錢一忖，曹青日

(蘇州大學 藥學院，江蘇 蘇州 215123)

布洛芬是解熱鎮(zhèn)痛類非甾體抗炎藥，常用于感冒引起的發(fā)熱，也用于緩解各種輕、中度疼痛[1]。右布洛芬是布洛芬的純右旋光學異構(gòu)體，其活性是左旋體的160倍，是消旋體的1.6倍[2]。右布洛芬不僅藥理活性好，而且胃腸道不良反應和肝腎毒性小[3-5]。目前，國內(nèi)臨床上應用的右布洛芬劑型主要有片劑、膠囊劑和混懸劑，但由于右布洛芬溶解性差、藥效慢，尚未有成熟的注射劑上市。2009年Cumberland公司研制的布洛芬注射液在美國獲得FDA批準上市，但是該布洛芬注射液使用精氨酸作為增溶劑，臨床用藥時布洛芬容易析出[6]。

為此，研制更加安全、有效、穩(wěn)定的右布洛芬制劑十分必要。脂肪乳作為載體能增加右布洛芬此類難溶性藥物的溶解度，提高藥物穩(wěn)定性和生物利用度，減小藥物刺激性，使藥物產(chǎn)生靶向性，具有很好的安全性[7-9]。

本文中，筆者為開發(fā)新型右布洛芬脂肪乳注射液，參考《中國藥典》對右布洛芬含量和有關(guān)物質(zhì)的分析方法，測定原料藥在不同輔料中的溶解度，研究原料藥的穩(wěn)定性及原輔料相容性，同時，采用毒性低的新型非離子型表面活性劑Kolliphor HS15[10]，評價其增溶能力，并進行處方篩選，為后期進一步的工藝質(zhì)量研究提供依據(jù)。

1 材料與設備

右布洛芬(批號：C102-1411039M)，湖北百科亨迪藥業(yè)有限公司；大豆油(LCT，批號：A10170603，供注射用)，廣州白云山漢方現(xiàn)代藥業(yè)有限公司；中鏈甘油三酸酯(MCT，批號：160314)，IOI Oleo GmbH公司；甘油(批號：100320170902，供注射用)，湖南爾康制藥股份有限公司；精制蛋黃卵磷脂(批號：510300-2173857)，Lipoid GmbH公司；Kolliphor HS 15(批號：46621156P0)，巴斯夫股份公司(BASF)；乙腈(色譜純，批號：165741)、異丙醇(色譜純，批號：178454)，F(xiàn)isher Chemical公司；磷酸(優(yōu)級純，批號：20160130)、鹽酸(優(yōu)級純，批號：20170406)、NaOH(分析純，批號：20160518)、30%過氧化氫(分析純，批號：20160512)，國藥集團化學試劑有限公司。

XS105型電子天平(0.01 mg)，梅特勒-托利多公司；高效液相色譜儀(HPLC，G1311C-1260HPLC泵，G1365D-1260 MWD檢測器，G329B-1260自動進樣器)，安捷倫公司；KBFLQC720型光照恒溫恒濕箱，賓得公司；TD5M型離心機，上海盧湘儀離心機儀器有限公司；Venticell 55型烘箱，德國MMM公司；AH1000D型高壓均質(zhì)機，ATS Engineering公司；MS2000型激光粒度儀，英國馬爾文儀器有限公司；AccuSizer 780APS型全自動計數(shù)粒徑檢測儀，美國PSS公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 分析方法建立

2.1.1 色譜條件

右布洛芬含量及有關(guān)物質(zhì)測定參照文獻[11]中“右布洛芬”中關(guān)于有關(guān)物質(zhì)的測定方法，采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，檢測波長為214 nm，流動相為以磷酸溶液(用磷酸調(diào)節(jié)水相至pH 2.5)-乙腈(體積比為30∶ 70)，流速為1 mL/min，進樣量為20 μL。理論板數(shù)按右布洛芬計算不低于4 000，分離度大于1.5。

2.1.2 專屬性考察

考察氧化、高溫、酸、堿條件處理后的右布洛芬、空白輔料(大豆油(供注射用)、中鏈甘油三酸酯、精制蛋黃卵磷脂、甘油的混合物)以及Kolliphor HS15增溶劑的色譜圖分離情況。

