張旭祥 ，李 雯，王 芳，林夢潔，李 紅，張 麗，念 馨

（1） 昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科，云南昆明 650032；2） 德宏州人民醫(yī)院內(nèi)分泌科，云南德宏 678400；3） 內(nèi)蒙古臨河人民醫(yī)院內(nèi)分泌科，內(nèi)蒙古臨河 015000）

我國在2013 年進(jìn)行的全國性糖尿病患病調(diào)查顯示，中國成人2 型糖尿病的患病率為10.9%[1]。由于生活環(huán)境及地域差別，全國各少數(shù)民族2 型糖尿病患病率不同。2 型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM） 是有遺傳傾向的多基因疾病，許多研究顯示多個基因在糖尿病的發(fā)病機(jī)制中起著重要作用。不同民族2 型糖尿病患病差異是否與這些基因差異相關(guān)值得進(jìn)一步探討。

載脂蛋白（apolipoprotein，APO） 參與體內(nèi)血脂的結(jié)合和轉(zhuǎn)運(yùn)。APOE 與脂質(zhì)成分結(jié)合形成脂蛋白進(jìn)一步調(diào)控這些脂蛋白與相應(yīng)APOE 受體和APOB 受體結(jié)合，而這些脂質(zhì)成分均參與脂質(zhì)代謝，包括乳糜微粒、乳糜微粒殘余物、極低密度脂蛋白、低密度脂蛋白（LDL-C） 和高密度脂蛋白（HDL-C） 等，因此APOE 參與血脂代謝，對脂代謝有重要影響。APOE 基因多態(tài)性與血脂代謝相關(guān)，導(dǎo)致患者動脈粥樣硬化進(jìn)展及動脈硬化性心腦血管疾病的發(fā)生率[2-3]，不同研究結(jié)論有差異，考慮與人群和地區(qū)差異有關(guān)。分析APOE 基因多態(tài)性與云南地區(qū)傣族T2DM相關(guān)性，并對APOE 基因多態(tài)性的種族特異性進(jìn)行研究，評估APOE 在傣族和漢族2 型糖尿病人群的頻率和分布情況及與少數(shù)民族糖尿病的關(guān)聯(lián)和作用。

1 材料與方法

1.1 研究對象

研究對象為整群抽取住院患者，納入標(biāo)準(zhǔn)：符合WHO1999 年糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)（WHO 糖尿病專家委員會報(bào)告，1999 年）[4]，空腹血糖≥7.0 mmol/L，OGTT 餐后2 h 血糖11.1 mmol/L，隨機(jī)血糖11.1 mmol/L，兩次血糖達(dá)到可診斷糖尿病，谷氨酸脫羧酶抗體（GAD）、胰島素自身抗體（IAA）、胰島細(xì)胞抗體（ICA） 均為陰性的患者。

1.1.1 傣族 抽取2011 年至2015 年在云南省德宏州醫(yī)院住院的傣族人群，其中：非糖尿病組共283例，女性151例，男性132例，年齡（51.39±16.16） 歲，體重指數(shù)（BMI） （22.31±4.58）kg/m2，腰臀比（WHR） 0.93（0.88～0.93）。

2 型糖尿病組共292例，女性150例，男性142例，年齡（54.76±13.03） 歲，BMI（24.14±4.47） kg/m2，WHR0.93±0.12。兩組年齡、性別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.1.2 漢族 抽取2007 年和2008 年在昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院住院的漢族2 型糖尿病患者259例，女性128例，男性131例，年齡（56.01±14.06） 歲，BMI（23.78 ±3.69） kg/m2，WHR 0.95±0.08。

排除標(biāo)準(zhǔn)： （1） 妊娠患者；（2） 糖尿病患者谷氨酸脫羧酶抗體（GAD）、胰島素自身抗體（IAA）、胰島細(xì)胞抗體（ICA） 陽性者。

1.2 研究方法

1.2.1 標(biāo)本和臨床資料的采集 所有研究對象清晨測身高、體重、腰圍、臀圍、血壓。BMI=體重/身高2（kg/m2）；WHR=腰圍/臀圍；并空腹抽取外周靜脈血，測定FPG、TC、TG、UA 等生化指標(biāo)。0.5%EDTA 抗凝管1 管外周靜脈血，檢測APOE 基因多態(tài)性。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法及試劑 參見劉文秀等APOE 基因擴(kuò)增方法[5]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)錄入后運(yùn)用SPSS20.0 軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。各民族患者間等位基因頻率及基因型頻率分布差異用χ2檢驗(yàn)分析，并分析所選人群是否符合連鎖平衡定律（Hardy-Weinberg equilibrium）。計(jì)量資料服從正態(tài)分布以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（） 表示，非正態(tài)分布計(jì)量資料進(jìn)行對數(shù)轉(zhuǎn)換后分析。多組資料的比較用方差分析，如有差異用q檢驗(yàn)進(jìn)一步兩兩比較；兩組資料的比較用t檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 APOE 基因擴(kuò)增及酶切結(jié)果

