損。

4.5 病原學(xué)檢查 應(yīng)作為關(guān)節(jié)腔積液常規(guī)檢查項(xiàng)目，將標(biāo)本離心后取沉淀進(jìn)行革蘭染色涂片檢查，查找有無致病菌。

必要時(shí)，根據(jù)臨床表現(xiàn)選擇合適的培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)菌或真菌培養(yǎng)。

5 糞便檢驗(yàn)技術(shù)要求

5.1 標(biāo)本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)和貯存

5.1.1 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)向患者提供標(biāo)本采集說明(口頭或書面)和符合要求的標(biāo)本采集容器。應(yīng)使用一次性、有蓋、可密封、潔凈、干燥、不滲漏、不易破損、開口和容量適宜的容器。用于細(xì)菌培養(yǎng)檢查的標(biāo)本應(yīng)使用無菌容器，且有明顯標(biāo)識(shí)。

5.1.2 應(yīng)盡可能選取附著黏液、膿液、血液的新鮮異常糞便(宜多個(gè)部位留取，蠶豆大小)，并避免尿液和異物(如衛(wèi)生紙、花露水、強(qiáng)力清潔劑、除臭劑等)污染。采集后的標(biāo)本宜在1 h內(nèi)(夏季)或2 h內(nèi)(冬季)送檢。

5.1.3 糞便隱血試驗(yàn)宜連續(xù)3 d每天送檢標(biāo)本(適用時(shí))，每次采集糞便2個(gè)部位的標(biāo)本送檢(置于同一標(biāo)本容器中)。不可使用直腸指檢標(biāo)本。

5.1.4 進(jìn)行細(xì)菌檢查的標(biāo)本應(yīng)在發(fā)病初期和使用抗生素前采集，腹瀉患者標(biāo)本應(yīng)在急性期(3 d內(nèi))采集。進(jìn)行厭氧菌培養(yǎng)的標(biāo)本應(yīng)盡快送檢，必要時(shí)在床旁接種。

5.1.5 查原蟲滋養(yǎng)體的標(biāo)本應(yīng)留取含膿血的稀軟糞便，排便后立即檢查，冬季需要采取保溫措施送檢；查蟯蟲卵時(shí)，在子夜或早晨排便前用肛拭子在肛周皺襞處采集標(biāo)本；查血吸蟲毛蚴時(shí)，應(yīng)至少采集30 g新鮮糞便；查寄生蟲蟲體及蟲卵計(jì)數(shù)時(shí)，應(yīng)收集24 h糞便。

5.2 理學(xué)檢查 糞便理學(xué)檢查至少包括糞便顏色和性狀等。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)規(guī)定糞便理學(xué)檢查指標(biāo)描述和報(bào)告的規(guī)范用語。

5.3 化學(xué)和免疫學(xué)檢查

5.3.1 糞便隱血試驗(yàn)

5.3.1.1 糞便隱血試驗(yàn)檢測方法有化學(xué)法和免疫法，不同方法的靈敏度和特異性存在差異，實(shí)驗(yàn)室在選用新方法前應(yīng)明確其分析性能。當(dāng)一種方法的檢測結(jié)果與臨床不符時(shí)，宜采用另一種方法進(jìn)行驗(yàn)證。

5.3.1.2 應(yīng)按試劑說明書要求的比例使用稀釋液或等滲鹽水對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋。當(dāng)明顯柏油樣標(biāo)本的檢測結(jié)果呈陰性時(shí)，應(yīng)調(diào)整稀釋倍數(shù)后再次進(jìn)行檢測。

5.3.1.3 使用試帶進(jìn)行糞便隱血試驗(yàn)，試帶應(yīng)在密閉、防潮的條件下保存，在有效期內(nèi)使用。

5.3.1.4 檢測臨床標(biāo)本前應(yīng)至少進(jìn)行陰性和弱陽性水平的室內(nèi)質(zhì)控并保證結(jié)果在控。應(yīng)按說明書規(guī)定的時(shí)間和標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行結(jié)果判斷。