取右布洛芬適量，分別按照下述方法制備不同溶液。①氧化實驗。取20 mg右布洛芬，加乙腈2mL溶解，加5% H2O22 mL，室溫放置2 h，用流動相稀釋至10 mL。②高溫實驗。取20 mg右布洛芬，加乙腈2 mL溶解，流動相稀釋至10 mL，105 ℃加熱2 h。③酸處理實驗。取20 mg右布洛芬，加乙腈2 mL溶解，流動相稀釋至10 mL后取1 mL溶液，加入1 mL 1.0 mol/L HCl 2 h，加入1 mL1.0 mol/L NaOH中和，用流動相稀釋至100 mL。④堿處理實驗。取20 mg右布洛芬，加乙腈2 mL溶解，流動相稀釋至10 mL，取1 mL溶液，加入1 mL1.0 mol/L NaOH，加入1 mL 1.0 mol/L HCl 2 h中和，用流動相稀釋至100 mL。⑤空白輔料溶液2 mL用流動相稀釋至10 mL。⑥Kolliphor HS15增溶劑。取5 mg，用流動相溶解并稀釋至10 mL。⑦溶劑空白，流動相。

精密吸取20.0 μL不同實驗條件下的溶液，利用高效液相色譜儀分析右布洛芬，結(jié)果見圖1。

由圖1可知：右布洛芬保留時間約為6.5 min；氧化實驗與高溫實驗中發(fā)現(xiàn)有降解產(chǎn)物，但均能與右布洛芬主峰分開；酸處理及堿處理實驗未見降解產(chǎn)物；空白輔料、Kolliphor HS 15增溶劑、流動相均與主峰無干擾。這方法專屬性良好。

圖1 右布洛芬的專屬性實驗結(jié)果Fig.1 Specific experimental results of dexibuprofen by HPLC

2.1.3 線性關(guān)系

精密稱取右布洛芬20 mg，加乙腈2 mL溶解，流動相稀釋至10 mL，搖勻。用流動相稀釋配制成藥物質(zhì)量濃度分別為2、10、25、30和50 μg/mL的系列標準溶液。取標準溶液20 μL注入高效液相色譜儀，記錄峰面積A。以右布洛芬質(zhì)量濃度ρ為橫坐標，峰面積A為縱坐標進行標準曲線的繪制，結(jié)果見圖2。由圖2得到線性回歸方程，A=47.841ρ+14.82，R2=0.999 9。結(jié)果表明，在2.0～50.0 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖2 右布洛芬溶液標準曲線Fig.2 Standard curves of dexibuprofen

2.1.4 精密度

精密稱取右布洛芬20 mg，加乙腈2 mL溶解，流動相稀釋至10 mL，搖勻。用流動相稀釋配制成藥物質(zhì)量濃度為20 μg/mL的系列標準溶液，重復進樣6次，測定并計算其峰面積，結(jié)果見表1。由表1可知，該標準溶液的相對標準偏差為0.05%，小于2%，精密度良好。

2.1.5 準確度

精密稱取右布洛芬適量，按方法配制成藥物質(zhì)量濃度ρ為16、20和24 μg/mL的系列溶液，每個濃度各制備3份，測定并計算回收率結(jié)果見表2。由表2可知，回收率為100.02%，準確度良好。

2.1.6 定量限

精密移取20 μg/mL標準品供試液，稀釋至樣品溶液中主峰的響應值約為噪音水平的10倍，記錄色譜圖。當主峰的信噪比(S/N)為1.0時，得出本實驗右布洛芬定量限為2.0 ng。

表1 精密度實驗結(jié)果

表2 準確度實驗結(jié)果

2.1.7 檢測限

精密移取20 μg/mL標準品供試液，稀釋至樣品溶液中主峰的響應值約為噪音水平的3倍，記錄色譜圖。當主峰的信噪比(S/N)為3.3時，得出本實驗右布洛芬定量限為0.2 ng。

2.1.8 耐用性

取右布洛芬適量，按方法配制成16 μg/mL的樣品溶液。分別以①磷酸溶液(用磷酸調(diào)節(jié)水相至pH2.5)-乙腈(30∶ 70)，以②磷酸溶液(用磷酸調(diào)節(jié)水相至pH2.4)-乙腈(30∶ 70)，以③磷酸溶液(用磷酸調(diào)節(jié)水相至pH 2.6)-乙腈(30∶ 70)，以④磷酸溶液(用磷酸調(diào)節(jié)水相至pH 2.5)-乙腈(28∶ 72)，以⑤磷酸溶液(用磷酸調(diào)節(jié)水相至pH 2.5)-乙腈(32∶ 68)為流動相測定，計算其測試溶液濃度，結(jié)果見表3。

