楊 萍，魯 松，劉 萍，張 蘭

(1.首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院 藥學(xué)部，北京 100053；2.遵義醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院，貴州 遵義 563099)

認知障礙(Cognitive impairments,CI)泛指各種原因?qū)е碌母鞣N程度的認知功能損害，包括輕度認知功能損害(Mild cognitive impairments,MCI)及癡呆[1]，焦慮和抑郁為其常見的精神行為癥狀。流行病學(xué)研究顯示，認知障礙患者基數(shù)大、增長率高，MCI在老年人(年齡≥65歲)中的患病率已然達到3%～19%不等，且超過一半的患者在5年內(nèi)會進展為癡呆，預(yù)計至2025年，世界癡呆人數(shù)將達1.3150億[2-3]。在我國，CI形勢更為嚴峻，由于我國社會結(jié)構(gòu)進入加速老齡化階段，這種長期慢性疾病給患者、家庭及社會均帶來巨大的經(jīng)濟和精神負擔(dān)。因此，CI的治療是非常有必要的，早期發(fā)現(xiàn)并有效治療MCI對延緩或避免認知障礙的惡化具有重要的社會意義和經(jīng)濟價值[4]。

逍遙丸，被贊為婦科圣藥，出自宋代《太平惠民和劑局方》，該方配伍嚴謹，其中柴胡為君藥，功能疏肝、鎮(zhèn)靜、開解郁氣、解除胸悶；當歸、白芍為臣藥，當歸活血補血、調(diào)經(jīng)止痛，白芍柔肝止痛、平抑肝陽、斂陰收汗、養(yǎng)血調(diào)經(jīng)；白術(shù)、茯苓、甘草、薄荷共為佐藥，白術(shù)補脾益胃和中、燥濕利尿消腫，茯苓健脾滲濕止瀉、養(yǎng)心寧心安神，甘草益氣補脾和胃，薄荷疏散郁遏之氣，諸藥共奏疏肝理氣健脾、益氣養(yǎng)血調(diào)經(jīng)之功效，臨床適應(yīng)癥多達165種，包括精神科、神經(jīng)科、內(nèi)分泌科、婦科等科目的病種[5]。李賽[6-8]等通過實驗發(fā)現(xiàn)，逍遙丸單用或聯(lián)合其他藥物治療抑郁癥或抑郁傾向有明確療效。李萍[9]等也通過實驗證實，逍遙丸不僅能改善患者焦慮狀態(tài)，還能減少其它合用藥物的不良反應(yīng)發(fā)生率。其作用機制包括降低腦內(nèi)5-羥色胺、多巴胺含量；升高海馬腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)，保護海馬區(qū)的神經(jīng)等。

目前，認知障礙以藥物治療為主，能夠有效延緩疾病進展，但大多僅能作用于單靶點，認知損害的機制復(fù)雜，往往引起的是全身的病理改變，單靶點藥物療效有限，其局限性有目共睹。多靶點治療通過多個作用機制控制疾病發(fā)展，與單靶點藥物相比，多靶點藥物可以增強藥理、減少耐藥性及增加患者依從性等，顯示出良好的應(yīng)用前景[10]。中藥及其復(fù)方具有多成分、多途徑、多靶點協(xié)同作用的特點，或可成為CI治療的有效途徑，但深受CI相關(guān)研究現(xiàn)狀和中藥作用復(fù)雜性的限制。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)從整體出發(fā)，系統(tǒng)地分析藥物與疾病，運用“活性成分-靶標-作用機制”的方式將成分多樣的藥物和因素復(fù)雜的疾病形成網(wǎng)絡(luò)以分析[11]，為當前研究提供了新思路。本研究從網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的角度出發(fā)，探討中藥復(fù)方成分和疾病機制、研究藥物與疾病之間的作用通路，以促進逍遙丸的作用機制的研究，為CI的研究路線提供參考，為進一步研究逍遙丸治療CI提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 逍遙丸作用靶標預(yù)測 中藥系統(tǒng)藥理學(xué)分析平臺(Traditional Chinese Medicines Systems Pharmacology,TCMSP,http://tcmspw.com/tcmsp.php)是一個獨特的中草藥系統(tǒng)藥理學(xué)平臺，共包含499味草藥(中國藥典2010版)以及每位草藥的活性化合物成分(共計29 000余個)，針對每個化合物提供了較全面的人體吸收、分布、代謝、排泄(ADME)性質(zhì)評價數(shù)據(jù)，并給出涉及口服生物利用度(oral bioavailability,OB)、藥物相似度(drug like,DL)、腸上皮通透性、血腦屏障、水溶性等天然化合物的藥代動力學(xué)特性,其中，OB和DL是化合物能否發(fā)展為藥物的重要指標。TCMSP能捕捉藥物、靶標和疾病之間的關(guān)系，提供潛在活性分子的靶標及其疾病信息，形成針對每位草藥的活性成分-靶標-疾病網(wǎng)絡(luò)。將逍遙丸的中藥成分柴胡、當歸、白芍、白術(shù)、茯苓、甘草、薄荷、生姜分別輸入TCMSP，獲取、整合活性成分，查詢其對應(yīng)的靶標蛋白，并在Universal Protein(Uniprot,https://www.uniprot.org/)數(shù)據(jù)庫查詢靶標蛋白的基因名稱，選擇生物物種為homo sapiens(human)。