5.3.2 其他檢查 包括糞膽素、糞膽原和脂肪測定、病原體的免疫學(xué)檢查(如艱難梭菌抗原、病毒抗體檢測)等。

5.4 細(xì)胞學(xué)和病原學(xué)檢查

5.4.1 涂片檢查

5.4.1.1 應(yīng)使用潔凈的載玻片和新鮮等滲鹽水制備標(biāo)本涂片，涂片應(yīng)厚薄適宜，以能透視紙上字跡為宜，加蓋玻片。必要時(shí)進(jìn)行染色(如白細(xì)胞檢查時(shí)宜使用亞甲藍(lán)染色)。

5.4.1.2 應(yīng)按“城垛”式順序，先用低倍鏡觀察全片，再用高倍鏡觀察10個(gè)以上視野，查找各種細(xì)胞、寄生蟲卵、真菌、細(xì)菌和原蟲等病理成分。

5.4.1.3 查見寄生蟲卵時(shí)，應(yīng)描述蟲卵的形態(tài)特征。遇到可疑蟲卵或罕見蟲卵時(shí)應(yīng)請(qǐng)上級(jí)檢驗(yàn)人員復(fù)核，或送至技術(shù)水平更高的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn)。使用集卵法(適用于各種蟲卵)、飽和鹽水漂浮法(適用于檢出鉤蟲卵)、離心沉淀法或自然沉淀法處理標(biāo)本可提高寄生蟲卵的檢出率。

5.4.1.4 結(jié)果報(bào)告應(yīng)報(bào)告有無病理成分，如各種細(xì)胞、寄生蟲及蟲卵、真菌和原蟲等，細(xì)胞以“最低數(shù)～最高數(shù)/HP”進(jìn)行報(bào)告。

5.4.2 病原體培養(yǎng) 根據(jù)臨床表現(xiàn)，針對(duì)懷疑感染病原菌的種類選擇相應(yīng)的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件進(jìn)行糞便微生物學(xué)檢查。

5.5 糞便自動(dòng)化檢查

5.5.1 在儀器用于臨床標(biāo)本檢測前，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)其性能進(jìn)行驗(yàn)證，包括(但不限于)精密度(適用時(shí))、與手工方法檢查結(jié)果的可比性(符合率)、有形成分檢出率等。

5.5.2 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制訂手工復(fù)檢的規(guī)則并進(jìn)行驗(yàn)證。

6 精液檢驗(yàn)技術(shù)要求

6.1 標(biāo)本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)和貯存

6.1.1 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)向患者提供精液標(biāo)本采集說明和符合要求的標(biāo)本采集容器。標(biāo)本采集應(yīng)使用清潔干燥、對(duì)精子無毒性、廣口的玻璃或塑料容器，進(jìn)行微生物培養(yǎng)的標(biāo)本應(yīng)保持無菌。

6.1.2 標(biāo)本采集后應(yīng)記錄采集方法、采集時(shí)間、標(biāo)本完整性及禁欲時(shí)間等信息。

6.1.3 標(biāo)本采集后應(yīng)在室溫條件下立即送檢。

6.1.4 標(biāo)本采集后1 h內(nèi)，評(píng)估精液液化狀況和外觀、測量精液體積，制備濕片并進(jìn)行精子活力和精子存活率檢查，制備精液涂片(用于評(píng)估精子形態(tài))，稀釋精液并進(jìn)行精子計(jì)數(shù)，進(jìn)行混合抗球蛋白反應(yīng)試驗(yàn)等檢查(需要時(shí))，離心處理精液(用于化學(xué)檢查)；采集后3 h內(nèi)，進(jìn)行微生物學(xué)檢查；采集后4 h內(nèi)，完成精液涂片固定、染色和精子形態(tài)檢查，進(jìn)行精液化學(xué)檢查。

6.1.5 對(duì)于無法液化的精液標(biāo)本，可采用機(jī)械混勻(如加入適量磷酸鹽緩沖液，使用移液器輕輕反復(fù)吹打)或酶消化(如淀粉酶、菠蘿蛋白酶)的方法進(jìn)行處理。

