呂偉

（德州職業(yè)技術學院 山東德州 253000）

1 前言

自然界中含有豐富的微生物，其中，大腸菌群可發(fā)酵多種糖類并產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，是人和動物腸道中的棲居菌[1]。大腸桿菌在相當長的一段時間內(nèi)被當作是正常腸道菌群的組成部分、非致病菌。直到20世紀中期，人們才認識到部分特殊血清型的大腸桿菌對人和動物有病原性，尤其對嬰兒和幼畜幼禽，會引起嚴重腹瀉和敗血癥[2]。具有病原性的大腸桿菌包括腸致病性大腸桿菌、腸產(chǎn)毒性大腸桿菌、腸侵襲性大腸桿菌、腸出血性大腸桿菌等[3]。國家標準要求每1 000 mL飲水中不得超過3個大腸菌群；瓶裝汽水、果汁等每100 mL中大腸菌群不得超過5個[4]。

2 材料與方法

2.1 材料與儀器

材料:食品加工實訓室制作的果汁（已開封24h）；月桂基硫酸鹽胰蛋白胨（LST）；三糖鐵（TSI）；無菌水。

儀器與設備:超凈工作臺；高壓蒸汽滅菌鍋；電爐；燒杯；天平；玻璃棒；錐形瓶；試管；小導管；接種環(huán)；生化培養(yǎng)箱。

2.2 實驗方法

2.2.1 準備工作

配制LST培養(yǎng)基分裝至試管，加入小導管，包扎；配制TSI瓊脂培養(yǎng)基分裝至試管中，每支試管加入培養(yǎng)基至試管的1/5，包扎；準備1支10%mL移液管、4支1 mL移液管包扎；3支試管中加入9 mL生理鹽水包扎；準備帶塞的取樣器皿包扎；將上述物品在121℃，15 min條件下滅菌。

2.2.2 取樣

取樣人員雙手消毒，使用75%酒精對樣品外包裝口部進行消毒。用備好的無菌取樣器皿取樣約100mL。

2.2.3 樣品處理

對雙手和工作臺進行消毒，使用10 mL無菌移液管移取25 mL樣品至225 mL無菌緩沖液中搖勻，制成濃度10-1的待測液。用1 mL無菌移液管在10-1待測液中移取1 mL溶液加入9 mL無菌水中搖勻制成濃度為10-2的待測液，同理制成10-3的待測液。將樣品原液、10-1待測液、10-2待測液、10-3待測液、空白作標記備用[5]。

2.2.4 接種

LST接種:LST試管標記，無菌操作分別取空白、原液、10-1、10-2、10-31 mL，加入對應無菌 LST 試管，混勻。 空白、原液、10-1、10-2、10-3各 3 支試管。

TSI接種:滅菌后將試管中的TSI擺斜面，充分凝固后，在試管上做標記。利用劃線法完成對樣品原液、10-1、10-2、10-3樣品稀釋液的無菌操作接種。

2.2.5 培養(yǎng)

將上述接種完成的檢測液與空白試管放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h。

3 結果與討論

3.1 結果分析

通過培養(yǎng)觀察，得到LST培養(yǎng)基發(fā)酵檢測法與TSI培養(yǎng)基生化反應檢測結果（表1～表4）。

表1 LST發(fā)酵、TSI生化檢測原液結果

表2 LST發(fā)酵、TSI生化檢測10-1檢測結果

表3 LST發(fā)酵、TSI生化檢測10-2檢測結果

表4 LST發(fā)酵、TSI生化檢測10-3檢測結果

對相同樣品進行檢測，利用靈敏度=真陽性數(shù)/（真陽性數(shù)+假陰性數(shù)）×100%計算，LST發(fā)酵法的檢測靈敏度平均值63.9%，TSI生化反應法的檢測靈敏度平均值97.2%，詳見表5。

表5 LST發(fā)酵、TSI生化檢測大腸菌群靈敏度檢測結果

3.2 實驗結論

利用LST發(fā)酵法和TSI生化反應法檢測樣品大腸菌群，LST發(fā)酵法的檢測靈敏度平均值為63.9%，TSI生化反應法的檢測靈敏度平均值為97.2%。結果表明，檢測相同濃度樣品，TSI生化反應法的靈敏度高于LST發(fā)酵法。

隨著微生物檢測技術的發(fā)展，越來越多高靈敏度的檢測方法涌現(xiàn)，但傳統(tǒng)方法仍有不可替代的優(yōu)勢。通過對比傳統(tǒng)LST發(fā)酵法與TSI生化法檢驗大腸桿菌的靈敏度，可知TSI生化法的靈敏度更高，具有一定的推廣價值。