1.2 認知障礙靶標預(yù)測 利用GeneCards(https://www.genecards.org)和Online Mendelian Inheritance in Man(OMIM,https://omim.org/)在線數(shù)據(jù)庫，以“cognitive impairment”為關(guān)鍵詞獲取認知障礙蛋白靶基因，選擇生物物種為homo sapiens(human)。

1.3 逍遙丸和認知障礙交集靶基因 將以上所得的藥物和疾病基因名稱導(dǎo)入Venn(bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn)在線工具映射篩選出兩者共同的基因名稱，此即為逍遙丸治療認知障礙可能的作用靶點。

1.4 蛋白相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將交集基因輸入STRING(https://string-db.org)在線數(shù)據(jù)庫的“Multiple proteins”檢索框，選擇Organism為“Homo sapiens”，最低相互作用得分設(shè)定為0.98、并隱藏斷開連接的節(jié)點，得到蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)(PPI)，通過barplot尋找核心基因，連接數(shù)越多的基因在網(wǎng)絡(luò)中越關(guān)鍵，限于篇幅，此處僅展示連接數(shù)排名前20的基因，借助 Cytoscape 3.6.1軟件獲取可視化結(jié)果，并將節(jié)點設(shè)置為不同的顏色以便于觀察。

1.5 基因本體論(GO)分析 使用Cytoscape 3.6.1軟件的BiNGO插件進行交集靶基因GO富集分析。

1.6 KEGG通路富集分析 生物信息注釋數(shù)據(jù)庫(DAVID,https://david.ncifcrf.gov/)可用于交集靶基因KEGG通路富集分析，通過富集分析的功能條目，考察中藥的潛在靶標可能具有的生物學(xué)功能及參與的生物學(xué)通路，進而得到逍遙丸治療認知障礙的主要作用通路。

2 結(jié)果

2.1 藥物-疾病靶基因預(yù)測結(jié)果 OB值是衡量藥物體內(nèi)藥代動力學(xué)過程及成藥性的重要參數(shù)，DL值代表其成分和已知藥物化學(xué)結(jié)構(gòu)的相似度，對分析中藥是否含有對機體產(chǎn)生活性成分有重要參考價值[12]，在網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)中一般采用“OB>30%且DL>0.18”為篩選條件，在此條件下篩選的活性成分更具有參考意義[13-14]。將逍遙丸各中藥名字分別輸入TCMSP數(shù)據(jù)庫，設(shè)置OB>30%且DL>0.18，得到逍遙丸各中藥成分的活性化合物個數(shù)如下：白芍13個、白術(shù)7個、薄荷10個，柴胡20個，當歸2個，茯苓15個，甘草91個，生姜5個，共163個，經(jīng)Uniprot轉(zhuǎn)換并最終得出基因名的為115個，見表1。從GeneCards和OMIM數(shù)據(jù)庫獲取認知障礙的蛋白靶基因，對于重復(fù)的靶基因則僅保留1個，共7084個。疾病和藥物交集基因共100個，詳見表2，并以Venn圖展示(見圖1)。

