陳一君，韋麗麗，唐蘭艷

（廣西壯族自治區(qū)生殖醫(yī)院，廣西 欽州 530021）

0 引言

地中海貧血又稱珠蛋白生成障礙性貧血，非典型地中海貧血?jiǎng)t是指患者病情表現(xiàn)與地中海貧血相似、但病理變化存在差異且缺乏普遍性的疾病癥狀。非典型地中海貧血對(duì)患者生活存在明顯影響，亦可惡化引發(fā)其他疾病，臨床主張給予對(duì)癥治療，這對(duì)疾病的診療技術(shù)提出了較高要求[1]。此前學(xué)者分析指出，常規(guī)基于熱點(diǎn)突變進(jìn)行分析研究，難以完全滿足所有患者的治療需要，針對(duì)基因進(jìn)行的非熱點(diǎn)突變?cè)u(píng)估，能夠彌補(bǔ)常規(guī)診療技術(shù)的不足，提升工作效果，其典型方式之一為HBB 基因測(cè)序[2]。為獲取可行的工作方法，了解非典型地中海貧血HBB 基因測(cè)序作用以及非熱點(diǎn)突變的基本態(tài)勢(shì)，選取我院收治的206 例非典型地中海貧血患者，進(jìn)行研究如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料。于我院2012 年1 月至2019 年1 月收治的非典型地中海貧血患者中，選取206 例作為對(duì)象，包括男104例，女102 例；年齡11-63 歲，平均（40.3±8.6）歲。研究經(jīng)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者和家屬知情同意，簽署知情同意書。納入標(biāo)準(zhǔn)：患者臨床符合《地中海貧血診療指南》（2012）中的疾病描述標(biāo)準(zhǔn)（紅細(xì)胞體積不大于79 fl、紅細(xì)胞蛋白濃度不小于300 g/L、紅細(xì)胞血紅蛋白含量不大于28 pg）。排除標(biāo)準(zhǔn)：患者合并其他血液系統(tǒng)疾病；患者合并出血性疾?。换颊吆喜⒀涸偕惣膊?。

1.2 方法。取EDTA-K2 抗凝靜脈血2 mL，借助PCR-反向斑點(diǎn)雜交法進(jìn)行分析。去除特異性較高的患者，將檢測(cè)結(jié)果中，HbA2 分布處于2.5%-3.5%之間的患者篩出，進(jìn)行二次分析。取探針，點(diǎn)觸硝酸纖維素膜，對(duì)所有探針進(jìn)行編號(hào)，對(duì)待測(cè)血液樣本進(jìn)行PCR 特意性擴(kuò)增，對(duì)生物素進(jìn)行標(biāo)記。使完成編號(hào)的探針與待測(cè)血液樣本進(jìn)行雜交。獲取具有同源序列特點(diǎn)的樣本，進(jìn)行編號(hào)和記錄。對(duì)未完成結(jié)合的血液樣本進(jìn)行洗滌處理，同步對(duì)上述所有樣本進(jìn)行液相顯色分析，統(tǒng)計(jì)非熱點(diǎn)突變的發(fā)生率和類別、占比[3]。

1.3 觀察指標(biāo)。借助PCR-反向斑點(diǎn)雜交法進(jìn)行血紅蛋白基因突變率統(tǒng)計(jì)，了解常見突變類型、占比情況。

2 結(jié)果

2.1 非熱點(diǎn)突變患者數(shù)。HbA2 分布處于2.5%-3.5%之間的患者共92 例，占比44.66%（92/206）。HBB 基因測(cè)序見非熱點(diǎn)突變27 例，占比29.35%（27/92），詳見表1。

表1 非熱點(diǎn)突變患者數(shù)[n（%）]

2.2 非熱點(diǎn)突變類別和占比。非熱點(diǎn)突變類別包括多個(gè)類型，占比也有所不同，見表2。

表2 非熱點(diǎn)突變類別和占比[n（%）]