2.1.1 APOE 基因PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物電泳鑒定結(jié)果APOE 基因經(jīng)PCR 擴(kuò)增后，其產(chǎn)物片段長度292 bp，見圖1。

圖1 APOE 基因擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖Fig.1 Electrophoresis of APOE gene amplification product

2.1.2 酶切產(chǎn)物電泳鑒定結(jié)果 經(jīng)限制性核酸內(nèi)切酶HhaⅠ酶切后，用10%聚乙烯丙酰胺凝膠電泳，電壓為100 V 1.5 h。根據(jù)堿基數(shù)判讀基因型：E2/2：91 bp、83 bp、60 bp；E3/3：91 bp、60 bp、48 bp、35 bp；E3/4：91 bp、72 bp、60 bp、48 bp、35 bp；E4/4：72 bp、60 bp、48 bp 35 bp 的產(chǎn)物片段，見圖2。

圖2 APOE 酶切產(chǎn)物電泳圖Fig.2 Electrophoresis of 10% polyvinyl acrylamide gel from APOE enzyme digestion product

2.2 臨床數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2.2.1 基因型和等位基因頻率的比較 ApoE 基因有四個多態(tài)性：E3/4，E2/2，E3/3 和E4/4。在傣族人群中，2 型糖尿病和非糖尿病人群在基因表型分布上有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.001）；在2 型糖尿病人群中，漢族和傣族有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.001）。由于E4/4 人數(shù)較少，將基因型E3/4 及E4/4 作為E4，E2/2 作為E2，E3/3 作為E3，比較三組人群的等位基因頻率，顯示有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.001），見表1。

2.2.2 傣族2 型糖尿病和漢族2 型糖尿病臨床和生化資料比較 傣族T2DM 組與漢族T2DM 組之間年齡、BMI 無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），WHR 具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；腰圍、SBP、DBP、FGP、UA、TC、TG 具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01）。傣族T2DM 組空腹血糖、血壓、尿酸及血脂水平明顯高于漢族T2DM 組，漢族糖尿病組腰圍和腰臀比高于傣族糖尿病（表2）。

2.2.3 傣族2 型糖尿病不同基因型的臨床資料比較 傣族T2DM 組E2/2 基因組與E3/3 基因組、E3/4+E4/4 比較，各組的年齡、BMI、腰圍、WHR、FPG、DBP、TC、TG 無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。收縮壓（SBP） 和血尿酸（UA） 有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01），E3/3 基因組和E3/4+E4/4 組收縮壓水平明顯高于E2/2 基因組；E3/3 基因組和E3/4+E4/4 組血尿酸水平明顯低于E2/2 基因組，見表3。

2.2.4 漢族2 型糖尿病不同基因型的臨床資料比較 漢族T2DM 組E2/2 基因組與E3/3 基因組、E3/4+E4/4 比較，各組的年齡、BMI、腰圍、WHR、FPG、UA、TC、TG 無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；SBP（P＜0.01） 和DBP（P＜0.05） 有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，E3/3 基因組和E3/4+E4/4 組的SBP 和DBP 均高于E2/2 基因組，與傣族相比較有不同，見表4。

表1 傣族和漢族APOE 多態(tài)性基因型及等位基因頻率比較［n（%）］Tab.1 Comparison of APOE polymorphism genotypes and allele frequencies between Dai and Han nationalities［n（%）］

表2 傣族T2DM 組與漢族T2DM 組臨床和生化資料比較（） （1）Tab.2 Comparison of clinical and biochemical data between T2DM in Dai and Han （） （1）

表2 傣族T2DM 組與漢族T2DM 組臨床和生化資料比較（） （1）Tab.2 Comparison of clinical and biochemical data between T2DM in Dai and Han （） （1）

與傣族T2DM組比較，*P ＜0.05，#P＜0.01。

表2 傣族T2DM 組與漢族T2DM 組臨床和生化資料比較（） （2）Tab.2 Comparison of clinical and biochemical data between T2DM in Dai and Han （） （2）

表2 傣族T2DM 組與漢族T2DM 組臨床和生化資料比較（） （2）Tab.2 Comparison of clinical and biochemical data between T2DM in Dai and Han （） （2）

