訚璠，李滔，唐全，彭長華，歐陽耀靈，李承彬，湯璇

(湖北省荊州市中心醫(yī)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)部，湖北 荊州 434020)

0 引言

按照人乳頭狀瘤病毒(human papillomavirus, HPV)與惡性腫瘤發(fā)生相關(guān)性分為低危型HPV(low risk HPV, LRHPV)(如HPV6和HPV11等)和高危型HPV(high risk HPV, HRHPV)(例如HPV16和HPV18等)[1].LRHPV感染易導(dǎo)致低度鱗狀上皮內(nèi)病變與良性生殖器疣[2].HRHPV的慢性持續(xù)感染是宮頸鱗狀上皮內(nèi)瘤樣病變(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)和宮頸癌的主要原因[3].大量研究表明，HPV感染是誘發(fā)宮頸癌變的至關(guān)因素之一，大部分宮頸癌患者身上能檢測出HPV DNA[4]，且持續(xù)的HPV感染更易造成宮頸癌的發(fā)生[5].因此，防治HRHPV的感染是預(yù)防女性宮頸癌的重要途徑之一.國際癌癥研究所(IRAC)對(duì)全球浸潤性宮頸癌中人乳頭瘤病毒的類型進(jìn)行了一項(xiàng)Meta分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同地區(qū)與人群存在不同的HPV優(yōu)勢型別，如除亞洲地區(qū)外的所有地區(qū)中HPV16(46%～63%)、HPV18(10%～14%)、HPV45(2%～8%)、HPV31(2%～7%)和HPV35(3%～5%)為主要類型，其中HPV58(6%)與HPV52(4%)的識(shí)別頻率更高[6].湖北省地處長江中游，洞庭湖以北，地理位置比較獨(dú)特，尤其是荊州作為三國古都，地處江漢平原的腹地，人口密度大，同時(shí)其醫(yī)療水平較低，看病并不容易，因此進(jìn)一步探究多型別HRHPV在荊州地區(qū)女性中流行特點(diǎn)及年齡分別特征，具有重要意義.故本研究通過熒光PCR方法對(duì)本地區(qū)女性進(jìn)行HRHPV基因分型檢測，探索本地區(qū)女性HRHPV的流行病學(xué)特征，為荊州女性HRHPV的防治及HPV預(yù)防性疫苗接種在荊州本地的效用監(jiān)測提供流行病學(xué)依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下.

1 資料與方法

1.1 一般資料收集2018年1月至2018年8月期間至荊州市中心醫(yī)院首次篩查HRHPV分型的女性3 677例，年齡18～87歲，平均年齡(41.57±9.59)歲.以10歲為一個(gè)年齡段，20歲以下受檢者3人納入≤29組，80歲以上者1人納入≥70組.使用專用的宮頸取樣刷取受檢對(duì)象宮頸脫落細(xì)胞，置于無菌細(xì)胞保存液中密閉保存，立即送檢.

1.2 方法

1.2.1 試劑與儀器 高危型人乳頭瘤病毒分型核酸測定(熒光PCR法)試劑盒由上海之江生物科技股份有限公司提供，可對(duì)15種HRHPV(HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68和HPV82)進(jìn)行基因分型檢測.用ABI 7500熒光定量PCR儀(美國應(yīng)用生物公司生產(chǎn))進(jìn)行PCR擴(kuò)增、熒光監(jiān)測與結(jié)果判讀.

1.2.2 檢測方法 嚴(yán)格按照高危型人乳頭瘤病毒分型核酸測定(熒光PCR法)試劑盒說明書進(jìn)行操作.

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS 23.0軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，感染率以陽性率(%)表示.混合感染者各基因型感染率重復(fù)計(jì)算.兩組樣本相關(guān)性的比較采用四格表χ2檢驗(yàn)；多組樣本相關(guān)性的比較采用行列表資料χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

2 結(jié)果

2.1 HRHPV總感染率與優(yōu)勢型別3 677例受檢者HRHPV的總感染率為20.64%(759例).15種型別的HRHPV均被檢出，感染率由高到低依次為HPV52(6.53%，240例)、HPV58(3.51%，129例)、HPV16(2.99%，110例)、HPV39(2.64%，97例)、HPV68(2.04%，75例)、HPV51(1.93%，71例)、HPV18(1.88%，69例)、HPV35(1.50%，55例)、HPV66(1.44%，53例)、HPV56(1.39%，51例)、HPV33(1.28%，47例)、HPV59(1.03%，38例)、HPV31(0.82%，30例)、HPV45(0.54%，20例)、HPV82(0.33%，12例).HRHPV在荊州地區(qū)女性中流行的優(yōu)勢型別依次為HPV52、HPV58、HPV16、HPV39、HPV68.