6.2 理學(xué)檢查

6.2.1 精液理學(xué)檢查主要包括精液體積、外觀、液化時(shí)間和粘稠度等。

6.2.2 精液體積測量宜使用稱重法(可假設(shè)精液密度為1 g/mL)，也可通過帶刻度的容器直接讀取。6.2.3 精液標(biāo)本接收后應(yīng)立即觀察其是否凝固，然后置于室溫或37℃條件下觀察標(biāo)本從凝固到完全液化所需時(shí)間。

6.2.4 粘稠度可通過拉絲試驗(yàn)進(jìn)行判斷，如采用玻棒法或滴管法。

6.3 化學(xué)檢查 精液化學(xué)分析宜包括酸性磷酸酶、鋅、果糖、中性α-葡糖苷酶、乳酸脫氫酶同工酶X和精子頂體精氨酸酰胺酶測定等。實(shí)驗(yàn)室宜選擇1個(gè)檢查項(xiàng)目來評(píng)價(jià)附屬性腺(前列腺、精囊腺、尿道球腺)和附睪的功能。

6.4 顯微鏡檢查

6.4.1 精液顯微鏡檢查宜包括精子活力、精子存活率、精子計(jì)數(shù)、精子形態(tài)、生精細(xì)胞及其他細(xì)胞檢查等。

6.4.2 精子活力檢查可使用普通光學(xué)顯微鏡觀察染色或未染色的精液標(biāo)本，宜使用相差顯微鏡檢查新鮮、未染色的標(biāo)本。先在低倍鏡下觀察黏液絲、精子凝集、非精子細(xì)胞(如上皮細(xì)胞、白細(xì)胞、未成熟精子細(xì)胞、斷裂精子頭部或尾部)等成分，在高倍鏡下進(jìn)行精子活力評(píng)估(至少計(jì)數(shù)200個(gè)精子，分別計(jì)算前向運(yùn)動(dòng)、非前向運(yùn)動(dòng)和不活動(dòng)精子的百分比)。

6.4.3 精子存活率檢查可采用伊紅染色、伊紅-苯胺黑染色法或低滲膨脹試驗(yàn)進(jìn)行，應(yīng)在精液標(biāo)本收到后立即檢查，宜在30 min內(nèi)完成，勿超過1 h。

6.4.4 進(jìn)行精子計(jì)數(shù)時(shí)，應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋(可采用1∶20、1∶5或1∶2的稀釋倍數(shù))，將標(biāo)本稀釋兩份，分別充液至計(jì)數(shù)池，根據(jù)精子數(shù)量選擇合適的計(jì)數(shù)區(qū)域，每份稀釋標(biāo)本各至少計(jì)數(shù)200個(gè)精子，用兩份稀釋標(biāo)本計(jì)數(shù)結(jié)果的均值計(jì)算每毫升精液中精子數(shù)量(精子濃度)和精子總數(shù)(精子濃度×精液量)。

6.4.5 進(jìn)行精子形態(tài)檢查時(shí)，取1滴液化且混勻的精液制備涂片，涂片自然晾干、將涂片浸入95%的乙醇中至少15 min進(jìn)行固定后做巴氏染色；或用75%乙醇固定60 min后做Shorr染色；或用95%甲醇固定60 min做Diff-Quik染色。在低倍鏡下觀察涂片，在油鏡下計(jì)數(shù)至少200個(gè)精子，計(jì)算正常和異常形態(tài)精子百分比。

6.4.6 特殊需要時(shí)，將標(biāo)本染色后在油鏡下觀察精原細(xì)胞、初級(jí)精母細(xì)胞、次級(jí)精母細(xì)胞、精子細(xì)胞及精子的比例，有助于評(píng)估生精功能是否存在異常。

6.5 計(jì)算機(jī)輔助精液分析(CASA)

6.5.1 實(shí)驗(yàn)室使用CASA系統(tǒng)應(yīng)遵循廠商推薦的要求。

6.5.2 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)定期核查儀器檢測結(jié)果的重復(fù)性和可靠性。