由表3可知，在4個不同條件下的樣品溶液質(zhì)量濃度均在99.0%～101.0%，說明該方法耐用性良好。

表3 耐用性實驗結(jié)果

2.1.9 溶液穩(wěn)定性

精密稱取右布洛芬20 mg，加乙腈2 mL溶解，流動相稀釋至10 mL，搖勻。用流動相稀釋配制成藥物質(zhì)量濃度為20 μg/mL 的系列標準溶液，室溫存放，分別在0、12和24 h后進樣，計算其峰面積A，結(jié)果見表4。

由表4可知，右布洛芬溶液在24 h內(nèi)峰面積RSD為0.70%，即說明在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

表4 溶液穩(wěn)定性

2.2 原料藥在不同介質(zhì)中的溶解度

取過量右布洛芬分別置于不同具塞試管中，分別加入大豆油(供注射用)(LCT)、中鏈甘油三酸酯(MCT)、甘油及水。將試管置于室溫振蕩24 h后，取樣離心后按含量測定色譜條件進樣分析，結(jié)果見表5。

表5 右布洛芬在不同輔料中的溶解度(n=3)

由表5可知：右布洛芬在油相輔料大豆油(供注射用)及中鏈甘油三酸酯中溶解度很大，在液體輔料甘油中也有一定的溶解度，但在水中溶解度很小。理論上20%中/長鏈脂肪乳注射液中右布洛芬質(zhì)量濃度能夠達到約60 mg/mL。

2.3 非離子型表面活性劑Kolliphor HS 15增溶效果

為進一步提升右布洛芬在大豆油(供注射用)(LCT)、中鏈甘油三酸酯(MCT)中的溶解度及制劑的穩(wěn)定性，本處方研究選用Kolliphor HS 15為增溶劑。

取過量右布洛芬置于不同具塞試管中，分別加入含1 g/L Kolliphor HS 15的大豆油(供注射用)(LCT)及含1 g/L Kolliphor HS 15的中鏈甘油三酸酯(MCT)。將試管置于室溫振蕩24 h后，取樣離心后按含量測定色譜條件進樣分析，結(jié)果見表6。

由表6可知，增溶劑Kolliphor HS 15能夠增加右布洛芬在大豆油(供注射用)及中鏈甘油三酸酯中溶解度。

表6 右布洛芬在Kolliphor HS 15下LCT/MCT中的溶解度(n=3)

2.4 原料藥的穩(wěn)定性

將樣品置于扁形稱量瓶中，分別于4 500 lx、60 ℃及相對濕度(RH)92.5%條件下放置10 d，于第5天、第10天取樣，考察樣品的外觀、有關(guān)物質(zhì)的變化，結(jié)果見表7。

表7 原料藥穩(wěn)定性試驗

由表7可知：原料藥于4 500 lx光照條件放置5、10 d后，無明顯變化，表明本品對光穩(wěn)定；經(jīng)高溫5 d后，外觀無明顯變化，但高溫10 d后，有關(guān)物質(zhì)的含量明顯增加，原料藥應避免高溫保存；經(jīng)高濕10 d后，有關(guān)物質(zhì)無明顯增加，但有輕微吸濕現(xiàn)象，因此盡可能于干燥處保存原料藥。

2.5 原輔料相容性研究

按照化學藥物制劑研究基本技術(shù)指導原則，對藥物與輔料相互作用進行考察。根據(jù)輔料的不同作用及最優(yōu)用量，選擇常用的輔料分別按照藥物與輔料比例為1∶ 4 混合，按照影響因素實驗方法，將樣品置于扁形稱量瓶中，分別于4 500 lx、60 ℃及RH 92.5%條件下放置10 d，于第5天、第10天取樣，考察樣品的有關(guān)物質(zhì)的變化，結(jié)果見表8。

由表8可知，所生成有關(guān)物質(zhì)均小于1.0%，各種輔料與主藥的配伍穩(wěn)定性均較好，可用于后期處方篩選。

表8 藥物與輔料相互作用

2.6 處方篩選

根據(jù)臨床需求，設定右布洛芬脂肪乳注射液目標載藥量為50 mg/mL，結(jié)合溶解度實驗結(jié)果，油相濃度選用20%。參照市售中長鏈脂肪乳注射液處方：大豆油(供注射用)10%，中鏈甘油三酸酯10%，甘油2.5%，精制蛋黃卵磷脂1.2%,分別考察Kolliphor HS 15質(zhì)量濃度為0、0.5、1.0、5及10 g/L時制得的右布洛芬脂肪乳注射液，考察項目包括：溶液外觀、pH、含量、有關(guān)物質(zhì)、平均粒徑及大于5 μm乳粒比例(pFat5)，結(jié)果見表9。