表1 逍遙丸活性成分調(diào)控體內(nèi)基因名稱

成分白芍、白術(shù)、薄荷、柴胡、當歸、茯苓、甘草、生姜靶基因BCL2 F7 CYP1A1 HTR3A CHRM1 GSTP1 ADRA1A AHR NFE2L2 CHRM4 LDLR OLR1 VEGFA MYC GSK3B MDM2EGFR ERBB2 NCOA1 CHEK2 PGR RUNX2 TYR DIO1 RASA1CHRM3NFKBIA IGFBP3 PTGER3 IRF1 ACACA PON1CHEK1SELE CASP7 ACHE IL6 CASP3 PRKCE COL3A1 MGAM AHSA1 NQO1 ERBB3 FOS CAV1 HIF1A RELA SLC2A4 NOS3AKR1C3 AR RASSF1 CYP3A4 APP PRSS1 RXRB HSPB1 CHRM5 CRP CHRNA2 NR1I3 RUNX1T1 CCND1 ESR1 PORGABRA1 NR3C2 GSTM1 IKBKB MAPK8 RB1 CASP9 AKR1C1ABCC1 SREBF1 ESR2 CYP1B1 PLAU ALOX5 DUOX2 CASP8APOB PPARG RAF1 PCNA CTSD PARP1 IGF2 NPEPPS ICAM1ABAT HSF1 CHRM2 VCAM1 ADH1B PTGS1 PRKCA TP63GRIA2 CCNB1 EIF6 MCL1 ELK1 DCAF5 BIRC5 PSMD3 NUF2 AKR1B1 NCOA2 GSTM2 CTRB1 FASN MTTP HK2

表2 逍遙丸活性成分調(diào)控體內(nèi)基因與疾病靶基因交集基因名稱

交集逍遙丸調(diào)控基因認知障礙靶基因PTGS1 PGR NR3C2 NCOA1 PLAU CHRM3 APP ADRA1A RELA ERBB2 RASSF1 CHRM5 RB1 HTR3A ICAM1 AKR1C1 DIO1 CASP9 MGAM CHEK1 CHRM1 CHRM2 GABRA1 ESR1 AR PPARG PRSS1 ACHE IKBKB BCL2 AHSA1 CASP3 MAPK8 CYP3A4 CYP1A1 VCAM1 CYP1B1 ALOX5 GSTP1 AHR SLC2A4 NR1I3 AKR1C3 ESR2 GSK3B EGFR VEGFA CCND1 FOS TP63 NFKBIA CASP8 RAF1 PRKCA HIF1A RUNX1T1 ACACA CAV1 MYC PTGER3 DUOX2 NOS3 HSPB1 NFE2L2 PARP1 COL3A1 CHEK2 HSF1 CRP RUNX2 IGFBP3 IGF2 IRF1 ERBB3 PON1 NPEPPS RASA1 OLR1 CHRM4 CHRNA2 LDLR APOB SREBF1 ABCC1 ABAT PRKCE PCNA MDM2 CASP7 TYR ADH1B F7 RXRB POR SELE GSTM1 IL6 NQO1 CTSD GRIA2

圖1 逍遙丸與認知障礙交集基因Venn圖

2.2 構(gòu)建逍遙丸與認知障礙藥物-靶點-疾病網(wǎng)絡(luò) PPI網(wǎng)絡(luò)如圖2，不同顏色的線條表示不同的相互作用類型。通過barplot統(tǒng)計各節(jié)點的連接節(jié)點數(shù)，越多則該節(jié)點在網(wǎng)絡(luò)中的作用越關(guān)鍵，見圖3，由圖可知，APP、EGFR、ESR1、RELA、FOS、NCOA1、CCND1、MAPK8、IL6、PRKCA、CASP8、APOB、AR、CASP3、CYP1A1、RB1、ERBB2、MDM2、MYC、VEGFA、CHRM2、GSK3B、IKBKB、PPARG、BCL2、HIF1A、IGFBP3、NOS3、PGR、ADRA1A是逍遙丸治療認知障礙最可能的作用靶點。下載PPI網(wǎng)絡(luò)的tsv格式文件，并導(dǎo)入 Cytoscape 3.6.1 軟件，得到更加簡潔、清晰的藥物-靶點-疾病網(wǎng)絡(luò)，圖中綠色菱形節(jié)點代表認知障礙、熒光藍三角形節(jié)點代表藥物-疾病交集靶基因、紫色六邊形節(jié)點代表逍遙丸、桔色長方形節(jié)點代表藥物活性成分(見圖4)。