2.2 HRHPV感染模式單一型別感染率14.11%(519例)，雙重感染率4.81%(177例)，三重感染率1.12%(41例)，四重感染率0.35%(13例)，五重感染率0.22%(8例)及九重感染率0.03%(1例)，HRHPV感染模式以單一型別為主.HPV52(30.44%，158例)、HPV16(13.29%，69例)與HPV39(10.01%，52例)是主要的單一感染型別，HRHPV檢出型別與感染模式見表1.HPV58(37.08%，89例)、HPV52(34.17%，82例)與HPV68(27.08%，65例)是主要的多重感染型別.另一方面，HPV68與HPV82主要在多重感染中被檢出.雙重感染中HPV58+HPV68檢出率最高(18.64%，33例)，HPV33+HPV35(8.47%，15例)次之.三重感染中HPV52+HPV58+HPV68檢出率最高(17.07%，7例).

表1 HRHPV檢出型別與感染模式

2.3 HRHPV感染率年齡特征

2.3.1 不同年齡段HRHPV感染率與感染型別 各年齡段HRHPV感染率如下：≤29歲年齡段HRHPV陽性率19.96%(92例/461例)；30～39歲18.10%(187例/1 033例)；40～49歲19.52%(287例/1 470例)；50～59歲24.92%(147例/590例)；60～69歲37.61%(41例/109例)；≥70歲35.71%(5例/14例).從各年齡群體感染比率來看，60～69歲女性HRHPV檢出率最高，隨后依次為≥70歲、50～59歲、≤29歲、40～49歲，30～39歲檢出率最低.各年齡段間的HRHPV感染率比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=33.01，P<0.01)，說明各群體間由于個(gè)人生活方式的差異以及自身免疫力的特點(diǎn)所造成年齡群體間HRHPV感染的差異性.

2.3.2 不同年齡段HRHPV感染模式 HRHPV多重感染患者占陽性患者的31.62%.各年齡段HRHPV感染模式見表2，≤29歲年齡段、30～39歲年齡段、40～49歲年齡段的多重感染率要小于平均感染率，而50～59歲(χ2=2.86，P=0.09)、60～69歲(χ2=3.85，P=0.05)與≥70歲(χ2=1.84，P=0.17)三個(gè)年齡段的多重感染率高于總體比率，各年齡段間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=12.30，P=0.03)，這說明年齡越大的群體越易發(fā)生多重HPV感染.

表2 不同年齡段HRHPV感染模式

3 討論

HPV的感染概率、感染型別與模式特征具有地域性差異.關(guān)于女性HPV感染率，多省市統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示疑似感染女性的HRHPV感染率為23.20%[7]，而湖北地區(qū)門診女性陽性率為17.29%(1 557例/9 007例)[8].在本次調(diào)查分析中，荊州地區(qū)就診女性HRHPV檢出率(20.64%)略低于全國水平，高于湖北地區(qū)水平(χ2=19.69，P<0.01).關(guān)于湖北地區(qū)的HPV總感染率，徐萬州等[9]調(diào)查發(fā)現(xiàn)湖北地區(qū)HPV感染率為21.23%(高于全球HPV的平均感染率為10.5%[10])，不同年齡群體間HPV感染率存在一定差異，具體表現(xiàn)為隨年齡增加HPV感染率呈現(xiàn)降低趨勢，且以單一型感染為主.此外，湖北省不同地區(qū)的HPV感染特點(diǎn)也存在一定的差異，如秦豫培等[11]通過收集湖北十堰地區(qū)87例食管鱗癌組織和50例對(duì)照組食管組織，實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測組織中 HPV16 感染率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HPV16感染與食管鱗癌的發(fā)展之間顯著相關(guān)，但其與食管鱗癌患者的臨床病理特征之間關(guān)系不顯著.魏英等[12]調(diào)查發(fā)現(xiàn)湖北十堰地區(qū)的女性HPV感染率比較居中，以單一高危感染為主，HPV52、16、58型為前三大常見感染亞型，且各年齡段HPV感染率構(gòu)成比呈現(xiàn)“U”型走勢.可見，湖北地區(qū)中HPV16在眾多感染型別中占據(jù)著主要部分.李麗等[13]調(diào)查發(fā)現(xiàn)武漢地區(qū)A9型組HPV感染最易導(dǎo)致宮頸上皮內(nèi)病變.汪明等[14]調(diào)查發(fā)現(xiàn)湖北地區(qū)的宮頸疾病患者HPV感染率較高且其分布具有一定特點(diǎn).可見，湖北各地區(qū)HPV感染特點(diǎn)既存在共性也存在地區(qū)差異特點(diǎn).