3 討論

非典型地中海貧血一般納入地中海貧血的分析范疇，患者病情相對(duì)特殊，因此治療又需要強(qiáng)調(diào)針對(duì)性，對(duì)診斷和疾病分析能力提出了較高要求。此前學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，非典型地中海貧血基因熱點(diǎn)突變總數(shù)相對(duì)較多，達(dá)到70%左右，非熱點(diǎn)突變的發(fā)生率在30%左右[4]。我院研究結(jié)果與此相似，共27 例非典型地中海貧血患者符合非熱點(diǎn)突變標(biāo)準(zhǔn)，占比29.35%。非熱點(diǎn)突變類別方面，

我院研究中，因選例較少，共發(fā)現(xiàn)7 大類突變，第七類中又包括三個(gè)小類，均為1 例。其他非熱點(diǎn)突變中，c.341T＞A（p.Va114Glu）、c.170G＞A（p.Gly57Asp）、c.68A＞G（p.Glu23Gly）占比較大，分別為25.93%、18.52%、18.52%。進(jìn)一步對(duì)相關(guān)信息進(jìn)行評(píng)估，可發(fā)現(xiàn)上述各類患者接受HBB 基因測(cè)序時(shí)，均可見不同程度的血糖蛋白異常，從病理變化的角度上看，非典型地中海貧血患者的基因是否出現(xiàn)突變，直接影響其珠蛋白鏈的分子結(jié)構(gòu)，換言之，所有非典型地中海貧血患者均可見血紅蛋白的異常[4]。

在HBB 基因測(cè)序中，可發(fā)現(xiàn)非典型地中海貧血患者自雙目雙方繼承的α 珠蛋白基因均為2 個(gè)，其排列特點(diǎn)為αα/αα；β 珠蛋白基因均為1 個(gè)，其排列特點(diǎn)為β/β，上述任何珠蛋白基因出現(xiàn)突變，均可影響數(shù)目龐大的機(jī)體細(xì)胞連鎖反應(yīng)，導(dǎo)致部分蛋白鏈缺失問題，其中較為多見的為單方α 珠蛋白基因缺陷，其次為雙方α 珠蛋白基因缺陷，單方β 珠蛋白基因缺陷、雙方β 珠蛋白基因缺陷以及其他珠蛋白基因出現(xiàn)缺陷的可能性較低，具體表現(xiàn)為α 型、β 型、δβ 型和δ 型等等。接受HBB 基因測(cè)序的過程中，液相顯色、氣相顯色均強(qiáng)調(diào)對(duì)基因排列缺陷的捕捉，每一類缺陷在基因?qū)用婢胁煌尸F(xiàn)[5]。

因β 型珠蛋白基因缺陷導(dǎo)致的非典型地中海貧血患者，在HBB 基因測(cè)序中，可見c.341T＞A（p.Va114Glu）、c.170G＞A（p.Gly57Asp）、c.68A＞G（p.Glu23Gly）等非熱點(diǎn)突變，提示在基因遺傳過程中，父母雙方或單方基因出現(xiàn)了較常規(guī)地中海貧血更復(fù)雜的變化，也可能與胎兒發(fā)育過程中母體因素的異常相關(guān)。上述病變往往可見分子層面的多樣變化，且病理變化過程復(fù)雜多樣，可能出現(xiàn)的不同突變態(tài)勢(shì)超過100種，少數(shù)患者亦可因此出現(xiàn)基因完全缺失情況。部分患者見c.22G＞A（p.Glu8Lys）、c.75C＞G、c.50G＞A（p.Gly17Asp）和其他非熱點(diǎn)突變，一般認(rèn)為與α 珠蛋白生成障礙存在關(guān)聯(lián)，大部分患者可見α 珠蛋白基因的缺陷，極少數(shù)患者可見α珠蛋白基因缺失，提示患者可能存在基因點(diǎn)突變情況[6]。

綜上所述，非典型地中海貧血HBB 基因測(cè)序可發(fā)現(xiàn)非熱點(diǎn)突變信息，類別較多且多與血紅蛋白變異存在直接關(guān)聯(lián)。后續(xù)工作中，可針對(duì)血紅蛋白變異情況進(jìn)行非典型地中海貧血病情分析，結(jié)合分析結(jié)果給予對(duì)癥干預(yù)。