浙江大學醫(yī)學院 （浙江 杭州 310000）

內(nèi)容提要： 目的：對2種國產(chǎn)甲型、乙型流感病毒核酸聯(lián)合檢測試劑盒進行質(zhì)量評估。方法：應用甲/乙型流感病毒核酸檢測試劑國家參考品和臨床樣本，按照各自試劑盒說明書方法進行檢測。結果：2種試劑盒特異性、最低檢出限及精密度均符合國家參考品要求。2種試劑盒臨床樣本檢測一致性好。結論：2種甲型、乙型流感病毒核酸聯(lián)合檢測試劑盒性能可靠，具有臨床應用價值。

流感病毒屬正黏病毒科，含甲型、乙型和丙型3個屬。甲型流感病毒在多種動物中傳播，導致其變異性強，易引起大規(guī)模甚至世界范圍內(nèi)的流行。乙型流感病毒在自然情況下只感染人，一般散發(fā)或小流行。丙型流感病毒常感染兒童，多呈散發(fā)。流感病毒引起的流行性感冒一般屬自限性疾病，但在高危人群中會引起嚴重后果，新型流感病毒也會引起大規(guī)模流行或較高致死率[1,2]。因此，對流感病毒快速、準確的診斷至關重要。由于具有高靈敏度、快速等優(yōu)點，PCR技術被廣泛應用于病原體的診斷，目前市場上，已有基于實時熒光PCR方法來檢測流感病毒核酸的試劑盒。中國食品藥品檢定研究院也于2015年發(fā)布了甲/乙型流感病毒核酸檢測試劑國家參考品，用于該類產(chǎn)品申報注冊證的注冊檢驗[3]。本研究通過檢測國家參考品和臨床樣本，比較了2種甲型、乙型流感病毒核酸聯(lián)合檢測試劑盒（熒光PCR法）的性能，評估了該2種試劑盒的臨床應用價值。

1.材料與方法

1.1 一般材料

甲/乙型流感病毒核酸檢測試劑國家參考品：由中國食品藥品檢定研究院制備的甲/乙型流感病毒核酸檢測試劑國家參考品。618例咽拭子樣本，來自浙江大學醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院（2018.4～2019.4）。

試劑：甲型/乙型流感病毒核酸檢測試劑盒（熒光PCR法），來自A和B兩個廠家。

1.2 方法

檢測方法參照國家參考品說明書，采用試劑盒說明書中推薦的相應核酸提取試劑盒提取核酸，按照各自程序及適用機型（ABI7500）進行PCR擴增分析和陰陽性的判斷。臨床樣本檢測參照試劑盒說明書進行。

1.3 統(tǒng)計學分析

采用Kappa檢驗分析2種試劑盒臨床樣本檢測效果。

2.結果

2.1 國家參考品的檢測結果

應用2種試劑盒對6份陽性參考品、6份陰性參考品、2份精密度參考和5份最低檢測限參考品進行檢測。結果顯示，兩種試劑盒的陽性符合率和陰性符合率均為100%。A試劑盒和B試劑盒對乙型流感病毒精密度參考品Ct值的變異系數(shù)分別為0.51%和0.77%，對甲型流感病毒精密度參考品檢測結果的變異系數(shù)分別為0.62%和1.43%。2種試劑盒的檢出限均符合國家參考品的要求，具體為：S1，2.1×103TCID50/L；S2，2.0×103TCID50/L；S3，2.5×10 TCID50/L；S4，2.1×103TCID50/L和S5，9.8×10 TCID50/L。

2.2 臨床樣本檢測結果

采用2種試劑盒分別對618例咽拭子樣本進行檢測，結果見表1和表2。從結果可以看出，兩種試劑盒的陽性符合率、陰性符合率和總體符合率均在95%以上，Kappa值＞0.95，表明2種試劑盒一致性強。

表1.2種試劑盒對甲型流感病毒核酸檢測結果

3.討論

本研究通過檢測甲/乙型流感病毒核酸檢測試劑國家參考品和臨床樣本，評估2種甲型、乙型流感病毒核酸檢測試劑盒（熒光PCR法）的檢測效果。結果顯示，2種試劑盒在特異性、精密度和最低檢出限等方面均能符合國家參考品的要求。在臨床樣本檢測方面，共發(fā)現(xiàn)甲型流感病毒有9例不一致樣本，乙型流感病毒有3例不一致樣本，分析不一致樣本Ct值發(fā)現(xiàn)，其Ct值均鄰近試劑盒的cutoff值，表明樣本中核酸濃度較低，推測由于取樣隨機性導致檢測結果不一致。

流感病毒易引起流行，危害公共健康，快速準確的診斷對該病毒的控制至關重要。病毒培養(yǎng)方法對操作要求高且費時，不利于在流行期做出快速診斷?；诳乖脑\斷方法快速，但容易出現(xiàn)漏檢，Maciej等[4]比較試紙條和PCR對甲乙型流感病毒的檢測效果發(fā)現(xiàn)，PCR方法的靈敏度和特異度均優(yōu)于試紙條法。近年來，PCR技術已被廣泛應用于病原體的診斷，針對流感病毒的PCR檢測體系的研究較多，同時也有取得第三類體外診斷試劑注冊證的商業(yè)化試劑盒，但多為檢測甲型流感病毒的試劑盒[5,6]。李健等[7]研究顯示，目前國內(nèi)外甲型流感病毒核酸檢測試劑盒的效果無明顯差異，說明國內(nèi)針對PCR檢測流感病毒核酸的試劑盒研制水平與國際持平。Zimmerman等[8]比較單重PCR和多重PCR在檢測甲乙型流感病毒方面的效果，發(fā)現(xiàn)兩種方法無明顯差異。而多重PCR較單重PCR而言，只需要進行一次PCR反應，節(jié)約了操作時間和試劑成本，在一定程度上減輕了患者的負擔。高通量測序和數(shù)字PCR技術也被用于流感病毒的檢測，但這兩種技術的成本限制了其在臨床上的應用[9,10]。

本文研究結果表明，2家甲型和乙型流感病毒核酸聯(lián)合檢測試劑盒無明顯差異，一致性好，均可用于臨床流行性感冒患者或疑似患者的輔助診斷。