圖2 逍遙丸和認知障礙蛋白相互作用

圖3 逍遙丸和認知障礙蛋白相互作用barplot統(tǒng)計結(jié)果

2.3 藥物-疾病交集靶基因GO分析結(jié)果 為了進一步闡明候選靶點的可能作用，使用Cytoscape 3.6.1軟件的BiNGO插件對逍遙丸治療認知障礙的100個交集靶點進行GO富集分析，其中significance level設(shè)置為1.0×10-8以體現(xiàn)富集程度較高的靶點；ontology fill選擇GO-Full，意為在結(jié)果中體現(xiàn)出GO富集分析的生物途徑、分子功能和細胞定位3個方面的內(nèi)容；Organism/annotation選擇Homo sapiens。所得圖形顏色深淺表示富集程度，顏色越深富集水平越高；圖形大小代表富集的基因多少，越大則富集在上面的基因越多(見圖5)。結(jié)果中還報告了交集基因在體內(nèi)過程中的具體富集情況，P值越小則富集程度越高，在此按照P值從小到大進行排列，展示排名前10的逍遙丸治療認知障礙可能涉及的體內(nèi)過程及相應(yīng)參與的交集基因。根據(jù)結(jié)果認為逍遙丸治療認知障礙可能是基于積極調(diào)控生物過程，調(diào)節(jié)細胞增殖、凋亡，調(diào)節(jié)細胞信號傳輸、代謝等過程(見表3)。

圖5 逍遙丸治療認知障礙藥物-疾病交集靶基因GO分析

表3 交集靶基因生物過程富集情況

GO分析結(jié)果說明P基因responsetochemicalstimu-lus1.36×10-31CHRM4HSPB1ABATAHRSLC2A4ADRA1AIKBKBCASP8CCND1PLAUMYCCASP3CYP1B1OLR1ABCC1PARP1PRKCAFOSARF7PPARGPCNAPON1CYP3A4HIF1AACACARELAEGFRPTGS1MAPK8ERBB3ALOX5ERBB2HSF1APOBLDLRDUOX2NQO1VCAM1NOS3CAV1AKR1C1IGF2ESR1SELEESR2VEGFANFKBIAIL6COL3A1BCL2CYP1A1NFE2L2positiveregula-tionofbiologi-calprocess8.08×10-25RB1CHRM3APPACHEGSK3BCHRM1AHRADRA1AICAM1RASSF1CASP8CCND1MYCCHEK2CASP3TP63SREBF1IGFBP3PRKCEPRKCAFOSARF7IRF1RASA1PGRPPARGCRPPTGER3PON1HIF1ARELAEGFRPTGS1MAPK8ERBB3ALOX5ERBB2HSF1APOBNQO1VCAM1NOS3CAV1IGF2ESR1SELEESR2VEGFANFKBIAIL6BCL2CYP1A1MDM2NFE2L2responsetoor-ganicsubstance1.42×10-24PCNACHRM4HSPB1ABATSLC2A4ADRA1AACACARELAEGFRPTGS1CASP8CCND1ERBB3CASP3ERBB2HSF1CYP1B1APOBLDLRDUOX2PARP1NOS3CAV1IGF2PRK-CAFOSESR1SELEESR2NFKBIAARF7IL6COL3A1BCL2CYP1A1PPARGNFE2L2responsetostimulus3.06×10-24CHRM2APPACHEGSK3BCHRM4HSPB1ABATAHRSLC2A4ADRA1AICAM1IKBKBRASSF1CASP7CASP8CCND1PLAUMYCCHEK2CASP3CHEK1CYP1B1OLR1CTSDTP63SREBF1ABCC1PARP1AHSA1PRKCAFOSARF7PPARGCRPPCNAPON1CYP3A4HIF1AACACARELAEGFRPTGS1MAPK8ERBB3ALOX5ERBB2HSF1APOBLDLRDUOX2NQO1VCAM1NOS3CAV1AKR1C1IGF2ESR1SELEESR2VEGFANFKBIAIL6COL3A1BCL2CYP1A1NFE2L2responsetostress1.43×10-22CRPACHEGSK3BPCNAHSPB1ABATAHRHIF1AADRA1ARELAEGFRPTGS1RASSF1MAPK8CASP8CCND1ERBB3PLAUCHEK2CASP3ALOX5CHEK1ERBB2HSF1OLR1CTSDTP63DUOX2SREBF1NQO1VCAM1PARP1NOS3CAV1AHSA1PRKCAFOSSELEESR2VEGFAARF7IL6COL3A1BCL2CYP1A1PPARGNFE2L2biologicalregu-lation5.91×10-22CHRM2RB1CHRM3APPACHEGSK3BCHRM1CHRM4CHRM5HSPB1ABATAHRSLC2A4ADRA1ANR3C2ICAM1IKBKBCASP9RASSF1CASP8CCND1PLAUMYCCHEK2CASP3CHEK1CYP1B1TP63SREBF1PARP1IGFBP3PRKCEDIO1PRKCAFOSRUNX2ARF7PORIRF1RASA1PGRPPARGRAF1CRPGRIA2CHRNA2PCNAGSTP1NR1I3PTGER3PON1CYP3A4HIF1AACACARELAEGFRPTGS1RXRBMAPK8ERBB3ALOX5ERBB2HSF1APOBLDLRDUOX2RUNX1T1NQO1VCAM1NOS3CAV1AKR1C1IGF2ESR1SELEESR2VEGFANFKBIAIL6COL3A1BCL2CYP1A1MDM2NFE2L2regulationofcellprolifera-tion1.26×10-19RB1CHRM1HIF1AADRA1ARELAEGFRPTGS1CCND1ERBB3PLAUMYCCASP3CHEK1ERBB2HSF1TP63VCAM1NOS3IGFBP3CAV1IGF2PRKCAESR1ESR2VEGFANFKBIAARIL6BCL2MDM2PGRPPARGRAF1positiveregula-tionofcellularprocess9.45×10-18RB1APPACHECHRM1AHRHIF1AADRA1ARELAEGFRICAM1RASSF1MAPK8CASP8CCND1ERBB3MYCCHEK2CASP3ERBB2APOBTP63SREBF1NQO1VCAM1IGFBP3PRKCECAV1IGF2PRKCAFOSESR1SELEESR2VEGFANFKBIAARF7IL6IRF1BCL2CYP1A1MDM2PGRPPARGNFE2L2regulationofbi-ologicalquality1.07×10-17RB1APPACHEABATSLC2A4CYP3A4HIF1AADRA1AACACAPTGS1IKBKBRASSF1PLAUMYCCASP3ERBB2CYP1B1APOBLDLRTP63DUOX2PARP1NOS3CAV1AKR1C1DIO1PRKCAESR1ESR2VEGFANFKBIAARF7IL6COL3A1RASA1BCL2CYP1A1MDM2PPARGsignaling9.21×10-17CHRM2RB1CHRM3APPACHEGSK3BCHRM1CHRM4CHRM5ABATADRA1ANR3C2IKBKBRASSF1CCND1PLAUCHEK2CHEK1TP63PRKCEPRKCAHTR3AFOSARPORRASA1PGRPPARGRAF1GRIA2CHRNA2PCNANR1I3PTGER3HIF1ARELAEGFRMAPK8ERBB3ERBB2DUOX2GABRA1NQO1NOS3CAV1IGF2ESR1SELEESR2VEG-FANFKBIAIL6COL3A1NFE2L2