6.5.3 CASA系統(tǒng)對(duì)檢測精子濃度有一定局限性，在(20～50)×109/L的范圍內(nèi)檢測結(jié)果較為可靠。精子濃度過高時(shí)，應(yīng)將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋。

6.6 精液檢查參考區(qū)間 實(shí)驗(yàn)室宜在驗(yàn)證的基礎(chǔ)上采用世界衛(wèi)生組織最新版關(guān)于“人類精液檢查與處理實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)”提供的精液檢查主要參數(shù)(精液體積、精子存活率、精子總數(shù)、精子濃度、精子活力、精子前向運(yùn)動(dòng)、精子形態(tài))的參考區(qū)間下限(第5百分位數(shù)及其95%可信區(qū)間)。

7 陰道分泌物檢驗(yàn)技術(shù)要求

7.1 標(biāo)本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)和貯存

7.1.1 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)與臨床共同討論并制訂陰道分泌物標(biāo)本采集和處理的標(biāo)準(zhǔn)操作程序。

7.1.2 標(biāo)本采集宜使用1個(gè)或多個(gè)滅菌拭子(頭部包有聚酯棉球)或滅菌圈(棉球?qū)α懿∧紊杏绊懀举|(zhì)器材對(duì)沙眼衣原體有影響)。應(yīng)根據(jù)檢查目的采集不同部位的標(biāo)本，如細(xì)菌性陰道炎檢查時(shí)應(yīng)采集陰道側(cè)壁分泌物，滴蟲性陰道炎檢查時(shí)應(yīng)采集后穹隆分泌物。

7.1.3 標(biāo)本應(yīng)在室溫條件下盡快送檢，檢查滴蟲時(shí)，標(biāo)本宜保溫送檢。

7.1.4 冷藏標(biāo)本不利于淋病奈瑟菌復(fù)蘇和影響陰道毛滴蟲滋養(yǎng)體動(dòng)力識(shí)別，但可用于沙眼衣原體或病毒(如單純皰疹病毒)檢查。

7.2 化學(xué)檢查 陰道分泌物化學(xué)檢查宜包括過氧化氫、白細(xì)胞酯酶、唾液酸苷酶、β-葡萄糖醛酸苷酶、乙酰氨基糖苷酶和凝固酶檢測等。

7.3 細(xì)胞學(xué)和病原學(xué)檢查

7.3.1 應(yīng)在顯微鏡下對(duì)陰道分泌物涂片中的細(xì)胞、細(xì)菌、真菌和寄生蟲等有形成分進(jìn)行檢查，可采用等滲鹽水直接涂片法，使用涂片染色法(瑞氏染色或革蘭染色)可提高檢出率。

7.3.2 宜根據(jù)白細(xì)胞、上皮細(xì)胞、乳酸桿菌和雜菌數(shù)量多少進(jìn)行陰道分泌物涂片清潔度判斷并報(bào)告，判斷標(biāo)準(zhǔn)見表2。亦可對(duì)菌群密集度、菌群多樣性和優(yōu)勢(shì)菌群(正常情況下應(yīng)為革蘭陽性大桿菌，即乳酸桿菌)進(jìn)行評(píng)估和報(bào)告。

7.3.3 應(yīng)注意查找有無陰道毛滴蟲、致病性細(xì)菌(如陰道加德納菌、彎曲弧菌、淋病奈瑟菌)和真菌(菌絲、孢子和芽生孢子)等。查見線索細(xì)胞是診斷細(xì)菌性陰道病的重要指標(biāo)，當(dāng)同時(shí)查見菌絲、孢子和芽生孢子時(shí)，應(yīng)考慮真菌性陰道炎；僅孢子陽性時(shí)，應(yīng)結(jié)合乙酰氨基糖苷酶試驗(yàn)和臨床做出診斷。必要時(shí)，實(shí)驗(yàn)室宜根據(jù)乳酸桿菌、加德納菌/普雷沃菌和動(dòng)彎桿菌的數(shù)量進(jìn)行Nugent評(píng)分并報(bào)告。