優(yōu)勢型別特點(diǎn)方面.荊州地區(qū)2002至2010年間HPV感染調(diào)查顯示，HPV16與HPV18在女性中檢出率為14.79%(138例/933例)[15].本研究中多型別檢出率高于以往報(bào)道(χ2=32.57，P<0.01)，提示HPV16與HPV18型外的HRHPV型別感染檢測不容忽視.15種HRHPV基因分型檢測能顯著提高檢出率，有利于本地區(qū)HRHPV的流行監(jiān)測與防控.荊州地區(qū)就診女性HRHPV感染的優(yōu)勢型別為HPV52、HPV58、HPV16、HPV39與HPV68，與武漢地區(qū)優(yōu)勢型別(HPV16、HPV52、HPV58、HPV53與HPV18)略有差異[8]，以及與十堰地區(qū)的HPV感染型別[12]也存在一定的差異.HPV39和HPV68與本地區(qū)女性宮頸病變的相關(guān)性需要后續(xù)關(guān)注和研究.

感染模式特征方面.荊州本地門診女性單一感染占14.11%(519例)，多重感染占6.53%(240例)，本地區(qū)多重感染比率高于前期文獻(xiàn)報(bào)道(χ2=22.46，P<0.01).周漫等[8]報(bào)道的湖北地區(qū)HRHPV感染模式為單一型別感染占13.40%(1207例)，多重型別感染占3.89%(350例).另一方面，雙重感染中HPV52+HPV68檢出率最高，三重感染中HPV52+HPV58+HPV68檢出率最高，HPV混合感染是否對(duì)特定型別具有一定的偏好性，需要后續(xù)擴(kuò)大檢測基數(shù)進(jìn)一步分析.HRHPV的混合感染與惡性宮頸病變的關(guān)系尚存在爭議.李松等[16]報(bào)道50歲以上CIN高分期(III-IV期)、鱗癌及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的HPV多重感染率更高.而在高愛華等[17]進(jìn)行的宮頸癌患者HPV多重感染病原學(xué)特征分析顯示不同分期、病理分型、組織分化以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況下，HPV的單一感染與多重感染間并無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異.本地區(qū)HRHPV多重感染與宮頸癌疾病進(jìn)展的相關(guān)性有待進(jìn)一步研究.

年齡特點(diǎn)差異方面.國內(nèi)多省市HRHPV感染分析顯示女性HRHPV的感染一般存在兩個(gè)峰值，不同地域峰值出現(xiàn)的年齡段略有差異[18-20].湖北武漢地區(qū)的兩個(gè)峰值出現(xiàn)在30歲以下組和51～60歲組[8].但本次研究中HRHPV感染的峰值出現(xiàn)在60～69歲，年輕女性(≤29)的感染率甚至略低于總體感染率.綜合荊州地區(qū)優(yōu)勢型別與年輕女性組未表現(xiàn)出高感染率的特征.這種差異可能源自地域性差異，HPV主要通過性活動(dòng)進(jìn)行傳播[21].相比較于一線城市，荊州地區(qū)30歲以下人群比例較少且年輕人的性活躍度也比較低，所以年輕女性表現(xiàn)出較低的HRHPV感染率.

綜上所述，HPV52與HPV58是荊州地區(qū)女性HRHPV感染主要優(yōu)勢型別，感染模式以單一型別感染多見.年齡與HRHPV的陽性率和多重感染正相關(guān).