2.4 KEGG通路富集分析 通過DAVID在線數(shù)據(jù)庫結(jié)合R語言行KEGG通路富集分析，預(yù)測逍遙丸治療認知障礙可能的生物途徑，探索其作用機制。結(jié)果以條形圖顯示，且P值由上到下依次減小，詳見圖6。由圖可知，逍遙丸治療認知障礙可能的作用通路主要為AGE/RAGE信號通路、PI3K/Akt信號通路、內(nèi)分泌抵抗信號通路、腫瘤壞死因子信號通路、細胞凋亡信號通路、甲狀腺激素信號通路。

圖6 逍遙丸治療認知障礙藥物-疾病交集靶基因KEGG分析

圖7 逍遙丸細胞凋亡信號通路

圖8 逍遙丸甲狀腺激素信號通路

3 討論

認知障礙發(fā)病原因復(fù)雜，預(yù)后不佳，受到越來越多的關(guān)注。逍遙丸臨床療效確切[15]，廣泛用于包括認知障礙在內(nèi)的多個系統(tǒng)的疾病，但其機制研究較少，尚缺乏系統(tǒng)的討論。進一步研究逍遙丸作用機制，將為臨床推廣使用提供更可靠的依據(jù)。中醫(yī)藥治療強調(diào)辨證論治，中藥作為一個有機整體，效用非單一成分所能及、各味藥之間的作用非簡單機制所能概括，而這也是阻礙其深入研究的關(guān)鍵點。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)從提出開始，就從宏觀出發(fā)，以多成分、多靶點、多途徑的觀點考慮藥物和疾病之間的關(guān)系。主要通過尋找藥物和疾病的共同基因，并從生物途徑、分子功能和細胞定位方面分析藥物作用方式、給出可能的作用通路以預(yù)測藥物作用機制，為中藥的研究開辟了新天地。