表2 陰道分泌物涂片清潔度判斷標(biāo)準(zhǔn)

附錄A

（規(guī)范性附錄）

使用血液分析儀的體液細(xì)胞分析功能進(jìn)行體液細(xì)胞自動(dòng)化檢驗(yàn)的要求

A.1 儀器的選擇

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)選擇具有體液細(xì)胞分析功能的儀器進(jìn)行體液標(biāo)本的檢測，并確認(rèn)儀器已獲監(jiān)管機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)的檢測標(biāo)本類型、可進(jìn)行計(jì)數(shù)的細(xì)胞類型以及報(bào)告參數(shù)能夠滿足實(shí)驗(yàn)室的需求。

A.2 檢測系統(tǒng)的性能驗(yàn)證

在檢測患者標(biāo)本前，應(yīng)對(duì)檢測系統(tǒng)的性能進(jìn)行驗(yàn)證，至少包括本底計(jì)數(shù)、精密度、分析靈敏度和分析特異性、正確度和結(jié)果可報(bào)告范圍等。性能驗(yàn)證的方法和要求可參考ICSH指南和儀器制造商的說明書。

每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)建立所用檢測系統(tǒng)有核細(xì)胞計(jì)數(shù)和紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的檢測下限，實(shí)驗(yàn)室規(guī)定的檢測下限不能低于儀器的最低檢出限。

A.3 檢測過程

儀器的使用應(yīng)遵循制造商的建議。在檢測標(biāo)本(尤其是CSF標(biāo)本)前，應(yīng)首先進(jìn)行本底計(jì)數(shù)，且保證計(jì)數(shù)結(jié)果符合要求，若重復(fù)2次本底計(jì)數(shù)結(jié)果仍不符合要求，應(yīng)對(duì)儀器應(yīng)進(jìn)行清洗或日常維護(hù)。

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有檢測結(jié)果超出可報(bào)告范圍時(shí)的處理程序，如對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋(或調(diào)整稀釋比例)、采用手工法進(jìn)行檢測等。

A.4 復(fù)檢規(guī)則的建立與驗(yàn)證

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制訂儀器法體液細(xì)胞計(jì)數(shù)的復(fù)檢規(guī)則并進(jìn)行驗(yàn)證。建立復(fù)檢規(guī)則前，必須首先熟悉儀器的檢測性能，如檢測下限、報(bào)警提示、測定圖形、特殊參數(shù)等。出現(xiàn)以下情況時(shí)，必須進(jìn)行復(fù)檢。 1)儀器細(xì)胞分類結(jié)果異常，提示異常細(xì)胞存在的可能。2)細(xì)胞分類散點(diǎn)圖異常，需要確認(rèn)是否有非細(xì)胞性微粒物質(zhì)及細(xì)菌干擾等。3)儀器細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果低于檢測下限。4)與大細(xì)胞相關(guān)的參數(shù)升高，不能排除腫瘤細(xì)胞的存在。

宜采用直接鏡檢法計(jì)數(shù)和涂片染色形態(tài)學(xué)檢查兩種方法進(jìn)行復(fù)檢。

A.5 室內(nèi)質(zhì)控

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)使用至少2個(gè)濃度水平(包括正常和異常)專用的質(zhì)控品開展室內(nèi)質(zhì)控。質(zhì)控品檢測應(yīng)采用與臨床體液標(biāo)本檢測相同的方式(同一體液檢測通道)進(jìn)行處理和分析。

A.6 結(jié)果可比性

實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部有多個(gè)檢測系統(tǒng)時(shí)，應(yīng)通過定期進(jìn)行檢測系統(tǒng)間的結(jié)果比對(duì)保證實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部檢測結(jié)果的可比性；實(shí)驗(yàn)室應(yīng)通過參加室間質(zhì)評(píng)或與其他實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行結(jié)果比對(duì)的方式保證實(shí)驗(yàn)室間檢測結(jié)果的可比性。用于結(jié)果比對(duì)的標(biāo)本濃度應(yīng)覆蓋檢測系統(tǒng)的可報(bào)告范圍。