由表9可知：不含Kolliphor HS 15的右布洛芬脂肪乳注射液均質(zhì)過程中出現(xiàn)異常，有大量固體析出；Kolliphor HS 15比例大于0.05%時，右布洛芬脂肪乳注射液穩(wěn)定，有關(guān)物質(zhì)比例均小于1.0%；當Kolliphor HS 15比例低于0.1%時，右布洛芬脂肪乳注射液平均粒徑及大于5 μm乳粒比例均比較大；當比例達0.5%以上時，pFat5比較小，右布洛芬脂肪乳注射液均一穩(wěn)定，且可以達到比較理想的粒徑，乳粒粒徑均符合USP42 Lipid Injectable Emulsion的要求。

表9 處方篩查表

3 討論

本研究參照《中國藥典》2015版 “右布洛芬”中有關(guān)物質(zhì)測定方法條件建立含量測定方法，該方法專屬性強，精密度、準確度高，線性、耐用性、溶液穩(wěn)定性好，適用于右布洛芬的含量測定。酸、堿對右布洛芬的降解無影響，常溫下過氧化氫可導致少量降解，高溫是右布洛芬降解為4-異丁基苯乙酮的主要因素[12]。該測定方法色譜條件下，右布洛芬主要降解產(chǎn)物4-異丁基苯乙酮能得到很好的分離，因此，該測定方法也能夠用于后續(xù)制劑有關(guān)物質(zhì)的考察。

采用上述方法測定了右布洛芬在不同輔料中的溶解度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，藥物在水中的溶解度較低，在甘油中有一定的溶解度，在油相輔料大豆油(供注射用)、中鏈甘油三酸酯中具有較大的溶解度，可滿足制劑載藥量的需求，這為后續(xù)處方工藝中對處方比例的選擇提供了依據(jù)。

Kolliphor HS 15是一種新型注射用增溶劑，具有強大的增溶能力和優(yōu)良的安全性，可用于提高藥物的溶解度、促進吸收以及增加生物利用度。注射液Panitol中HS15的含量高達50%(體積分數(shù))[10]。實驗結(jié)果表明，Kolliphor HS 15能夠增大右布洛芬在油相輔料中的溶解度，從而避免使用聚山梨醇80等具有一定毒性的增溶劑。

進行了原料藥穩(wěn)定性及原輔料相容性考察。結(jié)果表明，主藥和降解峰分離明顯。原料藥穩(wěn)定性結(jié)果表明，右布洛芬在光照條件下較為穩(wěn)定，高濕條件下原料藥有輕微吸濕，高溫時有關(guān)物質(zhì)有明顯增加。高溫是右旋布洛芬降解的重要因素，因此，其制劑儲存條件應注意溫度控制。原輔料相容性是藥物處方設計過程中需評估的必要環(huán)節(jié)，如果組分因相互的作用而不適宜存在于同一個處方中，則不建議采用。原輔料相容性試驗結(jié)果表明，所選輔料與主藥的配伍穩(wěn)定性均較好，有關(guān)物質(zhì)比例均小于1.0%。

進行處方篩選，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以大豆油(供注射用)10%、中鏈甘油三酸酯10%、甘油2.5%、精制蛋黃卵磷脂1.2%和Kolliphor HS 15 5 g/L為處方制得的右布洛芬脂肪乳注射液載藥量可達50 mg/mL，有關(guān)物質(zhì)小于1.0%，乳粒粒徑符合USP42要求。

根據(jù)以上研究結(jié)果，本研究所使用不同種類的輔料，包括油相大豆油(供注射用)和中鏈甘油三酸酯、增溶劑Kolliphor HS 15、乳化劑精制蛋黃卵磷脂、

滲透壓調(diào)節(jié)劑甘油均可用于右布洛芬脂肪酸注射液的處方開發(fā)，篩選出的處方可用于后續(xù)進一步的工藝質(zhì)量研究，為右布洛芬脂肪乳注射液的研究提供依據(jù)。