本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法對逍遙丸治療認知障礙的機制進行預(yù)測，認為積極調(diào)控生物過程，調(diào)節(jié)細胞增殖、凋亡，調(diào)節(jié)細胞信號傳輸、代謝等過程是逍遙丸在體內(nèi)的主要作用方式，涉及的通路為：(1)AGE/RAGE信號通路、PI3K/Akt信號通路、內(nèi)分泌抵抗信號通路。唐勇等[16]經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)，胰島素抵抗所致的持續(xù)高血糖及糖代謝紊亂會加速晚期糖基化終末產(chǎn)物(advanced glycation end products,AGEs)形成，AGEs與晚期糖基化終產(chǎn)物受體(receptor for advanced glycation end products,RAGE)結(jié)合后，激活包括NF-κB 在內(nèi)的多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，引起多種細胞因子及炎癥因子釋放，引發(fā)氧化應(yīng)激，擴大免疫/炎癥反應(yīng)，從而參與認知障礙形成。而逍遙丸可以增加VEGF的表達，激活PI3K/Akt信號通路[17]。(2)腫瘤壞死因子信號通路。一方面，人類和實驗動物研究比較一致地表明在健康或非感染條件下腦內(nèi)生理水平的 TNF-α 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)參與認知功能調(diào)節(jié)，其活動異常，無論過度或者不足都可能導(dǎo)致認知功能損害[18]，TNF-α的釋放引起胰島素抵抗或可是致病機制之一[19]。而逍遙丸含藥血清可以抑制TNF-α的產(chǎn)生[20]。(3)細胞凋亡通路。抑制細胞凋亡可改善認知障礙[21]，而逍遙丸可以抑制卵巢顆粒細胞凋亡[22]，但尚無具體通路信息，結(jié)合KEGG通路富集分析認為，逍遙丸可通過作用于CASP/PARP、Cathepsin/Bcl2、Raf/IKK/IκBα/NF-κB等細胞凋亡過程以治療認知障礙，詳見圖7。(4)甲狀腺激素信號通路。甲狀腺功能減退(甲減)會導(dǎo)致老年人認知功能障礙[23]，使用左甲狀腺素鈉能夠有效降低抑郁癥患者體內(nèi)同型半胱氨酸(Hcy)及炎性細胞因子(白介素-6(IL-6)及TNF-α)水平,提高患者血清BDNF和葉酸水平,改善患者的漢密爾頓抑郁量表(hamilton depression scale,HAMD)和漢密爾頓焦慮量表(hamilton anxiety scale,HAMA)評分，充分證實了甲狀腺素對于抑郁癥發(fā)生和防治的重要性[24]；張秀琴等[25]經(jīng)試驗證實，逍遙丸能夠穩(wěn)定青年女性無癥狀性橋本甲狀腺炎患者甲狀腺功能，降低TPO-Ab及Tg-Ab水平，但仍未見具體通路研究，KEGG富集分析認為，逍遙丸可能通過作用Raf1/MEK/ERK/ERα、Akt/PKB/GSK-3β、MDM2、Casp9/CyclinD1、HIF1α、c-Myc等甲狀腺激素信號通路過程發(fā)揮治療認知障礙作用，詳見圖8。通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的分析和討論，對逍遙丸靶基因進行全面分析，為深入研究逍遙丸作用機制，精準中藥治療提供重要的理論依據(jù)。

綜上所述，逍遙丸治療認知障礙具有多靶點、多通路的特點。本研究中所得結(jié)果部分為前人研究所證實，在此基礎(chǔ)上又提出了些許新的靶點和通路信息，可以作為后續(xù)研究的參考。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是基于數(shù)據(jù)庫和文獻的研究，因為選擇方法、參數(shù)設(shè)置和計算模型的不完善使得一些作用通路未被選取或一些無關(guān)通路被選取而得到?jīng)]有指導(dǎo)性的結(jié)論，克服這一過程將使其更加完善，為藥物的機制研究甚至新藥研發(fā)、疾病治療更好服務(wù)。