與傣族T2DM組比較，#P ＜0.01。

表3 傣族2 型糖尿病不同基因組臨床和生化資料比較（） （1）Tab.3 Comparison of clinical and biochemical data of different genomes of Dai T2DM （） （1）

表3 傣族2 型糖尿病不同基因組臨床和生化資料比較（） （1）Tab.3 Comparison of clinical and biochemical data of different genomes of Dai T2DM （） （1）

表3 傣族2 型糖尿病不同基因組臨床和生化資料比較（） （2）Tab.3 Comparison of clinical and biochemical data of different genomes of Dai T2DM （） （2）

表3 傣族2 型糖尿病不同基因組臨床和生化資料比較（） （2）Tab.3 Comparison of clinical and biochemical data of different genomes of Dai T2DM （） （2）

與E2/2 組比較，#P ＜0.01。

表4 漢族糖尿病APOE 不同基因型臨床和生化資料比較（） （1）Tab.4 Comparison of clinical and biochemical data of different genomes of Han T2DM （） （1）

表4 漢族糖尿病APOE 不同基因型臨床和生化資料比較（） （1）Tab.4 Comparison of clinical and biochemical data of different genomes of Han T2DM （） （1）

表4 漢族糖尿病APOE 不同基因型臨床和生化資料比較（） （2）Tab.4 Comparison of clinical and biochemical data of different genomes of Han T2DM （） （2）

表4 漢族糖尿病APOE 不同基因型臨床和生化資料比較（） （2）Tab.4 Comparison of clinical and biochemical data of different genomes of Han T2DM （） （2）

與E2/2 組比較，*P ＜0.05，#P ＜0.01。

3 討論

APOE 基因多態(tài)性與一些代謝性疾病的發(fā)生有相關(guān)性，這些疾病包括糖尿病、血脂異常和高血壓等。APOE 基因最多見的是外顯子4 多態(tài)性，而其等位基因頻率在不同人種間存在差異，可能導(dǎo)致相應(yīng)疾病存在遺傳傾向性。本研究檢測了傣族和漢族2 型糖尿病中ApoE 的基因型，共有4 種：E2/2、E3/3、E3/4、E4/4。國內(nèi)研究顯示E3/3 是最常見的基因型，等位基因頻率最常見的也是E3[6]。傣族2 型糖尿病患者APOE 基因多態(tài)性以E3/3 最常見，為88.0%；E3/4 最少，為1.4%。漢族糖尿病也以E3/3 常見，為78.4%，而最少的是E4/4，為1.2%。在基因型分布方面，傣族和漢族2 型糖尿病是存在差異的。與瑞典人群研究[7]結(jié)果相比，我國人群E3 頻率較高，而E4 頻率低。說明在不同人種、民族間APOE 基因多態(tài)性是有差異的。

有研究顯示APOE 基因多態(tài)性與血脂有相關(guān)性。Eto 等[8]報(bào)道TG 升高與APOE 的E2 等位基因相關(guān)。郭茜等[9]研究顯示漢族糖尿病E2/E2 基因型者的TG 和TC 明顯高于其它基因型，回族人群則未見此相關(guān)性。本研究中，傣族、漢族2 型糖尿病各APOE 基因型血脂，包括膽固醇、甘油三酯均無差異（P＞0.05）。說明不同民族間APOE 基因表型對脂代謝的影響不同。云南地區(qū)處于高原，飲食、生活習(xí)慣與其它地區(qū)不同，基因表型也可能與地區(qū)及生活環(huán)境有關(guān)。

本研究結(jié)果提示在傣族和漢族糖尿病中，血壓在不同基因型中存在差異。在漢族糖尿病中，E2/2組的SBP 和DBP 均明顯低于E3/3、E3/4 和E4/4組，其中SBP 有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＜0.01；DBP有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＜0.05。在傣族糖尿病中，也顯示E2/2 組血壓明顯低于E3/3、E3/4 和E4/4 組，P＜0.01。筆者的研究結(jié)果提示APOE 基因多態(tài)性與血壓有相關(guān)性，這與我國學(xué)者研究結(jié)果一致[10]。在傣族糖尿病中，E2/2 組的血尿酸水平明顯低于E3/3、E3/4 和E4/4 組，P＜0.01。綜上，APOE 基因多態(tài)性在云南地區(qū)傣族、漢族2 型糖尿病人群中是存在種族差異的。在傣族和漢族糖尿病人群中，血壓、血尿酸與APOE 不同基因型有關(guān)系。目前尚需進(jìn)一步相關(guān)研究，探討APOE 基因多態(tài)性影響血尿酸、血壓水平的機(jī)制，為闡明APOE 基因在糖尿病、代謝方面的作用提供證據(jù)。